Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke alle Jarvis lab medlemmer, der forbedrede protokollen gennem årene.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

Vi har intet at afsløre.

Radioaktivt in situ hybridisering af mRNA-ekspression er meget udbredt til flere formål, herunder til at studere regionale væv organisation, celletyper, og hjernen funktionel aktivitet 2-5,10,12-14. Den senere brug ligger på gener, hvis mRNA-ekspression i hjernen er afhængig forøget neural aktivitet, ofte kaldet aktivitet afhængige gener eller umiddelbare tidlige gener. Med disse anvendelser, er vores metode blevet anvendt på tværs af flere arter, herunder fugle, pattedyr (fx mennesker), fisk og padder i flere væv, herunder hjerne, hud og muskler, og flere aldre, herunder hatchlings / nyfødte, unge , voksne, og her i hele embryo sektioner 2,3,5,15-17. De særlige kendetegn ved vores protokol omfatter: (1) Det giver en balance mellem anatomisk specificitet og kvantitativ specificitet. At kvantificere genekspression på x-ray film, vi tager digitale billeder af billederne (ex:. Figur 1A og 1B), skal du bruge Photoshop (Adobe) histogram funktion at måle pixeltæthed i områder af interesse og subtrahere de baggrundsniveauer på filmen ydersiden af væv, men stadig på objektglasset 2,4. For at kvantificere ekspression på cellulært niveau, vi tager billeder af sølvkorn over celler under stor forstørrelse (40-100X, Fig 4). Vi bruger derefter tærsklen og måle funktioner af Image J af Wayne Rasband ved NIH for at tælle antallet af sølvkorn i billedet, trække ud i baggrunden tæller i et lignende område uden celler på objektglasset, dividere med antallet af celler, til opnåelse af en værdi for ekspression per celle. 4,18 (2) kan være relativt højt gennemløb, således at behandling af 100-200 objektglas samtidigt på grund af den tætte dækglasset forsegling af mineralsk oliebad. Standard in situ-hybridisering metoder til at tage længere tid at forsegle dias med parafilm, neglelak og andre midler, når dias tage en masse plads, (3) Det er megetfølsomme for lav hyppighed transkripter grund dextransulfat og Denhardts opløsning i hybridiseringspuffer 2,13 (4) Den billeddannende fremgangsmåde i Darkfield giver høj kontrast på grund af optagelse af billeder under Darkfield belysning på et dissektionsmikroskop 4,5. Desuden er det muligt sensitiv påvisning af små ændringer i genekspression, såsom aktiviteten-afhængig genekspression til at identificere specifikke hjerneregioner aktiveres under perception og produktionen af specifikke adfærdstyper 19. Begrænsninger i forhold til ikke-radioaktive protokoller er at sidstnævnte er tydeligere i det cellulære opløsning og placeringen af ​​mRNA i cellen, og arbejdet med emulsion er meget følsom for manipulation og lys. Det er muligt at kombinere vores fremgangsmåde med andre metoder, såsom ikke-radioaktiv in situ-hybridisering til at betegne mRNA-ekspression af mere end ét gen i det samme væv 10,17,20. Det kan kombineres med immunocytokemitil at mærke både RNA og proteinekspression på den samme prøve med henblik på at co-lokalisere mRNA med visse celletyper 10. Protokoldataenhederne modifikationer er nødvendige for sådanne dobbelt mærkning forsøg er beskrevet i de citerede referencer. Sammenfattende muliggør vores fremgangsmåde forståelse af timingen og cellulære placering af genekspression, således at forstå region organisation, væv funktionel aktivitet, og genfunktion.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Eddikesyreanhydrid </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> Chloroform </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> Cresylviolet acetat </td><td> Sigma </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Kryostat </td><td> Thermo Scientific </td><td> MicroM HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Deioniseret formamid </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100 mM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> Indlejring skimmel </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> Fisher brand SuperFrost samt dias </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-034-979 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Formaldehyd </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Formamid </td><td> Sigma </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> GENECLEAN-prøvesættet </td><td> Q-Bio-genet </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Biomax MR film </td><td> Sigma </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak NTB Emulsion </td><td> Carestream Sundhed </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional Developer D19 </td><td> Kodak </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional Fixer </td><td> Kodak </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoethanol </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Mineralolie </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> Sigma </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> Poly A </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> rATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> Safety-Løs-løsning </td><td> Sikkerhed Løs Research Products International </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumacetat </td><td> Sigma </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> Sodium dibasisk </td><td> Sigma </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> Monobasisk natriumphosphat </td><td> Sigma </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6RNA-polymerase </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> Farvning metal rack </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7 RNA-polymerase </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> Tissue-Tek oktober </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 5x Transskription buffer </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> Triethanolamin </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCI (1 M, pH 8,0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> tRNA </td><td> Roche </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> Løsninger: <ol><li> Reagenser til fremstilling af riboprober: 1,5 pi DNA-template (0,2-0,3 ug / ul), 2 ul 5x optimeret transkription buffer, 1 ul 100 mM DTT (leveres med polymerase fra Promega, blandesbrønd ved stuetemperatur), 0,3 pi RNasin (40 enheder / ul), 1,5 ul AGC ribonukleotid blanding opløsning, 3,5 ul af S 35 UTP, og 1 pi RNA-polymerase. Fyld op til 10 pi med nuclease-frit vand. </li><li> AGC ribonucleotide mix løsning: Bland lige store mængder af 10 mM ATP, GTP og CTP sammen. </li><li> Natriumacetatopløsning for EtOH udfældning for at fjerne frit S 35 UTP: 40 pi RNase-og DNase frit vand, 5 pi 3M natriumacetat og 125 pi 100% EtOH. </li><li> Hybridiseringsbuffer (10 ml stamopløsning): 5 ml 100% deioniseret formamid, 600 ul 5 M NaCl, 1 M tris-HCl (pH = 8,0), 240 pi 0,5 M EDTA (pH = 8,0), 100 gl 100x Denhart-opløsning, 100 pi 1 M DTT, 250 ul 20mg/ml tRNA, 125 pi 20 mg / ml poly A, og 1 g natrium dextransulfat. Tilsættes DEPC-behandlet vand til at bringe det samlede rumfang på 10 ml. Omrystes kraftigt og derefter inkuberes ved 55 ° C, indtil al natrium dextransulfat er opløst. Opbevar hybridiseringspuffer i-20 ° C, hvilket er godt for ~ 6 måneder. </li><li> 4% pufret paraformaldehydopløsning: Tilsæt 40 ​​g paraformaldehyd i 760 ml destilleret vand i en kolbe, der er udpeget til paraformaldehyd, opvarmes til 50 ° C på en varmeplade under omrøring. Tilsættes 320 pi af 10 N NaOH for at opløse paraformaldehyd. Efter opløsning (~ 10 min), tilsættes 100 ml 10x PBS, og bringe lydstyrken op med destilleret vand, indtil 1 liter. Omrør og opvarme opløsningen, indtil paraformaldehyd er opløst. PH bør være 7,4. </li><li> Acetylering buffer: 13,6 ml triethanolamin plus 2,52 ml eddikesyreanhydrid i 1 liter destilleret vand. </li><li> 20x SSPE-opløsning: 3M NaCI, 200 mM NaH 2PO 4-H2O og 200 mM EDTA i destilleret vand. Justere opløsningen til pH 7,4 med 10N NaOH. </li><li> 10x PBS-buffer: 80 g NaCl, 2,0 g KCI, 14,4 g af Na2 HPO4, og 2,4 g KH 2PO 4 i destilleret vand. Justere opløsningen til pH 7,0 og bringe det samlede volumen til en liteR. </li><li> Anden vaskeopløsning: 0,1% β-mercaptoethanol og 50% formamid i 2 x SSPE </li><li> Cresylviolet acetatopløsning: 3% cresylviolet acetat i ledningsvand (destilleret vand forhindrer god farvning), opløst natten over med omrøring i en kolbe ved stuetemperatur. Filtreres med vakuumsugning gennem en 1 mm Whatman filtrerpapir og Buchner-tragt. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

