Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke alle Jarvis lab medlemmer som forbedret protokollen gjennom årene.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

Vi har ingenting å avsløre.

Radioaktiv in situ hybridisering av mRNA uttrykk er mye brukt til flere formål, blant annet for å studere regional vev organisasjon, celletyper, og hjernen funksjonell aktivitet 2-5,10,12-14. Den senere bruken er på gener som mRNA uttrykk i hjernen er avhengig av økt nevral aktivitet, ofte kalt aktivitets-avhengige gener eller umiddelbare tidlige gener. Med disse bruksområdene, har vår metode er brukt på tvers av flere arter, blant annet i fugler, pattedyr (f.eks menneske), fisk og amfibier, og i flere vev, inkludert hjernen, huden, og muskel, og flere aldre, inkludert hatchlings / nyfødte, ungdyr , voksne, og her i hele embryo deler 2,3,5,15-17. De spesielle funksjonene i protokollen vår er: (1) Det gir en balanse mellom anatomisk spesifisitet og kvantitativ spesifisitet. For å kvantifisere genuttrykket på x-ray film, tar vi digitale bilder av bildene (ex:. Fig. 1A og 1B), bruker Photoshop (Adobe) histogram funksjon å måle pikseltetthet i regionene interesse og subtrahere bakgrunnsnivåene på film utsiden av vev, men fortsatt på glass-slide 2,4. For å kvantifisere uttrykk på cellenivå, tar vi bilder av sølv korn enn celler under høy forstørrelse (40-100X, Fig 4). Deretter bruker vi terskelen og måle funksjoner av Image J ved Wayne Rasband på NIH å telle antall sølv korn i bildet, trekker ut bakgrunnen telle i en lignende område uten celler på glass-slide, dividere med antall celler, å oppnå en verdi av uttrykk per celle. 4,18 (2) Det kan være relativt høy gjennomstrømning, slik at behandling av 100-200 lysbilder samtidig, på grunn av den stramme dekkglass forseglingen skapt av mineralolje bad. Standard in-situ hybridisering metodene tar lengre tid å forsegle lysbilder med Parafilm, neglelakk, og andre virkemidler, hvor lysbilder tar opp mye plass, (3) Det er sværtfølsom for lav overflod avskrift grunn dekstransulfat og Denhardt løsning i hybridiseringen buffer 2,13, (4) imaging tilnærming i mørkefelt gir bilder med høy kontrast grunn til å ta bilder under mørkefelt belysning på en dissekere mikroskop 4,5. I tillegg gir det sensitiv deteksjon av små endringer i genuttrykket, for eksempel i aktivitet-avhengige genuttrykk å identifisere spesifikke områder av hjernen aktiveres under persepsjon og produksjon av spesifikke atferd 19. Begrensningene i forhold til ikke-radioaktive protokoller er at sistnevnte er klarere i den cellulære oppløsning og plassering av mRNA i cellen, og arbeider med emulsjon er svært følsom for manipulasjon og lys. Det er mulig å kombinere vår metode med andre metoder, for eksempel ikke-radioaktive i situ hybridisering til å merke mRNA uttrykk for mer enn ett gen i samme vev 10,17,20. Det kan kombineres med immunocytochemistryå merke både RNA og protein uttrykk på samme prøve for å co-lokalisere mRNA med visse celletyper 10. Protokollinnstillingene modifikasjoner som er nødvendige for slike doble merking eksperimenter er beskrevet i de siterte referanser. I sammendraget, forenkler vår tilnærming forståelse av timing og cellulær lokalisering av genuttrykk for å forstå regionen organisasjon, vev funksjonell aktivitet, og gen-funksjon.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagensen </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Eddiksyre </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> Kloroform </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> Cresyl fiolett acetate </td><td> Sigma </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Cryostat </td><td> Thermo Scientific </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Avionisert formamide </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100mm </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> Inkludering mugg </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> Fisher merke Superfrost pluss lysbilde </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-034-979 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Formaldehyd </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Formamide </td><td> Sigma </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> GENECLEAN kit </td><td> Q-Bio-genet </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak BioMax MR film </td><td> Sigma </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak NTB Emulsion </td><td> Carestream Helse </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Professional utvikler D19 </td><td> Kodak </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak profesjonell Fixer </td><td> Kodak </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoethanol </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Mineralolje </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Sigma </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> Poly A </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> RATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10MM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10MM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10MM </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> PerkinElmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> Safety-Løs løsning </td><td> Sikkerhet Løs Forskning Products International </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumacetat </td><td> Sigma </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> Sodium Dinatriumhydrogenfosfat </td><td> Sigma </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumfosfat monobasic </td><td> Sigma </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6RNA polymerase </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> Beising metall stativ </td><td> Elektron mikroskopi Sciences </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7 RNA polymerase </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> Tissue-Tek oktober </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 5x Transkripsjon buffer </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> Triethanolamine </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCl (1 M, pH 8,0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> tRNA </td><td> Roche </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> Løsninger: <ol><li> Reagenser for making of riboprobes: 1,5 mL DNA template (0.2 til 0,3 mikrogram / mL), 2 mL av 5x optimalisert transkripsjon buffer, en mL av 100mm DTT (kommer med Polymerase fra Promega, mixgodt ved romtemperatur), 0,3 mL av RNasin (40 enheter / mL), 1,5 mL av AGC ribonukleotid blanding løsning, 3,5 mL av S 35 UTP, og en mL RNA polymerase. Ta opp til 10 mL med nukleasefritt vann. </li><li> AGC ribonukleotid mix løsning: Bland like mengder 10mm ATP, GTP og CTP sammen. </li><li> Natriumacetat løsning for EtOH ventet å fjerne gratis S 35 UTP: 40 mL RNase og DNase gratis vann, 5 mL av 3M natriumacetat, og 125 mL av 100% EtOH. </li><li> Hybridisering buffer (10ml lager): 5 ml 100% avionisert formamide, 600 mL av 5M NaCl, 1M tris-HCl (pH = 8,0), 240 mL av 0.5M EDTA (pH = 8,0), 100 mL av 100x Denhart løsning, 100 mL av 1M DTT, 250 mL av 20mg/ml tRNA, 125 mL av 20 mg / ml poly A, og 1 g natrium dekstransulfat. Legg DEPC-behandlet vann for å bringe det totale volumet til 10 ml. Rist kraftig og deretter inkuber ved 55 ° C før alle natrium dekstransulfat er oppløst. Oppbevar hybridisering buffer i-20 ° C, noe som er bra for ~ 6 måneder. </li><li> 4% bufret paraformaldehyde: Tilsett 40 g paraformaldehyde i 760 ml destillert vann i en flaske beregnet for paraformaldehyde, varme til 50 ° C på en varm plate under omrøring. Legg 320 mL av 10N NaOH for å hjelpe oppløse paraformaldehyde. Etter oppløsning (~ 10 min), tilsett 100 ml 10x PBS, og bringe volum opp med destillert vann til 1 liter. Rør og varme løsningen til paraformaldehyde er oppløst. PH bør være 7,4. </li><li> Acetylering buffer: 13,6 ml trietanolamin pluss 2,52 ml eddiksyre i 1 liter destillert vann. </li><li> 20x SSPE løsning: 3M NaCl, 200 mm NaH 2 PO 4-H 2 O, og 200 mm EDTA i destillert vann. Juster løsning til pH 7,4 med 10N NaOH. </li><li> 10x PBS buffer: 80g av NaCl, 2.0G av KCl, 14.4g av Na 2 HPO 4, og 2.4G av KH 2 PO 4 i destillert vann. Juster løsning til pH 7,0 og bringe totalt volum til en liter. </li><li> Second vask løsning: 0,1% β-mercaptoethanol og 50% formamide i 2x SSPE </li><li> Cresyl fiolett acetat løsning: 3% cresyl fiolett acetat i vann fra springen (destillert vann hindrer god flekker), oppløst natten med omrøring i en flaske ved romtemperatur. Filter med vakuum sug gjennom en 1mm Whatman filter papir og Buchner trakt. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

