Name: chromatin immunoprecipitation (chip) using drosophila tissue
Uploaded: 2012-03-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chromatin Immunoprecipitation ChIP using Drosophila tissue at JoVE.com

Yazarlar sıralama sonuçları sağlayarak yardım ettikleri için Dr Keji Zhao&#39;nun laboratuarı (NIH / NHLBI) teşekkür etmek istiyorum. Biz de eşlenen sıralama okur görselleştirmek için Genom Tarayıcı kullanımı için UCSC genom projesi teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma start-up XC fon NICHD Lucile Parkard Vakfı ve Johns Hopkins Üniversitesi&#39;nden Bağımsızlık Ödülü ve R01HD065816 için R00HD055052 NIH Pathway tarafından desteklenmektedir

(Tüm ChIP prosedürü yaklaşık iki gün sürer. Yüksek verimlilik sıralaması için ChIP kütüphaneler hazırlanması 2-3 gün sürer.) 1. Inceleyin ve ChIP Experiment (~ 1 milyon hücre) için doku hazırlanması <ol><li> Soğuk PBS + 1x proteaz inhibitörleri (7x stok solüsyonu elde etmek için 1.5 ml 1x PBS içinde proteaz inhibitörü kokteyl 1 pelet erimesi) de (Drosophila testislerin örneğin 200 çift) ilgi doku teşrih + PMSF (son konsantrasyonu 10...

<ol>
	<li>Kharchenko, P. V., Alekseyenko, A. A., Schwartz, Y. B., Minoda, A., Riddle, N. C., Ernst, J., Sabo, P. J., Larschan, E., Gorchakov, A. A., Gu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+the+chromatin+landscape+in+Drosophila+melanogaster.">Comprehensive analysis of the chromatin landscape in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 471, 480-485 (2011).</li><li>Filion, G. J., van Bemmel, J. G., Braunschweig, U., Talhout, W., Kind, J., Ward, L. D., Brugman, W., de Castro, I. J., Kerkhoven, R. M., Bussemaker, H. J., van Steensel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+protein+location+mapping+reveals+five+principal+chromatin+types+in+Drosophila+cells.">Systematic protein location mapping reveals five principal chromatin types in Drosophila cells.</a> Cell. 143, 212-224 (2010).</li><li>Barski, A., Cuddapah, S., Cui, K., Roh, T. Y., Schones, D. E., Wang, Z., Wei, G., Chepelev, I., Zhao, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+profiling+of+histone+methylations+in+the+human+genome.">High-resolution profiling of histone methylations in the human genome.</a> Cell. 129, 823-837 (2007).</li><li>Chen, X., Lu, C., Prado, J. R., Eun, S. H., Fuller, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+changes+at+differentiation+gene+promoters+as+they+become+active+in+a+stem+cell+lineage.">Sequential changes at differentiation gene promoters as they become active in a stem cell lineage.</a> Development. 138, 2441-2450 (2011).</li><li>Gonczy, P., Matunis, E., DiNardo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=bag-of-marbles+and+benign+gonial+cell+neoplasm+act+in+the+germline+to+restrict+proliferation+during+Drosophila+spermatogenesis.">bag-of-marbles and benign gonial cell neoplasm act in the germline to restrict proliferation during Drosophila spermatogenesis.</a> Development. 124, 4361-4371 (1997).</li><li>McKearin, D. M., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=bag-of-marbles:+a+Drosophila+gene+required+to+initiate+both+male+and+female+gametogenesis.">bag-of-marbles: a Drosophila gene required to initiate both male and female gametogenesis.</a> Genes Dev. 4, 2242-2251 (1990).</li><li>Gan, Q., Schones, D. E., Eun, S. H., Wei, G., Cui, K., Zhao, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monovalent+and+unpoised+status+of+most+genes+in+undifferentiated+cell-enriched+Drosophila+testis.">Monovalent and unpoised status of most genes in undifferentiated cell-enriched Drosophila testis.</a> Genome Biol. 11, 42-42 (2010).</li><li>Gan, Q., Chepelev, I., Wei, G., Tarayrah, L., Cui, K., Zhao, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+regulation+of+alternative+splicing+and+chromatin+structure+in+Drosophila+gonads+revealed+by+RNA-seq.">Dynamic regulation of alternative splicing and chromatin structure in Drosophila gonads revealed by RNA-seq.</a> Cell Res. 7, 763-783 (2010).</li></ol>