Kende timing, plan cellulær lokalisering og celletype, et gen udtrykkes i bidrager til forståelsen af ​​funktionen af ​​genet. Hver af disse funktioner kan opnås med in situ-hybridisering til mRNA i celler. Her præsenterer vi et radioaktivt in situ hybridisering metode modificeret fra Clayton et al. (1988) 1, der har arbejdet med succes i vores laboratorium i mange år, især for voksne hvirveldyr hjerner 2-5. De lange komplementære RNA (cRNA) prober til målsekvensen tillader detektion af lave forekomst transkripter 6,7. Inkorporering af radioaktive nucleotider i de cRNA-prober tillader yderligere påvisning følsomhed lav hyppighed transkripter og kvantitative analyser, enten ved lysfølsomme røntgenfilm eller emulsion coatet over vævet. Disse påvisningsmetoder tilvejebringe en langsigtet registrering af målgenekspression. Sammenlignet med ikke-radioaktiv probe methODS, såsom DIG-mærkning, er den radioaktive probehybridisering metode ikke kræver multiple amplifikationstrin under anvendelse af HRP-antistoffer og / eller TSA kit til påvisning af lave forekomst transkripter. Derfor er denne fremgangsmåde tilvejebringer et lineært forhold mellem signalintensitet og målrettet mRNA mængder til kvantitativ analyse. Det tillader behandling 100-200 objektglas samtidigt. Det fungerer godt for de forskellige udviklingsstadier i embryoner. Mest udviklingsmæssige undersøgelser af genekspression anvender hele embryoner og ikke-radioaktive fremgangsmåder 8,9, til dels fordi embryonisk væv er mere skrøbelige end voksent væv, med mindre sammenhængen mellem cellerne, hvilket gør det vanskeligt at se grænser mellem cellepopulationer med vævssnit. I modsætning hertil er vores radioaktiv fremgangsmåde på grund af den større udvalg af følsomhed, der kan opnå højere kontrast i opløsning af genekspression mellem vævsområder, hvilket gør det lettere at se grænser mellem populationer. Anvendelse af denne fremgangsmåde, kan forskerne afslørermulige betydning af en nyligt identificerede gen, og yderligere forudsige funktionen af ​​genet af interesse.

Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Denne protokol er med held anvendt til kvantitativ detektering niveauer og rumlige mønstre af mRNA-ekspression i forskellige vævstyper tværs vertebrate arter. Fremgangsmåden kan detektere lave tæthed transkripter og tillader behandling af hundredvis af objektglas samtidigt. Vi præsenterer denne protokol ved hjælp af udtryk profilering af aviær embryonale hjernens dannelse som et eksempel.

Radioaktivt In situ Hybridisering til påvisning af Forskellige genekspressionsmønstre i Tissue

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Analyse af enkeltcelle-gentransskription ved RNA Fluorescent<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering og analyse af mRNA molekyler under anvendelse Fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Hele Mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering inden Zebrafisk embryoner at studere genekspression og funktion

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering for formalin Faste nyrevæv

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Måling af stofskifte i<em&gt; Drosophila</em&gt; Hjælp respirometri

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...