Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر جميع أعضاء مختبر جارفيس الذي تحسنت البروتوكول على مر السنين.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

ليس لدينا ما يكشف.

ويستخدم على نطاق واسع المشعة في التهجين الموضعي التعبير مرنا لأغراض متعددة، بما في ذلك لدراسة منظمة إقليمية للنسيج، أنواع الخلايا، ونشاط المخ وظيفية 2-5،10،12-14. لاستخدامها لاحقا على الجينات التي مرنا التعبير في الدماغ تعتمد على زيادة النشاط العصبي، وغالبا ما تسمى الجينات التي تعتمد على نشاط أو الجينات في وقت مبكر على الفور. مع هذه الاستخدامات، وقد تم تطبيق أسلوب لدينا عبر أنواع متعددة، بما في ذلك الطيور والثدييات (مثل الإنسان)، والأسماك، والبرمائيات، في أنسجة متعددة، بما في ذلك الدماغ والجلد والعضلات، والذين تتراوح أعمارهم متعددة، بما في ذلك السلاحف / حديثي الولادة، والأحداث والبالغين، وهنا في الفروع جنين كامل 2،3،5،15-17. السمات الخاصة للبروتوكول لدينا ما يلي: (1) وتنتج توازنا بين خصوصية التشريحية والتحديد الكمي. لقياس التعبير الجيني في فيلم الأشعة السينية، ونحن نأخذ الصور الرقمية من الصور (مثلا:. الشكل 1A و 1B)، استخدم فوtoshop وظيفة الرسم البياني (أدوبي) لقياس كثافة بكسل في مناطق الاهتمام وطرح مستويات أساسية عن فيلم خارج من النسيج ولكن لا يزال على شريحة زجاجية 2،4. لقياس التعبير على المستوى الخلوي، ونحن نأخذ صورا من الحبوب الفضة أكثر من الخلايا تحت التكبير عالية (40 100X؛ الشكل 4). نحن بعد ذلك استخدام عتبة ووظائف مقياس J صورة بواسطة Rasband وين في المعاهد الوطنية للصحة لحساب عدد من الحبوب الفضية في الصورة، وطرح عدد من خلفية في منطقة مماثلة من دون الخلايا على شريحة زجاجية، تقسيم من قبل عدد من الخلايا، للحصول على القيم والتعبير في كل خلية. 4،18 (2) ويمكن أن يكون إنتاجية عالية نسبيا، مما يسمح للتجهيز 100-200 الشرائح في وقت واحد، ونظرا لضيق ختم ساترة التي أنشأتها المعدنية حمام الزيت. معيار طرق التهجين في الموضع يستغرق وقتا أطول لختم الشرائح مع parafilm، طلاء الأظافر، وغيرها من الوسائل، حيث الشرائح يستغرق الكثير من الفضاء، (3) وهي عاليةالحساسة من النصوص وفرة منخفضة نظرا لكبريتات ديكستران وحل دينهارت في المنطقة العازلة تهجين 2،13، (4) ونهج التصوير في الساحة المظلمة يعطي صورا عالية على النقيض من ذلك بسبب التقاط الصور تحت إضاءة الساحة المظلمة على مجهر تشريح 4،5. بالإضافة إلى ذلك، فإنه يسمح كشف حساسة للتغيرات الصغيرة في التعبير الجيني، مثل في التعبير الجيني التي تعتمد على نشاط لتحديد مناطق محددة في الدماغ تنشط أثناء الإدراك وإنتاج سلوكيات معينة 19. القيود بالنسبة لغير المشعة البروتوكولات هي أن هذا الأخير أكثر وضوحا في القرار الخلوية وموقع مرنا داخل الخلية، والعمل مع مستحلب حساس جدا للتلاعب والضوء. ومن الممكن الجمع بين أسلوب لدينا مع وسائل أخرى، مثل مشعة غير تهجين موضعية لتسمية التعبير مرنا أكثر من جين واحد في نفس النسيج 10،17،20. ويمكن دمجها مع كيمياء سيتولوجية مناعيةلتسمية كل من الحمض النووي الريبي والتعبير بروتين على نفس العينة من أجل المشاركة في توطين ومرنا مع بعض أنواع الخلايا 10. وصفت التعديلات اللازمة لبروتوكول هذه التجارب وضع العلامات المزدوجة في المراجع المشار إليها. وخلاصة القول، نهجنا يسهل فهم توقيت ومكان الخلوية في التعبير الجيني من أجل فهم تنظيم المنطقة، ونشاط الأنسجة وظيفية، وظيفة الجين.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> أنهيدريد الأسيتيك </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> الكلوروفورم </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> بنفسجية الكريزيل خلات </td><td> سيغما </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> ناظم البرد </td><td> الحرارية العلمية </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> منزوع الأيونات formamide </td><td> سيغما </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100mM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> سيغما </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> تضمين قالب </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> فيشر Superfrost العلامة التجارية بالاضافة الى الشريحة </td><td> فيشر العلمية </td><td> 22-034-979 </TD&gt; <td></td></tr><tr><td> الفورمالديهايد </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Formamide </td><td> سيغما </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> GENECLEAN عدة </td><td> Q-بيو الجين </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> كوداك BioMax MR فيلم </td><td> سيغما </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> كوداك مستحلب حظر التجارب النووية </td><td> Carestream الصحة </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> كوداك الفنية المطور D19 </td><td> الة ألتصوير اليدوية </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> كوداك المهنية المثبت </td><td> الة ألتصوير اليدوية </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-المركابتويثانول </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> الزيوت