Name: radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue
Uploaded: 2012-04-27T13:00:00
Duration: 17 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Yazarlar yılda protokolü geliştirilmiş tüm Jarvis laboratuvar üyelerine teşekkür etmek istiyorum.

<ol>
	<li>Clayton, D. F., Huecas, M. E., Sinclair-Thompson, E. Y., Nastiuk, K. L., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probes+for+rare+mRNAs+reveal+distributed+cell+subsets+in+canary+brain.">Probes for rare mRNAs reveal distributed cell subsets in canary brain.</a> Neuron. 1, 249-261 (1988).</li><li>Wada, K., Sakaguchi, H., Jarvis, E. D., Hagiwara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+glutamate+receptors+in+avian+neural+pathways+for+learned+vocalization.">Differential expression of glutamate receptors in avian neural pathways for learned vocalization.</a> J. Comp. Neurol. 476, 44-64 (2004).</li><li>Haesler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP2+expression+in+avian+vocal+learners+and+non-learners.">FoxP2 expression in avian vocal learners and non-learners.</a> J. Neurosci. 24, 3164-3175 (2004).</li><li>Jarvis, E. D., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor-driven+gene+expression.">Motor-driven gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 4097-4102 (1997).</li><li>Holzenberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+insulin-like+growth+factor+II+in+the+songbird+brain.">Selective expression of insulin-like growth factor II in the songbird brain.</a> J. Neurosci. 17, 6974-6987 (1997).</li><li>Mahmood, R., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+hybridization+of+radioactive+riboprobes+to+RNA+in+tissue+sections.">In-situ hybridization of radioactive riboprobes to RNA in tissue sections.</a> Methods Mol. Biol. 461, 675-686 (2008).</li><li>Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts.">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods Enzymol. 225, 361-373 (1993).</li><li>Acloque, H., Wilkinson, D. G., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+chick+embryos+in+whole-mount+and+tissue+sections.">In situ hybridization analysis of chick embryos in whole-mount and tissue sections.</a> Methods Cell Biol. 87, 169-185 (2008).</li><li>Moorman, A. F., Houweling, A. C., de Boer, P. A., Christoffels, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+nonradioactive+detection+of+mRNA+in+tissue+sections:+novel+application+of+the+whole-mount+in+situ+hybridization+protocol.">Sensitive nonradioactive detection of mRNA in tissue sections: novel application of the whole-mount in situ hybridization protocol.</a> J. Histochem. Cytochem. 49, 1-8 (2001).</li><li>Horita, H., Wada, K., Rivas, M. V., Hara, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dusp1+immediate+early+gene+is+regulated+by+natural+stimuli+predominantly+in+sensory+input+neurons.">The dusp1 immediate early gene is regulated by natural stimuli predominantly in sensory input neurons.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2873-2901 (2010).</li><li>Braissant, O., Wahli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+in+situ+hybridization+protocol+using+non-radioactively+labelled+probes+to+detect+abundant+and+rare+mRNAs+on+tissue+sections.">A simplified in situ hybridization protocol using non-radioactively labelled probes to detect abundant and rare mRNAs on tissue sections.</a> Biochemica. 1, 10-16 (1998).</li><li>Kubikova, L., Wada, K., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+receptors+in+a+songbird+brain.">Dopamine receptors in a songbird brain.</a> J. Comp. Neurol. 518, 741-769 (2010).</li><li>Wada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+neuroethological+approach+for+identifying+and+characterizing+a+cascade+of+behaviorally+regulated+genes.">A molecular neuroethological approach for identifying and characterizing a cascade of behaviorally regulated genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15212-15217 (2006).</li><li>Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+brains+and+a+new+understanding+of+vertebrate+brain+evolution.">Avian brains and a new understanding of vertebrate brain evolution.</a> Nat. Rev. Neurosci. 6, 151-159 (2005).</li><li>Hoke, K. L., Ryan, M. J., Wilczynski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+shift+functional+connectivity+in+the+hypothalamus.">Social cues shift functional connectivity in the hypothalamus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 10712-10717 (2005).</li><li>Burmeister, S. S., Jarvis, E. D., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavioral+and+genomic+responses+to+social+opportunity.">Rapid behavioral and genomic responses to social opportunity.</a> PLoS. Biol. 3, e363 (2005).</li><li>Jarvis, E. D., Schwabl, H., Ribeiro, S., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+gene+regulation+by+territorial+singing+behavior+in+freely+ranging+songbirds.">Brain gene regulation by territorial singing behavior in freely ranging songbirds.</a> Neuroreport. 8, 2073-2077 (1997).</li><li>Jarvis, E. D., Scharff, C., Grossman, M. R., Ramos, J. A., Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+whom+the+bird+sings:+context-dependent+gene+expression.">For whom the bird sings: context-dependent gene expression.</a> Neuron. 21, 775-788 (1998).</li><li>Feenders, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mapping+of+movement-associated+areas+in+the+avian+brain:+a+motor+theory+for+vocal+learning+origin.">Molecular mapping of movement-associated areas in the avian brain: a motor theory for vocal learning origin.</a> PLoS One. 3, e1768 (2008).</li><li>Chen, C. C., Fernald, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+two+gonadotropin-releasing+hormone+receptor+types+in+a+cichlid+fish+suggest+functional+specialization.">Distributions of two gonadotropin-releasing hormone receptor types in a cichlid fish suggest functional specialization.</a> J. Comp. Neurol. 495, 314-323 (2006).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