Bu protokol tartışılan ChIP analizlerin çok yönlülüğü, biyolojik ilgili sistemde kromatin devletin bir çalışma olanağı sağlar, farklı dokular üzerindeki kullanılabilir. Kültüre sistemlerinden hücreleri kullanılarak ChIP deneyler hücrelerinin büyük miktarda kolayca elde edilebilir çünkü gerçekleştirmek için uygundur. Bununla birlikte, kültürlenmiş hücrelerde mutlaka bir çoklu-hücresel ortamda hücreleri göstermemektedir. Canlı hayvan disseke doku kullanarak bu tekniği geliştirerek...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Komple Mini proteaz inhibitörü kokteyl </td><td> Roche </td><td> 11836153001 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldehit (% 37) </td><td> Supelco </td><td> 47083-U </td><td></td></tr><tr><td> PMSF </td><td> Sigma </td><td> 78830 </td><td></td></tr><tr><td> Kontes pelet havaneli </td><td> Fischer Bilimsel </td><td> K749521-1590 </td><td></td></tr><tr><td> PCR izolasyon kiti </td><td> Qiagen </td><td> 28104 </td><td></td></tr><tr><td> Doğrusal poliakrilamid </td><td> Sigma </td><td> 56.575-1mL </td><td></td></tr><tr><td> Glikojen </td><td> Qiagen </td><td> 158930 </td><td></td></tr><tr><td> SYBR yeşil / ROX qPCR Master Mix </td><td> Fermentas </td><td> K0223 </td><td></td></tr><tr><td> Mini plaka spinner </td><td> Labnet </td><td> Z723533 </td><td></td></tr><tr><td> Real Time PCR sistemi </td><td> Applied Biosystems </td><td> 4351101 </td><td></td></tr><tr><td> Küçük Hacim Ultrasonik İşlemci </td><td> Misonix </td><td> HS-XL2000 </td><td> Model kesildi </td></tr><tr><td> Dynabeads, Protein A </td><td> Invitrogen </td><td> 100-01D </td><td></td></tr><tr><td> Mıknatıs Dynamag </td><td> Invitrogen </td><td> 123-21D </td><td></td></tr><tr><td> Fenol: kloroform: IAA </td><td> Invitrogen </td><td> 15593-049 </td><td></td></tr><tr><td> Epicentre DNA SON Tamir Takımı </td><td> Epicentre Biyoteknoloji </td><td> ER0720 </td><td></td></tr><tr><td> MinElute Reaction Temizleme Kiti </td><td> Qiagen </td><td> 28204 </td><td></td></tr><tr><td> Klenow parçacığı (3 &#39;→ 5&#39; ekso-) </td><td> New England Biolabs </td><td> M0212S </td><td></td></tr><tr><td> T4 DNA ligaz </td><td> Promega Şirketi </td><td> M1794 </td><td></td></tr><tr><td> Adaptör oligonükleotidler </td><td> Illumina </td><td> PE-400-1001 </td><td></td></tr><tr><td> Eşleştirilmiş-End Primer 1.0 ve 2.0 </td><td> Illumina </td><td> 1001783 1001 784 </td><td></td></tr><tr><td> E-Jel Electorphoresis sistemi </td><td> Invitrogen </td><td> G6512ST </td><td></td></tr><tr><td> 2X Phusion HF Mastermix </td><td> Finnzymes </td><td> F-531 </td><td></td></tr></tbody></table>

