Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות לכל חברי המעבדה ג&#39;רוויס מי שיפר את הפרוטוקול במהלך השנים.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

אין לנו מה למסור.

רדיואקטיבי הכלאה באתרו של ביטוי mRNA נעשה שימוש נרחב למטרות מרובות, כולל ללימוד הארגון רקמות אזורי, סוגי תאים, ואת הפעילות המוחית התפקודית 2-5,10,12-14. שימוש אחר הוא על גנים, אשר הביטוי mRNA במוח תלויה פעילות עצבית מוגברת, המכונה לעתים קרובות פעילות תלויי גנים או גנים מוקדמים מיידיות. עם השימושים האלה, השיטה שלנו יושם על פני מספר רב של מינים, כולל ציפורים, יונקים (למשל אדם), דגים, דו חיים, ברקמות רבות, כולל המוח, העור, השרירים, והגילאים מרובות, כולל גוזלים / תינוקות, ונוער , מבוגרים, והנה העובר בחלקים שלמים 2,3,5,15-17. התכונות המיוחדות של פרוטוקול שלנו כוללים: (1) הוא מייצר איזון בין ייחוד אנטומי וספציפיות כמותית. כדי לכמת את ביטוי הגנים על הסרט X-Ray, אנחנו לוקחים את התמונות הדיגיטליות של התמונות (לשעבר:. איור 1A ו-1B), השתמש Photoshop (Adobe) היסטוגרמה פונקציה כדי למדוד את צפיפות פיקסלים באזורים בעלי עניין ולחסר את רמות הרקע על הסרט מחוץ רקמות אך עדיין בשקופית זכוכית 2,4. לכמת ביטוי ברמה התאית, אנחנו לוקחים תמונות של גרגרי כסף על תאים בהגדלה גבוהה (40-100x, איור 4). לאחר מכן, אנו משתמשים סף פונקציות מידה של J תמונה של וויין Rasband ב-NIH על מנת לספור את מספר גרגרי כסף בתמונה, להפחית את מספר רקע בתחום דומה ללא תאים בשקופית זכוכית, לחלק במספר תאים, להשיג כמה ערכים של ביטוי לכל תא. 4,18 (2) ניתן תפוקה גבוהה יחסית, מה שמאפשר עיבוד של 100-200 שקופיות בו זמנית, עקב חותם coverslip חזק שנוצר על ידי אמבט שמן מינרלי. סטנדרט in-situ שיטות הכלאה להימשך זמן רב יותר לסגור את השקופיות עם parafilm, לק, ואמצעים אחרים, בהם שקופיות תופסים הרבה מקום, (3) זה מאודרגיש תמלילי שפע נמוכה עקב סולפט dextran פתרון של Denhardt במאגר הכלאה 2,13, (4) הגישה הדמיה darkfield מניב תמונות עם ניגודיות גבוהה בשל מצלם תחת תאורה darkfield על מיקרוסקופ לנתח 4,5. בנוסף, היא מאפשרת זיהוי הרגיש של שינויים קטנים ביטוי גנים, כמו בביטוי תלוי בפעילות הגן לזהות אזורים במוח ספציפיים המופעלים בזמן התפיסה והייצור של התנהגויות ספציפיות 19. המגבלות ביחס שאינם רדיואקטיביים פרוטוקולים הן כי האחרונים הם ברורים בהחלטה הסלולר ואת המיקום של ה-mRNA בתוך התא, ועבודה עם אמולסיה רגישה מאוד מניפולציה ואור. ניתן לשלב את השיטה שלנו עם שיטות אחרות, כגון אי - רדיואקטיבי הכלאה באתרו לתייג ביטוי mRNA של גן אחד או יותר בתוך הרקמה באותו 10,17,20. זה יכול להיות משולב עם immunocytochemistryלתייג את שתי רנ&quot;א ביטוי החלבון על מדגם זהה כדי שיתוף לתהליך הלוקליזציה של mRNA עם סוגי תאים מסוימים 10. השינויים בפרוטוקול הדרושים כאלה ניסויים תיוג כפולים מתוארים והאסמכתאות. לסיכום, הגישה שלנו מאפשרת הבנה של תזמון ומיקום הסלולרי של ביטוי גנים לשם הבנת הארגון באזור, פעילות רקמה תפקודית, ותפקוד הגן.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> אצטית אנהידריד </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> כלורופורם </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> סגול Cresyl אצטט </td><td> סיגמא </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Cryostat </td><td> Thermo Scientific </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Deionized לפוראמיד </td><td> סיגמא </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> סיגמא </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> הטבעה עובש </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> פישר המותג Superfrost בתוספת שקופיות </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 22-034-979 </TD&gt; <td></td></tr><tr><td> פורמלדהיד </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> לפוראמיד </td><td> סיגמא </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> GENECLEAN ערכת </td><td> Q-ביו גן </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> קודאק BioMax MR הסרט </td><td> סיגמא </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> קודאק NTB אמולסיה </td><td> Carestream הבריאות </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional Developer D19 </td><td> קודאק </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> קודאק מקצועי Fixer </td><td> קודאק </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoethanol </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> שמן מינרלי </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> סיגמא </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> פולי </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> rATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10mm </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10mm </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10mm </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> בטיחות לפתור פתרון </td><td> בטיחות לפתור מוצרים המחקר הבינלאומי </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> סודיום אצטט </td><td> סיגמא </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> פוספט נתרן dibasic </td><td> סיגמא </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> פוספט נתרן monobasic </td><td> סיגמא </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6RNA פולימראז </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> מכתים מתלה מתכת </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים למדעים </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7-RNA פולימראז </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> רקמת-Tek אוקטובר </td><td> סאקורה </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> תמלול 5x חיץ </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> בכאבים ודלקות שאינן זיהומיות </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> טריס-HCl (1 מ &#39;, pH 8.0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> tRNA </td><td> רוש </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> פתרונות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומרים כימיים להכנת של riboprobes: 1.5 תבנית ה-DNA μl (0.2-0.3 מיקרוגרם / μl), 2 μl מאגר 5x שעתוק אופטימיזציה, 1 μl של DTT 100 מ&quot;מ (מגיע עם פולימראז מ Promega, תמהילגם בטמפרטורת החדר), 0.3 μl של RNasin (40 יחידות / μl), 1.5 μl של פתרון שילוב AGC ribonucleotide, 3.5 μl של S 35 UTP, ו 1 μl RNA פולימראז. להביא עד 10 μl עם מים nuclease חינם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תערובת AGC פתרון ribonucleotide: לערבב כמויות שוות של 10 מ&quot;מ ATP, GTP ו CTP יחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אצטט נתרן פתרון EtOH משקעים להסיר 35 חינם UTP: 40 RNase μl ומים DNase חינם, 5 μl של נתרן אצטט 3M, ו - 125 μl של EtOH 100%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההכלאה חיץ (10 מ&quot;ל המלאי): 5 מ&quot;ל של לפוראמיד deionized 100%, 600 μl של NaCl 5M, 1M Tris-HCl (pH = 8.0), 240 μl של 0.5m EDTA (pH = 8.0), 100 μl של פתרון 100x של Denhart, 100 μl של 1M DTT, 250 μl של 20mg/ml tRNA, 125 μl של 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​פולי, ו - 1 גר &#39;של נתרן גופרתי dextran. הוסף DEPC שטופלו במים כדי להביא את הנפח הכולל ל 10 מ&quot;ל. לנער במרץ ולאחר מכן לדגור על 55 ° C עד שכל נתרן גופרתי dextran נמס. אחסן את מאגר ההכלאה ב-20 ° C, שהוא טוב ~~~HEAD=NNS 6 חודשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4% שנאגרו פתרון paraformaldehyde: הוסף 40 גרם של paraformaldehyde במים מזוקקים 760 מ&quot;ל בבקבוק המיועד paraformaldehyde, חום עד 50 מעלות צלזיוס על פלטה חשמלית תוך ערבוב. הוסף 320 μl של 10N NaOH כדי לעזור לפזר את paraformaldehyde. לאחר המסת (~ 10 דקות), מוסיפים 100 מ&quot;ל של PBS 10x, ולהביא את עוצמת הקול עם מים מזוקקים עד 1 ליטר. מערבבים ומחממים את הפתרון עד paraformaldehyde נמס. PH אמור להיות 7.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאגר acetylation: 13.6 מ&quot;ל של בכאבים ודלקות שאינן זיהומיות בתוספת 2.52 מ&quot;ל אנהידריד אצטית ב 1 ליטר של מים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 20x SSPE פתרון: 3M NaCl, 200 מ&quot;מ לאא 2 PO 4-H 2 O, ו - 200 mM EDTA במים מזוקקים. התאמת פתרון ה-pH 7.4 עם 10N NaOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאגר 10x PBS: 80G של NaCl, 2.0g של KCl, 14.4g של Na 2 HPO 4, 2.4G של KH 2 PO 4 במים מזוקקים. התאמת פתרון ה-pH 7.0 ולהביא הנפח הכולל עד 1 לייטr. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הפתרון השני: 0.1% β-mercaptoethanol ו לפוראמיד 50% 2x SSPE </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגול Cresyl פתרון אצטט: 3% אצטט סגול cresyl במי ברז (מים מזוקקים מונעת הכתמה טוב), פיזר הלילה עם ערבוב בבקבוק בטמפרטורת החדר. סנן עם היניקה ואקום דרך Whatman 1mm מסנן נייר משפך בוכנר. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

