Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
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Die Autoren möchten allen Jarvis Labor Mitglieder, die das Protokoll über die Jahre verbessert danken.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

Wir haben nichts zu offenbaren.

Radioaktive in situ-Hybridisierung der mRNA-Expression wird häufig für verschiedene Zwecke, einschließlich der für die Untersuchung regionalen Gewebeorganisation, Zelltypen und Gehirn funktionelle Aktivität 2-5,10,12-14 verwendet. Die spätere Verwendung auf Gene, deren mRNA-Expression im Gehirn ist abhängig von erhöhten neurale Aktivität, die oft als leistungsabhängige Gene oder unmittelbar frühen Gene. Mit diesen Anwendungen hat sich unser Verfahren auf mehrere Arten angewendet worden, darunter in Vögel, Säugetiere (zB menschliche), Fische und Amphibien; in mehreren Geweben, einschließlich Gehirn, Haut und Muskel, und mehrere Altersklassen, einschließlich Jungtiere / Neugeborenen, Jugendlichen , Erwachsene, und hier im ganzen Embryo Abschnitten 2,3,5,15-17. Die besonderen Merkmale unseres Protokolls sind: (1) Es erzeugt ein Gleichgewicht zwischen anatomischen Besonderheit und quantitative Spezifität. Um die Genexpression auf dem Röntgenfilm zu quantifizieren, wir digitale Bilder der Bilder (. Bsp.: Abb. 1A und 1B) nehmen, verwenden Sie die Photoshop (Adobe) Histogramm-Funktion, die Pixeldichte in den Regionen von Interesse zu messen und subtrahieren die Hintergrundwerte auf dem Film außerhalb des Gewebes, aber immer noch auf dem Objektträger 2,4. Um die Expression auf zellulärer Ebene zu quantifizieren, nehmen wir Bilder von Silberkörnern über Zellen bei starker Vergrößerung (40-100X; Abb. 4). Wir verwenden die Schwelle und Messfunktionen der Bild J von Wayne Rasband am NIH, die Anzahl der Silberkörner in Bildes zu zählen, subtrahieren den Hintergrund Anzahl in einem ähnlichen Bereich ohne Zellen auf dem Objektträger, durch die Anzahl der Zellen teilen, die a-Werte von Expression pro Zelle. 4,18 (2) relativ hohen Durchsatz sein kann, damit die Verarbeitung von 100-200 Folien gleichzeitig, durch die dichte Abdichtung durch das Deckglas Mineralölbad angelegt zu erhalten. Standard-in-situ Hybridisierung Methoden länger dauern, um die Folien mit Parafilm, Nagellack und andere Mittel, wo Dias nehmen viel Raum zu versiegeln, (3) Es ist höchstempfindlich für geringe Häufigkeit Transkripte durch Dextransulfat und Denhardt-Lösung im Hybridisierungspuffer 2,13, (4) Die Bildgebungsverfahren im Dunkelfeld liefert Bilder mit hohem Kontrast durch Fotografieren unter Dunkelfeldbeleuchtung auf einem Präpariermikroskop 4,5. Darüber hinaus ermöglicht es empfindliche Detektion von kleinen Veränderungen in der Genexpression, wie in Aktivitäts-abhängigen Genexpression auf bestimmte Hirnregionen während der Wahrnehmung und Produktion von spezifischen Verhaltensweisen 19 aktiviert zu identifizieren. Die Einschränkungen in Bezug auf nicht-radioaktiven Protokolle sind, dass diese deutlicher in zellulärer Auflösung und die Position der mRNA in der Zelle sind, und die Arbeit mit Emulsion ist sehr empfindlich gegenüber Manipulation und Licht. Es ist möglich, unsere Methode mit anderen Methoden, wie nicht-radioaktive in situ-Hybridisierung an mRNA-Expression von mehr als einem Gen in dem gleichen Gewebe 10,17,20 kennzeichnen kombinieren. Es kann mit Immunzytochemie kombiniert werden, beide RNA-und Protein-Expression mit der gleichen Probe zu kennzeichnen, um die Co-Lokalisation der mRNA mit bestimmten Zelltypen 10. Die Protokoll-Modifikationen notwendig für eine solche doppelte Kennzeichnung Experimente sind in den zitierten Referenzen beschrieben. Zusammenfassend ermöglicht unser Ansatz Verständnis der Zeitpunkt und die zelluläre Lokalisation der Genexpression, um das Verständnis Region Organisation, Gewebe funktionelle Aktivität und Genfunktionen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Essigsäureanhydrid </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> Chloroform </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> Kresylviolett Acetat </td><td> Sigma </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Kryostat </td><td> Thermo Scientific </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Deionisiertem Formamid </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100 mM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> Einbettform </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> Marke Fisher Superfrost plus Rutsche </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-034-979 