Name: imaging of hiv-1 envelope-induced virological synapse and signaling on synthetic lipid bilayers
Uploaded: 2012-03-08T13:00:00
Duration: 11 min 45 s
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यह काम एनआईएच AI071815 अनुदान (CEH) और रोडमैप Nanomedicine विकास केंद्र PN2EY016586 पुरस्कार (एमएलडी) द्वारा समर्थित किया गया था.

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	<li>Bastiani, L., Laal, S., Kim, M., Zolla-Pazner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+cell-dependent+alterations+in+envelope+components+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+virions.">Host cell-dependent alterations in envelope components of human immunodeficiency virus type 1 virions.</a> J. Virol. 71, 3444-3450 (1997).</li><li>Dimitrov, D. S., Willey, R. L., Sato, H., Chang, L. J., Blumenthal, R., Martin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection+kinetics.">Quantitation of human immunodeficiency virus type 1 infection kinetics.</a> J. Virol. 67, 2182-2190 (1993).</li><li>Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesive+Bond+Dynamics+in+Contacts+between+T+Lymphocytes+and+Glass-supported+Planar+Bilayers+Reconstituted+with+the+Immunoglobulin-related+Adhesion+Molecule+CD58.">Adhesive Bond Dynamics in Contacts between T Lymphocytes and Glass-supported Planar Bilayers Reconstituted with the Immunoglobulin-related Adhesion Molecule CD58.</a> J. Biol. Chem. 272, 15782-15788 (1997).</li><li>Fortin, J. F., Cantin, R., Lamontagne, G., Tremblay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+ICAM-1+glycoproteins+incorporated+on+human+immunodeficiency+virus+type+1+are+biologically+active+and+enhance+viral+infectivity.">Host-derived ICAM-1 glycoproteins incorporated on human immunodeficiency virus type 1 are biologically active and enhance viral infectivity.</a> J. Virol. 71, 3588-3596 (1997).</li><li>Frank, I., Stoiber, H., Godar, S., Stockinger, H., Steindl, F., Katinger, H. W., Dierich, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+host+cell-surface-derived+molecules+by+HIV-1.">Acquisition of host cell-surface-derived molecules by HIV-1.</a> Aids. 10, 1611-1620 (1996).</li><li>Hioe, C. E., Bastiani, L., Hildreth, J. E., Zolla-Pazner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cellular+adhesion+molecules+in+HIV+type+1+infection+and+their+impact+on+virus+neutralization.">Role of cellular adhesion molecules in HIV type 1 infection and their impact on virus neutralization.</a> AIDS Res. Hum. Retroviruses. 14, S247-S254 (1998).</li><li>Hioe, C. E., Chien, P. C., Lu, C., Springer, T. A., Wang, X. H., Bandres, J., Tuen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LFA-1+expression+on+target+cells+promotes+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection+and+transmission.">LFA-1 expression on target cells promotes human immunodeficiency virus type 1 infection and transmission.</a> J. Virol. 75, 1077-1082 (2001).</li><li>Jolly, C., Kashefi, K., Hollinshead, M., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+cell+to+cell+transfer+across+an+Env-induced,+actin-dependent+synapse.">HIV-1 cell to cell transfer across an Env-induced, actin-dependent synapse.</a> J. Exp. Med. 199, 283-293 (2004).</li><li>Jolly, C., Mitar, I., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+an+intact+T-cell+actin+and+tubulin+cytoskeleton+for+efficient+assembly+and+spread+of+human+immunodeficiency+virus+type+1.">Requirement for an intact T-cell actin and tubulin cytoskeleton for efficient assembly and spread of human immunodeficiency virus type 1.</a> J. Virol. 81, 5547-5560 (2007).</li><li>McDonald, D., Wu, L., Bohks, S. M., KewalRamani, V. N., Unutmaz, D., Hope, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+HIV+and+its+receptors+to+dendritic+cell-T+cell+junctions.">Recruitment of HIV and its receptors to dendritic cell-T cell junctions.</a> Science. 300, 1295-1297 (2003).</li><li>Pearce-Pratt, R., Malamud, D., Phillips, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+cytoskeleton+in+cell-to-cell+transmission+of+human+immunodeficiency+virus.">Role of the cytoskeleton in cell-to-cell transmission of human immunodeficiency virus.</a> J. Virol. , 682898-682905 (1994).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Rizzuto, C. D., Sodroski, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+virion+ICAM-1+to+human+immunodeficiency+virus+infectivity+and+sensitivity+to+neutralization.">Contribution of virion ICAM-1 to human immunodeficiency virus infectivity and sensitivity to neutralization.</a> J. Virol. 71, 4847-4851 (1997).</li><li>Vardhana, S., Dustin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supported+Planar+Bilayers+for+the+Formation+of+Study+of+Immunological+Synapses+and+Kinapse.">Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse.</a> J. Vis. Exp. (19), e947-e947 (2008).</li><li>Vasiliver-Shamis, G., Cho, M. W., Hioe, C. E., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+gp120-induced+partial+T-cell+receptor+signaling+creates+an+F-actin-depleted+zone+in+the+virological+synapse.">Human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120-induced partial T-cell receptor signaling creates an F-actin-depleted zone in the virological synapse.</a> J. Virol. 83, 11341-11355 (2009).</li><li>Vasiliver-Shamis, G., Tuen, M., Wu, T., Starr, T., Cameron, T., Thomson, R., Kaur, G., Liu, J., Visciano, M., Li, H., Kumar, R., Ansari, R., Han, D., Cho, M., Dustin, M. L., Hioe, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+gp120+induces+a+stop+signal+and+virological+synapse+formation+in+noninfected+CD4++T+cells.">Human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120 induces a stop signal and virological synapse formation in noninfected CD4+ T cells.</a> J. Virol. 82, 9445-9457 (2008).</li><li>Zhu, P., Liu, J., Bess, J., Chertova, E., Lifson, J., Grise, H., Ofek, G., Taylor, K., Roux, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+three-dimensional+structure+of+AIDS+virus+envelope+spikes.">Distribution and three-dimensional structure of AIDS virus envelope spikes.</a> Nature. 441, 847-852 (2006).</li></ol>

