Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

De auteurs willen graag alle Jarvis lab leden die het protocol verbeterd door de jaren heen bedanken.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

Wij hebben niets te onthullen.

Radioactieve in situ hybridisatie van mRNA-expressie wordt veel gebruikt voor meerdere doeleinden, waaronder voor het bestuderen van regionale weefsel organisatie, celtypen, en de hersenen functionele activiteit 2-5,10,12-14. De later te gebruiken is op genen waarvan de mRNA expressie in de hersenen is afhankelijk van meer neurale activiteit, ook wel activiteit-afhankelijke genen of onmiddellijke vroege genen. Met deze toepassingen, is onze methode is toegepast op meerdere soorten, waaronder bij vogels, zoogdieren (bijvoorbeeld mens), vissen en amfibieën, in meerdere weefsels, zoals hersenen, huid en spieren en meerdere leeftijden, inclusief jongen / pasgeborenen, jongeren , volwassenen, en hier in zijn geheel embryo secties 2,3,5,15-17. De speciale kenmerken van ons protocol zijn onder andere: (1) Het produceert een evenwicht tussen anatomische specificiteit en kwantitatieve specificiteit. Om de expressie van genen te kwantificeren op de x-ray film, we digitale foto&#39;s van de beelden (. Ex: Fig 1A en 1B) te nemen, gebruik maken van de Photoshop (Adobe) histogram functie om de pixel dichtheid te meten in de regio&#39;s van belang en trek de achtergrondniveaus op de film buitenkant van het weefsel, maar nog steeds op de glasplaatje 2,4. Om uitdrukking te kwantificeren op cellulair niveau, nemen we beelden van zilverkorrels meer dan cellen onder een sterke vergroting (40-100X; Figuur 4). Daarna de drempel en meet functies beeld J gebruik door Wayne Rasband bij NIH het aantal zilverkorrels tellen in het beeld van aftrekken van de achtergrond aantal in een soortgelijk gebied zonder cellen op het glaasje, gedeeld door het aantal cellen, een waarde van expressie per cel. 4,18 (2) relatief hoge doorvoer zijn, zodat verwerking van 100-200 dia gelijktijdig door de nauwe dekglaasje afdichting die door de minerale oliebad te verkrijgen. Standaard in-situ hybridisatie methoden langer duren om de dia&#39;s met parafilm, nagellak en andere middelen, waar de dia&#39;s nemen veel ruimte af te dichten, (3) Het is zeergevoelig voor lage abundantie transcripten te wijten aan dextransulfaat en Denhardt&#39;s oplossing in de hybridisatiebuffer 2,13; (4) De imaging aanpak in donkerveld levert beelden met hoog contrast te wijten aan het nemen van foto&#39;s onder donkerveld belichting op een stereomicroscoop 4,5. Bovendien, Het maakt het mogelijk gevoelige detectie van kleine veranderingen in genexpressie, zoals de activiteit-afhankelijke genexpressie worden bepaald welke specifieke gebieden van de hersenen geactiveerd tijdens de perceptie en productie van specifiek gedrag 19. De beperkingen ten opzichte van niet-radioactieve protocollen dat deze duidelijker in de cellulaire resolutie en locatie van het mRNA in de cel en het werken met emulsie is zeer gevoelig voor manipulatie en licht. Het is mogelijk om onze methode combineren met andere methoden, zoals niet-radioactieve in situ hybridisatie mRNA expressie van meerdere genen in dezelfde weefsel 10,17,20 labelen. Het kan worden gecombineerd met immunocytochemiezowel RNA en eiwitexpressie label op hetzelfde monster om co-lokalisatie van de mRNA bepaalde celtypen 10. Het protocol aanpassingen noodzakelijk dat deze dubbele etikettering experimenten beschreven in de geciteerde referenties. In het kort, onze aanpak vergemakkelijkt inzicht in de timing en cellulaire locatie van genexpressie in om het begrijpen van regio organisatie, weefsel functionele activiteit, en de functie van een gen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Azijnzuuranhydride </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> Chloroform </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> Cresyl violet-acetaat </td><td> Sigma </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Cryostaat </td><td> Thermo Scientific </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Gedeïoniseerd formamide </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100 mM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> Inbedding van schimmel </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> Fisher merk Superfrost plus glijbaan </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-034-979 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Formaldehyde </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Formamide </td><td> Sigma </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> Geneclean samenstel </td><td> Q-gen Bio </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Biomax MR film </td><td> Sigma </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak NTB Emulsie </td><td> Carestream Health </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional Developer D19 </td><td> Kodak </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional Fixer </td><td> Kodak </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercapto </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Minerale olie </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Sigma </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> Poly A </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> rATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> RNAsin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> Safety-Los oplossing </td><td> Veiligheid Los Research Products International </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> Natrium Acetaat </td><td> Sigma </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> Dibasisch </td><td> Sigma </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> Monobasisch </td><td> Sigma </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6RNA polymerase </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> Kleuring metalen rek </td><td> Elektronen Microscopie Wetenschappen </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7 RNA-polymerase </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> Tissue-Tek oktober </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 5x Transcriptie buffer </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> Triethanolamine </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCl (1 M, pH 8,0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> tRNA </td><td> Roche </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> Oplossingen: <ol><li> Reagentia voor het maken van riboprobes: 1,5 pl DNA-template (0,2-0,3 ng / ul), 2 pl 5x geoptimaliseerde transcriptie buffer, 1 pi van 100mm DTT (wordt geleverd met Polymerase van Promega, mixen bij kamertemperatuur), 0,3 ul van RNAsin (40 eenheden / pl), 1,5 pi AGC ribonucleotide mengsel oplossing, 3,5 pi S 35 UTP en 1 pi RNA polymerase. Breng tot 10 ßl met nuclease-vrij water. </li><li> AGC ribonucleotide mix oplossing: Meng gelijke hoeveelheden van 10 mM ATP, GTP en CTP samen. </li><li> Natriumacetaatoplossing voor EtOH neerslag vrij S 35 UTP verwijderen: 40 pi RNase en DNase vrij water, 5 ul 3M natriumacetaat en 125 ul 100% EtOH. </li><li> Hybridisatiebuffer (10 ml stock): 5 ml 100% gedeïoniseerd formamide, 600 pi van 5M NaCl, 1 M Tris-HCl (pH = 8,0), 240 pi 0,5 M EDTA (pH = 8,0), 100 ul van oplossingen 100x Denhart&#39;s 100 pi 1 M DTT, 250 ul van 20mg/ml tRNA, 125 pi van 20 mg / ml poly A en 1 g natrium Dextran sulfaat. Voeg DEPC-behandeld water om het totale volume te brengen 10 ml. Schudden en incuberen bij 55 ° C totdat alle natrium dextransulfaat opgelost. Bewaar de hybridisatie buffer-20 ° C, wat goed is voor ~ 6 maanden. </li><li> 4% paraformaldehyde gebufferde oplossing toevoegen 40 g paraformaldehyde in 760 ml gedestilleerd water in een kolf aangewezen paraformaldehyde, warmte tot 50 ° C op een kookplaat roeren. Voeg 320 ul van 10N NaOH om de paraformaldehyde te ontbinden. Na het oplossen van (~ 10 min), voeg 100 ml van 10x PBS, en breng het volume met gedestilleerd water tot 1 liter. Roer en verwarm de oplossing tot paraformaldehyd is opgelost. De pH moet 7.4. </li><li> Acetylering buffer: 13,6 ml triethanolamine plus 2,52 ml azijnzuuranhydride in 1 liter gedestilleerd water. </li><li> 20x SSPE oplossing: 3M NaCl, 200 mM NaH 2 PO 4-H 2 O, en 200 mM EDTA in gedestilleerd water. Stel oplossing tot pH 7,4 met NaOH 10N. </li><li> 10x PBS buffer: 80 g NaCl, 2,0 g KCl, 14.4g van Na 2 HPO 4 en 2,4 g van KH 2 PO 4 in gedestilleerd water. Stel oplossing tot pH 7,0 en brengen totale volume een liter. </li><li> Tweede wasoplossing: 0,1% β-mercaptoethanol en 50% formamide in 2x SSPE </li><li> Cresyl violet-oplossing: 3% cresyl violet-acetaat in leidingwater (gedestilleerd water voorkomt een goede kleuring), &#39;s nachts opgelost onder roeren in een kolf bij kamertemperatuur. Filter met vacuüm zuigen door middel van een 1 mm Whatman filtreerpapier en Buchner trechter. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