المعدنية </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> سيغما </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> بولي A </td><td> إينفيتروجن </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> rATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10MM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10MM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10MM </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> بالسلامة حل حل </td><td> سلامة حل للبحوث المنتجات الدولية </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> أسيتات الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة </td><td> سيغما </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> صوديوم فوسفات أحادى </td><td> سيغما </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6رنا بوليميراز </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> تلطيخ رف معدني </td><td> علوم المجهر الإلكتروني </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7 رنا بوليميراز </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> الأنسجة تيك أكتوبر </td><td> ساكورا </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 5X النسخ العازلة </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> ترايثولامين </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> تريس، حمض الهيدروكلوريك (1 م، ودرجة الحموضة 8.0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> الحمض الريبي النووي النقال </td><td> روش </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> الحلول: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكواشف لصنع من riboprobes: 1.5 قالب الحمض النووي ميكروليتر (0،2-0،3 ميكروغرام / ميكرولتر)، 2 ميكرولتر من 5X العازلة نسخ محسنة، 1 ميكرولتر من DTT 100mM (يأتي مع بوليميريز من Promega، مزيججيد في درجة حرارة الغرفة)، 0،3 ميكرولتر من RNasin (40 وحدة / ميكرولتر)، 1.5 ميكرولتر من حل AGC مزيج ريبونوكليوتيد، 3.5 ميكرو لتر من S 35 UTP، و 1 ميكروليتر بوليميريز الحمض النووي الريبي. جلب ما يصل إلى 10 ميكروليتر مع nuclease خالية من المياه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> AGC حل مزيج ريبونوكليوتيد: خلط كميات متساوية من بطولة 10MM، GTP وCTP معا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الصوديوم محلول خلات لهطول الأمطار EtOH لإزالة الحرة S 35 UTP: 40 ريبونوكلياز ميكرولتر والدناز المياه مجانا، 5 ميكرولتر من خلات الصوديوم 3M، و 125 ميكرولتر من EtOH 100٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العازلة التهجين (10ML الأوراق المالية): 5 مل من formamide منزوع الأيونات 100٪، 600 ميكرولتر من كلوريد الصوديوم 5M، 1M تريس، حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني = 8.0)، 240 ميكرولتر من EDTA 0.5M (الرقم الهيدروجيني = 8.0)، و 100 ميكرولتر من حل 100X Denhart، و 100 ميكرولتر من DTT 1M، 250 ميكرولتر من الحمض الريبي النووي النقال 20mg/ml، 125 ميكرولتر من 20 ملغ / مل بولي، و 1 غرام من كبريتات الصوديوم ديكستران. إضافة DEPC المعالجة للمياه لتحقيق الحجم الكلي إلى 10 مل. هزة بقوة ومن ثم احتضان عند 55 درجة مئوية حتى يذوب كل كبريتات الصوديوم ديكستران. تخزين العازلة في تهجين-20 درجة مئوية، وهو أمر جيد لمدة 6 أشهر ~. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مخزنة 4٪ حل لامتصاص العرق: أضف 40 غ من امتصاص العرق في 760 مل من الماء المقطر في دورق المخصصة لامتصاص العرق، والحرارة إلى 50 درجة مئوية على طبق ساخن مع التحريك. إضافة 320 ميكرولتر من هيدروكسيد الصوديوم 10N للمساعدة في حل لامتصاص العرق. بعد حل (~ 10 دقيقة)، إضافة 100 مل من برنامج تلفزيوني 10X، وتحقيق رفع مستوى الصوت مع الماء المقطر حتى 1 لتر. إثارة وتسخين حل حتى يذوب لامتصاص العرق. وينبغي أن يكون الرقم الهيدروجيني 7.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العازلة أستلة: 13.6 مل من ترايثولامين زائد 2.52 مل من أنهيدريد الخل في 1 لتر من الماء المقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 20X SSPE الحل: 3M كلوريد الصوديوم، و 200 ملي ناه 2 PO 4-H 2 O، و 200 ملي EDTA في الماء المقطر. ضبط درجة الحموضة إلى حل مع هيدروكسيد الصوديوم 7.4 10N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10X PBS العازلة: 80G من كلوريد الصوديوم، 2.0g من بوكل، 14.4g من نا 2 هبو 4، و 2.4G من KH 2 PO 4 في الماء المقطر. ضبط حل إلى 7.0 درجة الحموضة وجلب الحجم الإجمالي إلى 1 لايتص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثانية حل غسيل: 0.1٪ β-المركابتويثانول وformamide 50٪ في SSPE 2X </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cresyl حل خلات البنفسجي: 3٪ خلات البنفسجي cresyl في ماء الصنبور (الماء المقطر يمنع تلطيخ جيد)، حل بين عشية وضحاها مع التحريك في قارورة في درجة حرارة الغرفة. تصفية مع شفط فراغ من خلال ورقة 1MM مرشح Whatman وقمع بوخنر. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