लेखकों हितों का कोई संघर्ष की घोषणा.

पिछले अध्ययनों में कल्पना वी.एस. सेल सेल संयुग्म प्रणाली है, लेकिन इन अध्ययनों के लिए पर्याप्त उच्च संकल्प छवियों को प्रदान नहीं synapse में supramolecular संरचनाओं कल्पना. हमारी प्रयोगशाला में, हम गिलास समर्थित तलीय bilayer प्रणाली का उपयोग करने के लिए संक्रमित वायरस लिफाफा gp120 और सेलुलर आसंजन अणु ICAM-1 व्यक्त कोशिकाओं की सतह का प्रतिनिधित्व. TIRF माइक्रोस्कोपी, जो एक उच्च संकेत से शोर अनुपात के साथ bilayer सतह से 100-200 एनएम के भीतर प्रतिदीप्ति संकेत का पता लगाता है के साथ संयोजन के रूप में, हम ICAM-1 से वी.एस. पर gp120 की supramolecular अलगाव का पता लगाने में सक्षम थे. इसके अलावा, मानक Immunostaining विधि bilayer प्रणाली को लागू किया जा सकता है और यहां इस्तेमाल किया गया था का पता लगाने और LCK सक्रिय की विशिष्ट भर्ती यों, लेकिन नहीं फ़िन क्षेत्र gp120 15 वी.एस. पर संपर्क करने के लिए,. इसलिए, तलीय bilayer TIRF सूक्ष्म से एक 2d हवाई जहाज़ में एक गुणसूत्रीयसंयोजन इंटरफ़ेस का उच्च संकल्प इमेजिंग के लिए एक प्रायोगिक प्रणाली प्रदान करता हैscopy, के रूप में अच्छी तरह से व्यापक क्षेत्र या confocal रोशनी के तरीके के रूप में. हालांकि, इस प्रणाली को भी ligand गतिशीलता का समायोजन, झुकने बाहर के विमान के रूप में सीमाएँ हैं, और जैविक झिल्लियों के उतार चढ़ाव तलीय bilayers द्वारा reproduced नहीं कर रहे हैं. इसके अलावा, इस प्रणाली में इन विट्रो और इसलिए अन्य झिल्ली अणुओं है कि एक संक्रमित कोशिका cytoskeleton है और मशीनरी है कि आणविक गतिशीलता और सेलुलर गतिशीलता को नियंत्रित पर उपस्थित होना होगा की कमी के रूप में अन्य सीमाओं,. इसके अलावा, अणु, जैसे trimers बनाम gp120 की monomers, गतिशीलता और वितरण physiologically bilayer पर प्रतिनिधित्व नहीं किया जा सकता है. फिर भी, इन सीमाओं के साथ भी, इस प्रणाली को अभी भी बहुत मूल्यवान है वायरस सेल या सेल सेल बातचीत के अध्ययन के लिए, और इन तरीकों के शोधकर्ताओं ने उच्च संकल्प छवियों की मांग कर रहे हैं supramolecular संगठन का पता लगाने के लिए एक उपयोगी गाइड के रूप में सेवा कर सकते हैं कि प्रत्यक्ष नहीं है पारंपरिक सेल सेल संयुग्म प्रणाली में.