Kennis van de timing, niveau cellulaire lokalisatie en celtype dat een gen uitgedrukt in draagt ​​voor ons begrip van de werking van het gen. Elk van deze voorzieningen kan worden uitgevoerd met in situ hybridisatie aan mRNA in de cellen. Hier vormen een radioactieve in situ hybridisatie werkwijze gemodificeerd uit Clayton et al. (1988). Die een succesvol in ons laboratorium werken jaren, in het bijzonder voor volwassenen gewervelde hersenen 2-5. De lange complementaire RNA (cRNA) probes aan de doelsequentie zorgt voor detectie van lage abundantie heeft transcripties 6,7. Integratie van radioactieve nucleotiden in de cRNA probes kunnen verdere detectiegevoeligheid van geringe hoeveelheden transcripts en kwantitatieve analyse, door lichtgevoelige röntgenfilm of emulsie bekleed op het weefsel. Deze detectiemethoden een langdurige staat van expressie van het doelwitgen. Vergeleken met niet-radioactieve probe methODS zoals DIG etiketteren, is de radioactieve probe hybridisatie methode geen meerdere amplificatie stappen met HRP-antilichamen en / of TSA kit lage hoeveelheden transcripten detecteren. Daarom is deze werkwijze verschaft een lineaire relatie tussen signaal intensiteit en gerichte mRNA bedragen voor kwantitatieve analyse. Het maakt het mogelijk verwerken van 100 tot 200 dia&#39;s tegelijk. Het werkt goed voor de verschillende ontwikkelingsstadia van embryo&#39;s. De meeste ontwikkelings-studies van de genexpressie te gebruiken gehele embryo&#39;s en niet-radioactieve benaderingen 8,9, voor een deel omdat embryonaal weefsel is kwetsbaarder dan volwassen weefsel, met minder cohesie tussen de cellen, waardoor het moeilijk is om grenzen tussen celpopulaties met weefselcoupes te zien. Daarentegen onze radioactieve benadering door het grotere aantal gevoeligheid kan hoger contrast te verkrijgen oplossing van genexpressie tussen weefsel gebieden maakt het gemakkelijker om grenzen tussen populaties zien. Met deze methode kunnen onderzoekers onthullen demogelijke betekenis van een nieuw geïdentificeerd gen, en verder voorspellen de functie van het gen van belang.

Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Dit protocol wordt met succes gebruikt om kwantitatief te detecteren niveaus en ruimtelijke patronen van mRNA-expressie in verschillende weefsels vormen over gewervelde soorten. De methode kan detecteren lage abundantie transcripties en maakt het verwerken van honderden dia&#39;s tegelijk. We presenteren dit protocol met behulp van expressie profilering van aviaire embryonale hersenen formatie als voorbeeld.

Radioactieve In situ Hybridisatie voor het detecteren van Divers genexpressiepatronen in Tissue

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Niet-radioactieve In situ Hybridisatie Protocol Toepasbaar voor Noorwegen Spruce en een bereik van plantensoorten

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Met behulp van een geautomatiseerde cel Counter aan Gene Expression Studies Vereenvoudigen: siRNA Knockdown van IL-4 Afhankelijk van genexpressie in cellen Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro reconstitutie van de Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Een High Throughput In situ Hybridisatie Methode om mRNA expressie patronen karakteriseren in de Fetal Mouse lagere urogenitale tractus

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Analyse van de Single-cell gentranscriptie door RNA TL<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisatie en analyse van mRNA moleculen met behulp van fluorescentie<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

Hoge resolutie Hele Mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in zebravis embryo&#39;s om genexpressie en functie te bestuderen

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie voor formaline gefixeerde nierweefsel

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Meting van Metabolic Rate in<em&gt; Drosophila</em&gt; Gebruik respirometrietest

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...