معرفة توقيت، مستوى، توطين الخلوية، ونوع من الخلايا التي يتم التعبير عن الجينات في يساهم في فهمنا للعمل الجين. ويمكن تحقيق كل هذه الميزات مع التهجين في الموقع لmRNAs داخل الخلايا. هنا نقدم مشعة في طريقة التهجين في الموقع معدلة من كلايتون وآخرون (1988) (1) التي كانت تعمل بنجاح في المختبر لسنوات عديدة، وخاصة بالنسبة للأدمغة الفقاريات الكبار 2-5. منذ فترة طويلة تكميلية الحمض النووي الريبي (كرنا) تحقيقات للتسلسل الذي يسمح للكشف عن الهدف من وفرة النصوص منخفض 6،7. إدماج النيوكليوتيدات المشعة في تحقيقات كرنا يسمح لحساسية الكشف عن مزيد من المحاضر وفرة منخفضة، والتحليل الكمي، إما عن طريق ضوء فيلم الأشعة السينية الحساسة أو مستحلب المغلفة على الأنسجة. هذه طرق الكشف توفير سجل طويل الأمد من التعبير الجيني الهدف. مقارنة مع المنهجيات مسبار غير المشعةالمواد المستنفدة للأوزون، مثل مجموعة دبي للاستثمار ووضع العلامات، وتهجين مسبار المشعة الأسلوب لا يتطلب خطوات التضخيم متعددة باستخدام HRP-الأجسام المضادة و / أو عدة TSA للكشف عن النصوص وفرة منخفضة. لذلك، وهذه الطريقة توفر وجود علاقة خطية بين كثافة إشارة والمبالغ المستهدفة مرنا للتحليل الكمي. لأنها تتيح معالجة 100-200 الشرائح في وقت واحد. كان يعمل بشكل جيد لمراحل النمو المختلفة للأجنة. معظم الدراسات التنموية في التعبير الجيني استخدام الأجنة كلها والنهج غير المشعة 8،9، وذلك جزئيا بسبب الأنسجة الجنينية هي أكثر هشاشة من أنسجة البالغين، مع أقل التماسك بين الخلايا، مما يجعل من الصعب معرفة الحدود الفاصلة بين سكان الخلية مع المقاطع النسيجية. في المقابل، نهجنا المشعة، ونظرا لنطاق أكبر من الحساسية، غير قادرة على الحصول على أعلى تباين في القرار في التعبير الجيني بين المناطق الأنسجة، مما يجعل من الاسهل لمعرفة الحدود الفاصلة بين السكان. باستخدام هذه الطريقة، يمكن للباحثين الكشف عنأهمية ممكن من الجينات التي تم تشخيصها حديثا، وتوقع مزيد من وظائف الجينات في المصالح.

Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

ويستخدم بنجاح هذا البروتوكول للكشف عن كميا المستويات والأنماط المكانية التعبير مرنا في أنواع الأنسجة متعددة عبر أنواع الفقاريات. يمكن للطريقة الكشف عن النصوص وفرة منخفضة، وتتيح معالجة مئات من الشرائح في وقت واحد. نقدم هذا البروتوكول باستخدام التنميط التعبير عن الطيور تشكيل المخ الجنينية كمثال على ذلك.

المشعة في الموقع التهجين، لتحديد متنوعة أنماط التعبير الجيني في الأنسجة

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

غير المشعة في الموقع تطبيق بروتوكول لتهجين شجرة التنوب النرويج ومجموعة من الأنواع النباتية

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

باستخدام خلية مكافحة الآلي لتبسيط دراسات التعبير الجيني : ضربة قاضية سيرنا من IL - 4 التعبير الجيني في الخلايا التابعة Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

إنتاجية عالية في الموقع أسلوب التهجين لتوصيف أنماط التعبير مرنا في الفأر الجنينية السفلى المسالك البولي التناسلي

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

تحليل النسخ الجيني وحيدة الخلية التي كتبها نيون RNA<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

التصور والتحليل من جزيئات الرنا المرسال عن طريق الإسفار<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين في<em&gt; خميرة الخباز</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

ارتفاع القرار جبل بأكمله<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين داخل الأجنة الزرد لدراسة التعبير الجيني وظيفة

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

الرنا الميكروي<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; التهجين للأنسجة الكلى الفورمالين الثابتة

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...