MRNA in situ hibridizasyon Radyoaktif yaygın bölgesel doku organizasyonu, hücre tipi ve beyin fonksiyonel aktivite 2-5,10,12-14 eğitim dahil olmak üzere farklı amaçlar için kullanılır. Daha sonra kullanmak olan mRNA beyinde artan sinirsel aktivite, sık sık adı verilen aktivite bağımlı genler veya erken genler bağlıdır genler üzerinde. Yavruların / yenidoğan, gençler de dahil olmak üzere ve çoklu yaş; birden dokularda, beyin, deri ve kas dahil olmak üzere; bu kullanımlar ile, yöntem memeliler (örneğin insan), balık ve amfibiler, kuşlar da dahil olmak üzere, birden fazla tür arasında uygulanmış , yetişkin ve burada bütün embriyo bölümlerde 2,3,5,15-17. Bizim protokolünün özel özellikleri şunlardır: (1) Bu anatomik özgüllük ve nicel özgüllük arasında bir denge oluşturur. X-ray film üzerinde gen ekspresyonu ölçmek için, görüntülerin dijital resimler (. Örn: Şekil 1A ve 1B) almak, Pho kullanınilgi bölgelerinde piksel yoğunluğu ölçmek ve doku dışında film arka plan seviyeleri çıkarmak ama hala cam slayt 2,4 açık olarak toshop (Adobe) histogram fonksiyonu. Hücresel düzeyde ifade ölçmek için, yüksek büyütme (; Şekil 4 40-100X) altında hücreleri üzerinde gümüş taneleri görüntüleri çekin. Daha sonra cam slayt üzerine hücreler olmadan benzer bir alanda arka sayımı dışarı çıkarmak, görüntü gümüş tanelerinin sayısını saymak için NIH at Wayne Rasband tarafından Image J eşik ve tedbir işlevlerini kullanın, hücrelerin sayısına göre bölmek hücre başına ifade. 4,18 bir değerleri (2), aynı anda 100-200 slayt işleme izin, mineral yağ banyosu tarafından oluşturulan sıkı coverslip mühür nedeniyle nispeten yüksek verimlilik olabilir. elde etmek için Standart in-situ hibridizasyon yöntemleri parafilm, oje ve slaytlar çok yer kaplayacak diğer araçlar ile slaytlar imzalamak için uzun sürer; (3) yüksek olduğuDekstran sülfat ve hibridizasyon tamponu 2,13 olarak Denhardt çözümü sayesinde düşük bolluk transkript için hassas; (4) karanlık alan içinde görüntüleme yaklaşımı 4,5 bir mikroskop üzerinde karanlık alan aydınlatma altında fotoğraf çekerken nedeniyle yüksek kontrastlı görüntüler verir. Ayrıca, bu tür faaliyetlere bağlı gen ekspresyonu olarak gen ekspresyonu küçük değişiklikler, hassas algılama 19 özel davranış algı ve üretim sırasında aktive spesifik beyin bölgelerinde belirlemenizi sağlar. Radyoaktif olmayan protokoller göre sınırlamalar ikinci hücresel çözünürlük ve hücre içinde mRNA konumunu daha net olduğunu, ve emülsiyon ile çalışan manipülasyon ve ışığa karşı çok duyarlıdır. Aynı doku 10,17,20 birden fazla genin mRNA etiketlemek için in situ hibridizasyon gibi radyoaktif olmayan gibi diğer yöntemlerle birlikte bizim yöntemi birleştirmek mümkündür. Bu immünsitokimya ile kombine edilebiliramacıyla aynı örnek RNA ve protein ifadesini hem etiketlemek için belirli bir hücre tipleri ile 10 mRNA co-lokalize. Bu çifte etiketleme deneyler için gerekli olan protokol modifikasyonlar bahsedilen referanslarda