chromatin immunoprecipitation (chip) using drosophila tissue

Epigenetik hızla gelişen bir alan kalır kromatin devletin farklı gelişim aşamalarında farklı hücre tiplerinde farklı gen ifadesini nasıl katkıda çalışmaları. Epigenetik düzenleme yetişkinlikte embriyonik gelişimi ve homeostazı sırasında hücresel farklılaşma da dahil olmak üzere biyolojik süreçleri, geniş bir yelpazede katkıda bulunur. Epigenetik çalışmalar eleştirel bir strateji çeşitli histon modifikasyonları ve kromatin faktörleri gen ifadesinin düzenlenmesine nasıl incelemektir. Bu adres için, Kromatin immünopresipitasyon (ChIP) ilgi hücrelerde DNA ile belirli faktörlerin dernek bir enstantane elde etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. ChIP tekniği yaygın olarak tekrarlanabilir verileri oluşturmak için bolluk ve homojenlik elde edilebilir malzeme, başlangıç ​​olarak kültür hücreleri kullanır. Bununla birlikte, birçok uyarılar vardır: İlk olarak, Petri tabağına hücrelerinin büyümesini ortamı, böylece, in vivo olarak farklı olan olabiliryaşayan bir organizma hücrelerin endojen kromatin devlet yansıtmamaktadır. İkinci olarak, hücreler değil, her türlü kültürü ex vivo olabilir. Insan ChIP tayini için yeterince malzeme edinebilecekleri hücre dizileri sadece sınırlı sayıda vardır. Burada Drosophila dokuları kullanarak ChIP deney yapmak için bir yöntem tarif. Başlangıç ​​malzemesi böylece doğru endojen kromatin devlet yansıtabilir, yaşayan bir hayvan dokusu diseke edilir. Dokusu çok farklı tipleri ile bu yöntemin uyum araştırmacılar biyolojik olarak daha bir çok in vivo 1, 2, epigenetik düzenleme konusunda ilgili soruları sağlayacaktır. Yüksek verimlilik sıralama (ChIP-seq) ile bu yöntemi birleştirerek daha araştırmacı bir epigenomic manzara elde sağlayacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about Chromatin Immunoprecipitation ChIP using Drosophila tissue at JoVE.com

Chromatin Immunoprecipitation ChIP using Drosophila tissue

Son zamanlarda yüksek verimlilik sıralama teknolojisi büyük ölçüde Kromatin immünopresipitasyon (ChIP) deney duyarlılığı artmış ve saflaştırılmış hücreleri veya disseke doku kullanarak uygulama açtı. İşte biz ChIP tekniği kullanılacak bir yöntem tasvir<em&gt; Drosophila</emIyi karakterize biyolojik sisteminde endojen kromatin devleti ele alabilir&gt; doku.

Kullanarak Kromatin immünopresipitasyon (ChIP) Drosophila Doku

Epigenetics remains a rapidly developing field that studies how the chromatin state contributes to differential gene expression in distinct cell types at ...

Research

JoVE Journal

Biology

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) using Drosophila tissue

Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

Bio Flip-Chip kullanarak Embriyonik Kök Hücreler, Desenlendirme

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

İnsan Beyninin Doku Kromatin Testi

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kromatin Immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Methylated DNA Immunoprecipitation

Metillenmiş DNA Immunoprecipitation

The identification of DNA methylation patterns is a common procedure in the study of epigenetics, as methylation is known to have significant effects on ...

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) to Assay Dynamic Histone Modification in Activated Gene Expression in Human Cells

Chromatin Immunoprecipitation ChIP to Assay Dynamic Histone Modification in Activated Gene Expression in Human Cells

Kromatin Immunoprecipitation İnsan Hücrelerinde Aktif Gen İfadesi Testi Dinamik Histon Modifikasyon (ChIP)

In response to a variety of extracellular ligands, the STAT (signal transducer and activator of transcription) transcription factors are rapidly recruited ...

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

Erken evre Fare Embriyolar kullanarak Doku özel Genler Kromatin Immunoprecipitation Testi

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element (CRE) Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element CRE Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Uygulamalarda Kantitatif Karşılaştırılması Cis</emTransgenik>-Regulatory Element (CRE) Etkinlikler Drosophila melanogaster</em

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE ...

Efficient Chromatin Immunoprecipitation using Limiting Amounts of Biomass

Biyokütle Limit Tutarlar kullanarak Verimli Kromatin Immunoprecipitation

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a  widely-used method for determining the interactions of different proteins with  DNA in chromatin of living ...

Generation of High Quality Chromatin Immunoprecipitation DNA Template for High-throughput Sequencing (ChIP-seq)

Generation of High Quality Chromatin Immunoprecipitation DNA Template for High-throughput Sequencing ChIP-seq

Yüksek verim Sıralama için Yüksek Kalite Kromatin Immunoprecipitation DNA Şablon üretimi (ChIP-seq)

ChIP-sequencing (ChIP-seq) methods directly  offer whole-genome coverage, where combining chromatin immunoprecipitation  (ChIP) and massively parallel ...

The ChroP Approach Combines ChIP and Mass Spectrometry to Dissect Locus-specific Proteomic Landscapes of Chromatin

ChroP Yaklaşım Kromatin Odağı özgü Proteomic Manzaralar teşrih Chip ve Kütle Spektrometre birleştirir

Chromatin is a highly dynamic nucleoprotein complex made of DNA and proteins that controls various DNA-dependent processes. Chromatin structure and ...