Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

وأيد هذا العمل جزئيا عن طريق المنح من فينيتو Regione (من Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 ومن Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). الكتاب أشكر الدكتور جيم Griffoni للبيانات 2009/2010 ملخص عن استخدام الكرات العين البشرية.

1. في الاستئصال الموقعي للقرنية العين من الكرات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على تدفق الهواء الصفحي مجلس الوزراء حوالي 15 دقيقة قبل الاستخدام. تنظيف غطاء محرك السيارة باستخدام تدفق رقائقي ايزوبروبيل 70٪. ارتداء ملابس الوقاية الشخ...

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

كلا، الختان الصحيح والسليم لحفظ الأنسجة القرنية والشبكية حاسمة كما وجود بعض العيوب البسيطة مثل تلف بطانة الأوعية الدموية أو عدد كبير من طيات descemet ويمكن أن يؤدي إلى فشل الكسب غير المشروع للقرنية في حين التعديلات درجة الحرارة أو سوء يمكن ان تعرض للخطر سلامة أنسجة الشب...

المواد اللازمة لاستئصال القرنية والشبكية. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> وصف المنتج </td><td> الأبعاد </td><td> شركة / معهد </td></tr><tr><td> حراسة المتاح مشرط </td><td> حجم شفرة 15 </td><td> سوان، مورتون </td></tr><tr><td> ضمادات معقمة </td><td> 5 سم × 5 سم، 8 الطبقات، 5 قطع </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> منشفة معقمة الطبية القابل للتصرف </td><td> 35 X 50 سم </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> معقم مقص </td><td> ريش 24 مم / الطول الاجمالي. 95 مم المنحني، كليل </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> ملقط معقم </td><td> الفولاذ المقاوم للصدأ 11 ملم -100 X 2 يحكمها 0،70 ملم أسنان </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> القرنية مخلب - الجهاز الطبي المتاح </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> الاستعدادات </td><td></td></tr><tr><td> برنامج تلفزيوني </td><td> 100 مل PBS [10X] في 900 مل (الماء المقطر) د / ث </td><td> سيغما الدريخ </td></tr><tr><td> NA-ثيوكبريتات </td><td> 1 جرام الصوديوم، ثيوكبريتات في 1 لتر من برنامج تلفزيوني [1X] </td><td> سيغما الدريخ </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 جم I-PVP في 1 د لتر / ث </td><td> سيغما الدريخ </td></tr></tbody></table> الجدول 2. يصف الجدول المواد التي تستخدم في استئصال القرنية والشبكية والشركة تلقيها من. مواد وسيطة تخزين (2000 مل). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مكونات </td><td> المزود </td><td> فهرس العدد </td><td> تركيز </td><td> كمية </td></tr><tr><td> MEM(1X) السائل </td><td> إينفيتروجن </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 مل </td></tr><tr><td> الصوديوم البيروفات </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11360-039 </td><td> 1MM (10ML / لتر) </td><td> 20 مل </td></tr><tr><td> L-الجلوتامين </td><td> إينفيتروجن </td><td> 25030-032 </td><td> 2mm في (10ML / لتر) </td><td> 20 مل </td></tr><tr><td> مضاد حيوي / مضاد فطري </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A5955-20ML </td><td> 10ML / لتر </td><td> 20 مل </td></tr><tr><td> الوليد العجل المصل </td><td> إينفيتروجن </td><td> 26010-74 </td><td> 2٪ (20 مل / لتر) </td><td> 40 مل </td></tr></tbody></table> الجدول 3. مواد وسيطة تخزين. إعداد وسائط تخزين إضافة جميع المكونات باستخدام تركيزات محددة على النحو المبين أعلاه في وعاء وتخلط جيدا. تصفية لهمباستخدام حجم المسام من فلتر ميكرون 0.2 (ميليبور، ميلانو، ايطاليا) مع مساعدة من مضخة تمعجية. الحفاظ على المتوسط ​​في زجاجات على RT. المواد اللازمة لنقل متوسطة (2000 مل). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مكونات </td><td> المزود </td><td> فهرس العدد </td><td> تركيز </td><td> كمية </td></tr><tr><td> MEM (1X) السائل </td><td> إينفيتروجن </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 مل </td></tr><tr><td> الصوديوم البيروفات </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11360-039 </td><td> 1MM (10 مل / لتر) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-الجلوتامين </td><td> إينفيتروجن </td><td> 25030-032 </td><td> 2mm في (10 مل / لتر) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> الوليد العجل المصل </td><td> إينفيتروجن </td><td> 26010-74 </td><td> 2٪ (20 مل / لتر) </tد&gt; <td> 40 مل </td></tr><tr><td> ديكستران T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6٪ (60 جم ​​/ لتر) </td><td> 120 غرام / لتر </td></tr></tbody></table> الجدول 4. المواد لمتوسطة وسائل النقل. إعداد المتوسطة النقل إضافة ديكستران 6٪ في لتر من 1.5 ~ MEM وترك الأمر بين عشية وضحاها. إضافة باقي المكونات في وسائل الاعلام وتصفيتها باستخدام 0.2 ميكرون فلتر (ميليبور، ميلانو، ايطاليا) باستخدام مضخة فراغ. الحفاظ على المتوسط ​​في زجاجات على RT.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

وتصف الورقة تقنية مبسطة لاستئصال القرنية وسلب أنسجة شبكية العين من الكرة الأرضية من الجهات المانحة جثي الإنسان. ووصف هذه التقنية هنا ستساعد على استئصال الأنسجة ذات نوعية جيدة لاستخدامها في زراعة الأعضاء، وأغراض الجراحية أو البحث دون الإضرار الأنسجة الأخرى من الكرة الأرضية العين.

أسلوب مبسط لل<em&gt; في الموقع</em&gt; استئصال القرنية ونزع الأحشاء من نسيج شبكي من الكرة الأرضية العين البشرية

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

تقنية لجمع كمئي (التذوق) النتوئات الإنسان من اللسان

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

أسلوب مبسط لإنتاج نموذج الجرح الدماغية

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

متعدد القطب تسجيلات صفيف من داء الصرع بعد الجراحة القشرية الأنسجة البشرية

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

عزل واستئصال الفئران الأبهر. تقنية متعددة الاستخدامات في دراسة أمراض القلب والأوعية الدموية

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

إنشاء الإنسان الظهارية Enteroids وColonoids من الأنسجة كامل وخزعة

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

العمل مع الأنسجة البشرية لبالحركة أبحاث السرطان

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

التصوير بالموجات فوق الصوتية ثلاثية الأبعاد: مورفوميتري سريعة وفعالة من حيث التكلفة لانسجة العضلات والعظام

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

سحجه الظهارة القرنية مع لدغ العين كنموذج للقرنية التئام الجروح

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

تأثير تركيبات المسيل للدموع الاصطناعية على النشاط الأيضي للخلايا الظهارية القرنية البشرية بعد التعرض للديسيكيشن

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

توصيف رواية الإنسان Organotypic تقنية ثقافة الشبكية

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...