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Formaldehyd </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Formamid </td><td> Sigma </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> Kit GENECLEAN </td><td> Q-Bio-Gen </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Biomax MR Film </td><td> Sigma </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak NTB Emulsion </td><td> Carestream Health </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> KODAK PROFESSIONAL Entwickler D19 </td><td> Kodak </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional Fixer </td><td> Kodak </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-Mercaptoethanol </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Mineralöl </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> Sigma </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-A </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> rATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> Sicherheits-Solve-Lösung </td><td> Sicherheit Solve Research Products International </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumacetat </td><td> Sigma </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> Dinatriumhydrogenphosphat </td><td> Sigma </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> Mononatriumphosphat </td><td> Sigma </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6RNA-Polymerase </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> Die Färbung Metallgestell </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7-RNA-Polymerase </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> Tissue-Tek Oktober </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 5x Transkription Puffer </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> Triethanolamin </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCl (1 M, pH 8,0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> tRNA </td><td> Roche </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> Lösungen: <ol><li> Reagenzien für die Herstellung von Ribosonden: 1,5 ul DNA-Template (0,2-0,3 ug / ul), 2 ul 5x optimierte Transkription Puffer, 1 ul 100 mM DTT (kommt mit Polymerase von Promega, mixauch bei Raumtemperatur), 0,3 ul RNasin (40 Einheiten / ul), 1,5 ul AGC Ribonukleotid-Mix-Lösung, 3,5 ul der S 35 UTP, und 1 ul RNA-Polymerase. Bringt bis zu 10 ul mit Nuklease-freiem Wasser. </li><li> AGC Ribonukleotid-Mix-Lösung: Mix gleiche Mengen von 10 mM ATP, GTP und CTP zusammen. </li><li> Natriumacetat-Lösung für EtOH Niederschläge auf freie S 35 UTP entfernen: 40 ul RNase und DNase freies Wasser, 5 ul 3 M Natriumacetat und 125 ul 100% EtOH. </li><li> Hybridisierungspuffer (10ml Lager): 5 ml 100% deionisiertes Formamid, 600 ul 5 M NaCl, 1 M Tris-HCl (pH = 8,0), 240 ul 0,5 M EDTA (pH = 8,0), 100 ul 100x Denharts Lösung, 100 ul 1 M DTT, 250 ul 20mg/ml tRNA, 125 ul 20 mg / ml Poly A, und 1 g Natriumdextransulfat. In DEPC-behandeltem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 10 ml zu bringen. Kräftig schütteln und dann inkubieren bei 55 ° C, bis alle Natriumdextransulfat aufgelöst wird. Lagern Sie den Hybridisierungspuffer in-20 ° C, was gut für ~ 6 Monate ist. </li><li> 4% gepuffertem Paraformaldehyd-Lösung: Fügen Sie 40 g Paraformaldehyd in 760 ml destilliertem Wasser in einen Kolben für Paraformaldehyd bezeichnet, Hitze bis 50 ° C auf einer Heizplatte unter Rühren zugeben. Fügen Sie 320 ul von 10N NaOH um das Lösen des Paraformaldehyd. Nach dem Auflösen (~ 10 min), 100 ml 10x PBS, und bringe das Volumen mit destilliertem Wasser bis 1 Liter. Umrühren und erhitzen Sie die Lösung bis Paraformaldehyd gelöst ist. Der pH-Wert sollte 7,4 sein. </li><li> Acetylierung Puffer: 13,6 ml Triethanolamin und 2,52 ml Acetanhydrid in 1 Liter destilliertem Wasser. </li><li> 20x SSPE-Lösung: 3M NaCl, 200 mM NaH 2 PO 4-H 2 O und 200 mM EDTA in destilliertem Wasser. Passen Lösung auf pH 7,4 mit 10 N NaOH. </li><li> 10x PBS-Puffer: 80 g NaCl, 2,0 g KCl, 14,4 g Na 2 HPO 4 und 2,4 g KH 2 PO 4 in destilliertem Wasser. Passen Lösung auf pH 7,0 und bringen Gesamtvolumen auf 1 liter. </li><li> Zweiten Waschlösung: 0,1% β-Mercaptoethanol und 50% Formamid in 2x SSPE </li><li> Kresylviolett-Acetat-Lösung: 3% Kresylviolett Acetat in Leitungswasser (destilliertes Wasser verhindert, dass eine gute Färbung), über Nacht unter Rühren in einem Kolben bei Raumtemperatur gelöst. Filter mit Vakuumabsaugung durch ein 1mm Whatman-Filterpapier und Büchner-Trichter. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