tarif edilmektedir. Özetle, bizim yaklaşım bölge örgütü, doku fonksiyonel aktivite ve gen fonksiyonu anlamak için zamanlama ve gen ekspresyon hücresel konumun anlamayı kolaylaştırır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Asetik anhidrit </td><td> VWR </td><td> MK242002 </td><td></td></tr><tr><td> Kloroform </td><td> VWR </td><td> BDH1109 </td><td></td></tr><tr><td> Kresil violet asetat </td><td> Sigma </td><td> C5042 </td><td></td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Termo bilimsel </td><td> Microm HM550 </td><td></td></tr><tr><td> Deiyonize formamid </td><td> Sigma </td><td> F9037 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> Promega </td><td> P1171 </td><td> 100mM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED </td><td></td></tr><tr><td> Kalıp gömülmesi </td><td> VWR </td><td> 15160-215 </td><td></td></tr><tr><td> Fisher marka SuperFrost Plus slayt </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-034-979 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Formaldehit </td><td> VWR </td><td> BDH0506-4LP </td><td></td></tr><tr><td> Formamid </td><td> Sigma </td><td> F7508 </td><td></td></tr><tr><td> GENECLEAN kiti </td><td> Q-Bio gen </td><td> 1001-200 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak BioMax MR filmi </td><td> Sigma </td><td> Z350370 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak NTB Emülsiyon </td><td> Carestream Health </td><td> 8895666 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Profesyonel geliştirici D19 </td><td> Kodak </td><td> 1462593 </td><td></td></tr><tr><td> Kodak Profesyonel Fixer </td><td> Kodak </td><td> 1971746 </td><td></td></tr><tr><td> β-merkaptoetanol </td><td> Calbiochem </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> Madeni yağ </td><td> VWR </td><td> IC15169491 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> VWR </td><td> SX0600-1 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Sigma </td><td> 76240 </td><td></td></tr><tr><td> Poli A </td><td> Invitrogen </td><td> POLYA.GF </td><td></td></tr><tr><td> RATP </td><td> Promega </td><td> P1132 </td><td> 10mM </td></tr><tr><td> rCTP </td><td> Promega </td><td> P1142 </td><td> 10mM </td></tr><tr><td> rGTP </td><td> Promega </td><td> P1152 </td><td> 10mM </td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N2111 </td><td> 40Units/μl </td></tr><tr><td> S 35 UTP </td><td> Perkin Elmer </td><td> NEG039C001MC </td><td></td></tr><tr><td> Emniyet-çözün çözüm </td><td> Güvenliği Araştırma Ürünler Uluslararası çözün </td><td> 111177 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum Asetat </td><td> Sigma </td><td> S7899 </td><td> 3M </td></tr><tr><td> Sodyum fosfat dibazik </td><td> Sigma </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum fosfat monobazik </td><td> Sigma </td><td> S3139 </td><td></td></tr><tr><td> SP6RNA polimeraz </td><td> Promega </td><td> P1085 </td><td></td></tr><tr><td> Metal raf boyama </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 70312-54 </td><td></td></tr><tr><td> T7 RNA polimeraz </td><td> Promega </td><td> P2075 </td><td></td></tr><tr><td> Doku-Tek Ekim </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 5x Transkripsiyon tampon </td><td> Promega </td><td> P1181 </td><td></td></tr><tr><td> Trietanolamin </td><td> VWR </td><td> IC15216391 </td><td></td></tr><tr><td> Tris-HCl (1 M, pH 8,0) </td><td> VWR </td><td> 101449-446 </td><td></td></tr><tr><td> tRNA </td><td> Roche </td><td> 10109509001 </td><td></td></tr></tbody></table> Çözümler: <ol><li> Riboprobes yapımı için Reaktifler: 1.5 ul DNA örneğinin (0.2-0.3 mg / ml), 5x optimize transkripsiyon tampon 2 ul, 100 mM DTT 1 ul (Promega gelen Polimeraz ile gelir, mixayrıca, oda sıcaklığında), 0.3 ul RNasin (40 ünite / ul), AGC ribonukleotid karışım çözeltisi, G 35 UTP 3.5 ul, ve 1 ul RNA polimeraz 1.5 ul. Nükleaz içermeyen su ile 10 ul kadar getir. </li><li> AGC ribonükleotid karışım çözeltisi: 10 mM ATP, GTP ve birlikte CTP eşit miktarda karıştırın. </li><li> 40 ul RNaz ve DNaz ücretsiz su, 3M Sodyum asetat ve% 100 EtOH 125 ul 5 ul: ücretsiz S 35 UTP kaldırmak EtOH yağış Sodyum asetat çözeltisi. </li><li> Hibridizasyon tampon maddesi (10 ml stok):% 100 deiyonize formamid, 5M NaCl 600 ul, 1M tris-HCl (pH = 8.0), 5 ml, 0.5 M EDTA 240 ul (pH = 8.0), 100 kat Denhart çözümü 100 ul, 1M DTT, 20mg/ml tRNA, 20 mg / ml poli A 125 ul, ve sodyum dekstran sülfat ile 1 g, 250 ul 100 ul. 10 ml kadar toplam hacme getirmek için DEPC-arıtılmış su ilave edilir. Tüm sodyum dekstran sülfat eriyene kadar 55 ° C&#39;de inkübe sonra şiddetle çalkalanır ve. Içinde hibridizasyon tamponu Mağaza~ 6 ay boyunca iyi -20 ° C,. </li><li> 4% paraformaldehit çözeltisi tamponlu: paraformaldehit için tasarlanmış, 50 ° C ısıya kadar bir sıcak plaka üzerinde karıştırılarak bir şişeye 760 ml saf suda paraformaldehit ile 40 g ekleyin. Paraformaldehit eritmek için 10N NaOH 320 ul ekleyin. (~ 10 dk) çözüldükten sonra, 10x PBS 100 ml ekleyin ve 1 litre kadar saf su ile ses getirmek. Karıştırın ve paraformaldehit eriyene kadar çözüm ısıtın. PH 7.4 olmalıdır. </li><li> Asetilasyon tamponu: trietanolamin 13.6 ml damıtılmış su artı 1 litre asetik anhidrit 2.52 ml. </li><li> 20x SSPE çözüm: 3M NaCl 200 mM NaH 2 PO 4-H 2 O, ve distile su ile 200 mM EDTA. 10N NaOH ile pH 7.4 &#39;e ayarlamak çözeltisi. </li><li> 10x PBS tamponu: 80g NaCl, KCl 2.0g, Na 2 HPO 4 14.4g, ve KH 2 2.4 g distile su PO 4. PH 7.0 &#39;çözüm ayarlayın ve 1 lite toplam hacmi getirecekr. </li><li> İkinci yıkama solüsyonu:% 0.1 β-merkaptoetanol ve 2x SSPE% 50 formamid </li><li> Cresyl viyole asetat çözeltisi: musluk suyunda% 3 cresyl viyole asetat (damıtılmış su iyi boyama önler), oda sıcaklığında, bir döküm kalıbı içinde karıştırma ile bir gece boyunca eritildi. Bir 1mm Whatman filtre kağıdı ve Büchner hunisi ile suction filtre. </li></ol>

radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue

Bir gen ile ifade edilen bir zamanlama, seviye, hücresel yerleşimi ve hücre tipi bilmek genin işlevinin anlayışımıza katkıda bulunmakta. Bu özelliklerin her biri hücre içinde mRNA in situ hibridizasyon ile gerçekleştirilebilir. Burada Clayton ve ark. (1988) 1 özellikle yetişkin omurgalı beyinleri 2-5 için, yıllardır bizim laboratuarımızda başarıyla çalışmaktadır modifiye in situ hibridizasyon yöntemi radyoaktif bir sunuyoruz. Hedef diziyle uzun tamamlayıcı RNA (cRNA) probları düşük bolluk transkript 6,7 tespiti için izin verir. CRNA problar radyoaktif nükleotidlerin Kuruluş düşük bolluğu transkript ve kantitatif analizleri daha da algılama hassasiyetini sağlar, ya da ışığa duyarlı x-ray film veya doku üzerinde kaplı emülsiyon tarafından. Bu yöntemler hedef gen ekspresyonunun uzun vadeli bir kaydın sağlar. Radyoaktif olmayan prob met ile karşılaştırıldığındaBöyle DIG-etiketleme gibi ODS, radyoaktif prob hibridizasyon metodu düşük bolluğu transkriptlerin algılamak için HRP-antikorları ve / veya TSA kiti kullanılarak çok sayıda amplifikasyon adımları gerektirmez. Bu nedenle bu yöntem kantitatif analiz için sinyal şiddeti ve hedeflenen mRNA miktarları arasında doğrusal bir ilişki sağlar. Aynı anda 100-200 slaytlar işleme izin verir. Bu embriyolar farklı gelişim evreleri için de çalışıyor. Embriyonik doku zor doku bölümleri ile hücre popülasyonu arasındaki sınırları görmek için yapım, hücreler arasında daha az uyum ile, yetişkin dokuya göre daha kırılgan olduğu için gen ekspresyonu pek çoğu gelişimsel çalışmaları kısmen insan embriyosu ve radyoaktif olmayan yaklaşımlar 8,9 kullanın. Buna karşılık, hassasiyet büyük aralığı nedeni ile radyoaktif yaklaşımı, daha kolay popülasyonlar arasındaki sınırları görmek için yapım, doku bölgeleri arasında gen ekspresyonu çözünürlükte yüksek kontrast elde edebilmektedir. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar ortaya koyabilirBir yeni tanımlanan gen mümkün önemi, ve daha da ilgi genindeki fonksiyonu tahmin.

Watch this Scientific Journal Video about Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue at JoVE.com

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

Bu protokol başarıyla kantitatif omurgalı türlerin birden çok doku tipleri düzeyleri ve mRNA mekansal kalıpları tespit etmek için kullanılır. Yöntem, düşük bolluk transkript algılamak ve aynı anda slayt yüzlerce işleme izin edebilirsiniz. Biz örnek olarak kuş embriyonik beyin oluşumu ekspresyon profili kullanarak bu protokolü sunarız.

Radyoaktif In situ</emDoku Çeşitli Gen Patterns Saptayan> Hibridizasyon

Knowing the timing, level, cellular localization, and cell type that a gene is expressed in contributes to our understanding of the function of the gene. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Radioactive in situ Hybridization for Detecting Diverse Gene Expression Patterns in Tissue

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Hazırlık Elektroporasyon murin Kemik İliği itibaren İlköğretim Hematopoetik Hücre Kültürleri

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Radyoaktif olmayan In situ Hibridizasyon Norveç Ladin Uygulanacak Protokol ve Bitki Türlerinin Aralığı

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Gen İfadesi Çalışmaları basitleştirin Otomatik Hücre Sayıcı kullanma: Namalwa Hücreler IL-4 Bağımlı Gen İfadesi siRNA demonte

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Active T. in vitro Sulandırma castaneum Telomeraz

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Yüksek Verimli In situ</emFetal Fare Alt Ürogenital Yolu mRNA İfade Desenler Karakterize> Hibridizasyon Yöntemi

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

RNA Floresan tarafından Tek hücreli Gen Transkripsiyon Analizi<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridizasyon (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Floresan kullanarak mRNA Moleküllerin Görselleştirme ve Analiz<em&gt; Yerinde</emIn&gt; Hibridizasyon<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

Yüksek Çözünürlüklü Tüm Dağı<em&gt; Yerinde</emGen İfade ve Fonksiyon Eğitim için Zebra balığı Embriyolar içinde&gt; Hibridizasyon

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Formalin Sabit Böbrek Dokular Hibridizasyon

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolik Oranı Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Respirometrik kullanarak

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Radyoaktif In situ Hibridizasyon