Knowing timing, nivå, cellulær lokalisering, og celletype at et gen blir uttrykt i bidrar til vår forståelse av funksjonen av genet. Hver av disse funksjonene kan utføres med in situ hybridisering til mRNA i cellene. Her presenterer vi en radioaktiv in situ hybridisering metode modifisert fra Clayton et al. (1988) en som har jobbet med suksess i vårt laboratorium i mange år, særlig for voksne virveldyr hjerner 2-5. De lange komplementære RNA (Crna) sonder til målet sekvensen tillater påvisning av lav overflod transkripsjoner 6,7. Inkorporering av radioaktive nukleotider inn i Crna sondene åpner for ytterligere følsomhet for lav overflod utskrifter og kvantitative analyser, enten ved lysfølsom x-ray film eller emulsjon belagt over vev. Disse påvisningsmetoder gir en langsiktig oversikt over mål genuttrykk. Sammenlignet med ikke-radioaktive probe methods, slik som DIG-merking, ikke den radioaktive proben hybridisering metoden ikke krever flere forsterker trinn ved hjelp HRP-antistoffer og / eller TSA kit for å påvise lav overflod transkripsjoner. Derfor gir denne metoden en lineær sammenheng mellom signal intensitet og målrettede mRNA mengder for kvantitativ analyse. Det gjør behandlingen 100-200 lysbilder samtidig. Det fungerer godt for ulike utviklingsstadier av embryoer. Mest utviklingsmessige studier av genekspresjon bruke hele embryoer og ikke-radioaktive tilnærminger 8,9, delvis fordi embryonale vev er mer skjør enn voksen vev, med mindre samhold mellom celler, noe som gjør det vanskelig å se grensene mellom celle populasjoner med vevsdelene. I motsetning er vår radioaktivt tilnærming, på grunn av større utvalg av følsomhet, i stand til å oppnå høyere kontrast i oppløsning av genuttrykk mellom vev regioner, noe som gjør det lettere å se grensene mellom populasjoner. Ved hjelp av denne metoden, kan forskerne avsløremulig betydningen av en nylig identifiserte genet, og videre forutsi funksjonen av genet av interesse.

Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Denne protokollen er med hell brukes til å kvantitativt oppdage nivåer og arealutnyttelse av mRNA uttrykk i flere vevstyper over arter virveldyr. Metoden kan oppdage lav overflod utskrifter og tillater behandling av hundrevis av lysbilder samtidig. Vi presenterer denne protokollen ved hjelp av uttrykk profilering av aviær embryonale hjerne formasjon som et eksempel.

Radioaktivt In situ Hybridisering for å oppdage Diverse Gene Expression Mønstre i Tissue

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Analyse av encellede gentranskripsjon av RNA Fluorescent<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering og analyse av mRNA molekyler med fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

Høy oppløsning Whole Mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering innenfor sebrafisk embryoer å studere Gene Expression og funksjon

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MikroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering for formalinfiksert Nyre Vev

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Måling av Metabolic Rate i<em&gt; Drosophila</em&gt; Hjelp respirometri

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...