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> उसके टैग एचआईवी gp120 </td><td> डा. चो से उपहार </td><td></td><td> DH12 </td></tr><tr><td> उसके टैग एचआईवी gp120 </td><td> प्रतिरक्षा प्रौद्योगिकी </td><td></td><td> विभिन्न X4 या R5 रेखा </td></tr><tr><td> HSA </td><td> विलियम्स मेडिकल कंपनी </td><td> +५,२१,३०२ </td><td> मानव सीरम albumin 25% </td></tr><tr><td> Amicon अल्ट्रा केन्द्रापसारक फ़िल्टर </td><td> Millipore </td><td> UFC803024 </td><td> Ultracel-30K </td></tr><tr><td> खरगोश मैब LCK </td><td> सेल संकेतन </td><td> 2787 </td><td></td></tr><tr><td> खरगोश PAB पी - LCK </td><td> सांता क्रूज़ जैव प्रौद्योगिकी इंक </td><td> SC-101,728 </td><td> 394 Tyr </td></tr><tr><td> फ़िन खरगोश मैब </td><td> Millipore </td><td> 04-353 </td><td></td></tr><tr><td> एलेक्सा 568 Fluor 2 °, अब </td><td> आणविक जांच </td><td> A11034 </td><td> बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी (एच एल +) </td></tr><tr><td> एलेक्सा 488 Fluor </td><td> आणविक जांच </td><td> A - 20,000 </td><td> कार्बोक्जिलिक एसिड succinimidyl एस्टर के </td></tr><tr><td> FCS2 चैंबर </td><td> Bioptechs </td><td> 060319-2-03 </td><td></td></tr><tr><td> स्लाइड Microaqueduct </td><td> Bioptechs </td><td> 130,119-5 </td><td></td></tr><tr><td> 30mm दौर w / छेद </td><td> Bioptechs </td><td> 1907-08-750 </td><td> 0.75mm मोटी </td></tr><tr><td> आयत पाल बांधने की रस्सी </td><td> Bioptechs </td><td> 1907-1422-250 </td><td> 14x24 0.25mm मोटी </td></tr><tr><td> Tygon टयूबिंग </td><td> Bioptechs </td><td> 20202275 </td><td> 1 / (25ft) 16 &quot; </td></tr><tr><td> तीन - जिस तरह से पानी निकलने की टोंटी </td><td> BioRad </td><td> 7328103 </td><td></td></tr><tr><td> दो - जिस तरह से पानी निकलने की टोंटी </td><td> BioRad </td><td> 7328102 </td><td></td></tr><tr><td> चिपचिपा स्लाइड मैं 0.2 Luer </td><td> Ibidi </td><td> 80168 </td><td></td></tr><tr><td> चश्मा कवर </td><td> Ibidi </td><td> १०,८१२ </td><td></td></tr><tr><td> 1ml सिरिंज </td><td> बी.डी. </td><td> 309,659 </td><td></td></tr><tr><td> कुत्तों की NTA </td><td> अवंती ध्रुवीय Lipids </td><td> 790404C </td><td></td></tr><tr><td> DOPC </td><td> अवंती ध्रुवीय Lipids </td><td> 850375C </td><td></td></tr><tr><td> ग्लास coverslip </td><td> Bioptechs </td><td> 40-1313-0319 </td><td> 40mm </td></tr><tr><td> TIRF खुर्दबीन </td><td> Nikon है </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ImageJ </td><td> स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/">http://rsbweb.nih.gov/ij/~~V</a> </td></tr></tbody></table>

imaging of hiv-1 envelope-induced virological synapse and signaling on synthetic lipid bilayers