לדעת את העיתוי, ברמה, לוקליזציה נייד, ואת סוג התא הגן מתבטא תורם להבנתנו את הפונקציה של הגן. כל התכונות הללו ניתן להשיג עם ההכלאה ב באתרו כדי mRNAs בתוך התאים. כאן אנו מציגים רדיואקטיבי בשיטת הכלאה באתרו שונה מ קלייטון et al. (1988) 1, כי עובדת בהצלחה במעבדה שלנו במשך שנים רבות, במיוחד שכל בעלי חוליות בוגרים 2-5. הארוכים משלימים RNA (קרנה) בדיקות רצף היעד מאפשר זיהוי של תמלילי שפע נמוכות 6,7. שילוב הנוקליאוטידים רדיואקטיביים לתוך בדיקות קרנה מאפשר רגישות גילוי נוסף של תמלילי שפע נמוכות ניתוחים כמותיים, או על ידי סרט אור רנטגן רגיש או תחליב מצופה על הרקמה. אלה שיטות זיהוי לספק תיעוד ארוך טווח היעד של ביטוי גנים. לעומת הלא רדיואקטיבי בדיקה ספידODS, כגון DIG-תיוג, שיטת בדיקה רדיואקטיבית ההכלאה אינו מחייב צעדים הגברה מרובים באמצעות HRP נוגדנים ו / או ה-TSA ערכת לגילוי תמלילי שפע נמוכים. לכן, שיטה זו מספקת יחס ליניארי בין עוצמת האות לבין כמות ה-mRNA ממוקדים על ניתוח כמותי. הוא מאפשר עיבוד 100-200 שקופיות בו זמנית. זה עובד גם על שלבי ההתפתחות השונים של העובר. מחקרים התפתחותיים ביותר של ביטוי גנים משתמשים עוברים שלמים שאינם רדיואקטיביים גישות 8,9, בין השאר בשל הרקמה העוברית היא שברירית יותר רקמת מבוגר, עם פחות לכידות בין תאים, ולכן קשה לראות את הגבולות בין אוכלוסיות תאים עם קטעי רקמה. לעומת זאת, הגישה שלנו רדיואקטיבי, בשל מגוון גדול יותר של רגישות, הוא מסוגל להשיג ניגודיות גבוהה יותר בהחלטה של ​​ביטוי גנים בין אזורים רקמות, מה שמקל לראות הגבולות בין האוכלוסיות. באמצעות שיטה זו, החוקרים יכלו לחשוף אתמשמעות אפשרית של הגן המזוהה החדש, ובהמשך לחזות את הפונקציה של הגן של עניין.

Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

פרוטוקול זה משמש בהצלחה כמותית לזהות רמות ודפוסים מרחביים של ביטוי mRNA של מספר סוגי רקמות על פני בעלי החוליות. השיטה יכולה לזהות תעתיקי שפע נמוך ומאפשר עיבוד של מאות שקופיות בו זמנית. אנו מציגים את הפרוטוקול באמצעות פרופיל הביטוי של היווצרות העופות המוח העוברי כדוגמה.

רדיואקטיבי באתרו הכלאה לזיהוי תבניות ביטוי מגוונות גנים רקמות

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

הכנת ראשי בתרביות תאים hematopoietic ממח העצם Murine עבור electroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-רדיואקטיבי באתרו הכלאה פרוטוקול ישים עבור נורווגיה Spruce ומגוון של מיני צמחים

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

שימוש מונה תא אוטומטי כדי לפשט את הביטוי מחקרים ג&#39;ין: siRNA מציאה הביטוי IL 4-Gene תלויים תאים Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

תפוקה גבוהה באתרו הכלאה שיטה לאפיון דפוסי ביטוי mRNA של העכבר עוברית בדרכי השתן ואברי המין התחתון

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

ניתוח של שעתוק גנים מהתא הבודד על ידי RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה (דגים)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

הר שלם ברזולוציה גבוהה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה בתוך עוברי דג הזברה לחקר ביטוי גנים ותפקוד

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה לרקמות כליה פורמלין קבועה

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...