Die Kenntnis der Zeitpunkt, Stufe, zelluläre Lokalisation und Zelltyp, dass ein Gen, das exprimiert wird, trägt zum Verständnis der Funktion des Gens. Jedes dieser Merkmale kann mit in situ-Hybridisierung an mRNAs in den Zellen erreicht werden. Hier präsentieren wir eine radioaktive in situ Hybridisierung Methode von Clayton et al. (1988) 1, die gearbeitet hat erfolgreich in unserem Labor seit vielen Jahren, vor allem für erwachsene Wirbeltieren Gehirne 5.2 geändert. Die langen komplementärer RNA (cRNA) Sonden an die Zielsequenz erlaubt die Detektion von niedriger Häufigkeit Transkripte 6,7. Der Einbau von radioaktiven Nukleotiden in die cRNA-Sonden können zur weiteren Nachweisempfindlichkeit geringer Menge Transkripte und quantitativen Analysen, entweder durch lichtempfindlichen Röntgenfilm oder Emulsion beschichteten über das Gewebe. Diese Nachweisverfahren eine langfristige Aufzeichnung der Expression des Zielgens. Im Vergleich zu nicht-radioaktive Sonde Meth-Methoden, wie z. B. DIG-Etikettierung ist die radioaktive Sonde Hybridisierungsverfahren nicht mehrere Schritte Amplifikation unter Verwendung von HRP-Antikörper und / oder TSA-Kit geringer Menge Transkripte zu erfassen. Daher stellt dieses Verfahren eine lineare Beziehung zwischen der Signalintensität und gezielte mRNA-Mengen für die quantitative Analyse. Es erlaubt die Verarbeitung von 100 bis 200 Objektträger gleichzeitig. Es funktioniert gut für die verschiedenen Entwicklungsstadien der Embryonen. Die meisten Entwicklungsstudien der Genexpression nutzen ganzen Embryonen und nicht-radioaktive Ansätze 8,9, zum Teil weil embryonalem Gewebe ist zerbrechlicher als erwachsenem Gewebe, mit weniger Zusammenhalt zwischen den Zellen, was es schwierig macht Grenzen zwischen Zell-Populationen mit Gewebeschnitten zu sehen. Im Gegensatz dazu ist unsere radioaktive Ansatz, aufgrund der größeren Auswahl an Sensibilität, in der Lage, einen höheren Kontrast in der Auflösung der Genexpression zwischen Gewebe Regionen zu erhalten, wodurch es leichter, Grenzen zwischen den Populationen zu sehen. Mit dieser Methode konnten die Forscher zeigen, diemögliche Bedeutung eines neu identifizierte Gen, und ferner vorherzusagen die Funktion des Gens von Interesse.

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Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Dieses Protokoll wird erfolgreich eingesetzt, um quantitativ zu detektieren Ebenen und räumliche Muster der mRNA-Expression in mehreren Gewebetypen über Wirbeltierarten. Das Verfahren lässt sich erkennen geringer Menge Transkripte und ermöglicht die Verarbeitung von Hunderten von Dias gleichzeitig. Wir präsentieren dieses Protokoll mit Expression Profiling der aviären embryonalen Gehirn Bildung als Beispiel.

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