मानव इम्यूनो वायरस टाइप 1 (एचआईवी -1) के संक्रमण कोशिका 2,10,11 प्रसारण करने के लिए सेल के माध्यम से सबसे अधिक कुशलता से होता है. सीडी 4 के बीच सेल हस्तांतरण + टी कोशिकाओं के लिए यह सेल virological (वी.एस.) synapse है, जो एफ actin पर निर्भर सेल सेल CD4 और के साथ संक्रमित कोशिका पर एचआईवी -1 gp120 लिफाफा की सगाई पर गठित जंक्शन के गठन शामिल है chemokine (CKR) रिसेप्टर CCR5 लक्ष्य 8 सेल पर या CXCR4. इसके अलावा gp120 करने के लिए और उसके रिसेप्टर्स, अन्य झिल्ली प्रोटीन, विशेष रूप से आसंजन अणु LFA-1 और उसके ligands में, ICAM परिवार, वी.एस. गठन और वायरस संचरण में एक प्रमुख भूमिका निभा रूप में वे वायरस से संक्रमित दाता कोशिकाओं की सतह पर मौजूद हैं और लक्ष्य कोशिकाओं, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से एचआईवी -1 1,4,5,6,7,13 virions के लिफाफे पर. वी.एस. गठन भी intracellular संकेत घटनाओं है कि अपने रिसेप्टर्स की gp120 - सगाई का एक परिणाम के रूप में transduced रहे हैं के साथ है. दरअसल, हम हाल ही में पता चला है कि सीडी 4 है &lt;sup&gt; gp120 साथ + टी सेल बातचीत और संकेत TCR signalosome LCK सहित, CD3ζ, ZAP70, अक्षां, SLP-76, Itk, और 15 PLCγ के साथ जुड़े अणुओं की भर्ती की phosphorylation लाती है. इस अनुच्छेद में, हम एक supramolecular व्यवस्था और झिल्ली समीपस्थ संकेतन वी.एस. गठन के दौरान हो रही घटनाओं की कल्पना विधि प्रस्तुत करते हैं. हम गिलास समर्थित न्यूनकारी वायरल gp120 लिफाफा और सेलुलर आसंजन अणु ICAM-1 असर एचआईवी संक्रमित कोशिकाओं की सतह का प्रतिनिधित्व करने के लिए मॉडल के रूप में planar द्वि परत प्रणाली का लाभ ले लो. प्रोटोकॉल बातचीत कोशिकाओं पर intracellular संकेतन अणुओं का पता लगाने के लिए एचआईवी -1 gp120 प्रेरित वी.एस. विधानसभा और संकेत सक्रियण की घटनाओं में शामिल हैं, कि मैं) द्वि परत और एक प्रवाह कक्ष में तैयारी विधानसभा ii) कोशिकाओं के इंजेक्शन और immunofluorescence धुंधला निगरानी के लिए सामान्य प्रक्रियाओं का वर्णन एचआईवी -1 gp120 और ICAM-1 द्वि - परतों पर, iii) TIRF माइक्रोस्कोपी द्वारा छवि अधिग्रहण के साथ एकएन डी) डेटा विश्लेषण चार. इस प्रणाली पारंपरिक प्रणाली सेल सेल के साथ प्राप्त परे है कि वी.एस. इंटरफ़ेस के उच्च संकल्प छवियों को उत्पन्न के रूप में यह इन उप डोमेन के लिए भर्ती विशिष्ट संकेतन अणुओं के साथ साथ वी.एस. की व्यक्तिगत आणविक घटकों के विशिष्ट समूहों का पता लगाने की अनुमति देता है.

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Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

यह लेख एक विधि का वर्णन करने के लिए एक एचआईवी -1 लिफाफा प्रेरित कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (TIRF) द्वारा कांच समर्थित तलीय bilayers पर virological synapse के गठन कल्पना. विधि भी immunofluorescence धुंधला के साथ संयुक्त किया जा सकता है. सक्रियण और संकेतन अणुओं है कि एचआईवी -1 लिफाफा प्रेरित virological synapse गठन के दौरान होने की पुनर्वितरण का पता लगाने.

के इमेजिंग एचआईवी -1 लिफाफा प्रेरित virological Synapse और सिंथेटिक लिपिड bilayers पर संकेतन

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

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