Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet dels gennem tilskud fra Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 og Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Forfatterne takker Dr. C. Griffoni for 2009/2010 summariske data om brugen af ​​menneskelige okulære glober.

1. In situ Udskæring af hornhinden fra Ocular Glober <ol><li> Tænd for laminar air flow-skab ca 15 minutter før brug. Rengøre laminært flow anvendelse af 70% isopropylalkohol. Tag personlig beskyttelsesbeklædning såsom kirurgisk hætte og maske. Skrub hænder og underarme og tørre ved hjælp af en steril håndklæde. Brug sterile handsker og kittel eller ærmer ved hjælp af aseptisk teknik. </li><li> Opstil sterile område ved at placere et sterilt instrument bakke aseptisk. Kontroller, at instrument...

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Både korrekt udskæring og korrekt opbevaring af hornhinde-og retinal væv er kritisk, da mindre fejl som f.eks endotel skader eller høje antal Descemets folder kan føre til graft svigt af hornhinden mens temperatur ændringer eller forkert håndtering kan kompromittere integriteten af ​​retinale væv. Formålet med dette oplæg er at vise, hvordan hornhinde og retinal væv kan isoleres optimalt, uden at fremkalde skader eller ændringer, der kan kompromittere deres anvendelse til transplantation eller forsknings...

Materialer til udskæring af hornhinden og retina. <table border="1"><tbody><tr><td> Produktbeskrivelse </td><td> Mål </td><td> Virksomhed / Institute </td></tr><tr><td> Bevogtet engangs skalpel </td><td> Blade størrelse 15 </td><td> Swann Morton- </td></tr><tr><td> Sterile bandager </td><td> 5 cm x 5 cm, 8 lag, 5 stk </td><td> ARTSANA </td></tr><tr><td> Sterile medicinske engangsprodukter håndklæde </td><td> 35 x 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Sterile saks </td><td> Blades 24 mm / samlede længde. 95 mm buet, stump </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Steril tang </td><td> Rustfrit stål -100 mm 11 X 2 regeres af 0,70 mm tænder </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Corneal klo - engangs-medicinsk udstyr </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Forberedelser </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml PBS [10x] i 900 ml d / w (destilleret vand) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-thiosulfat </td><td> 1 g Na-thiosulfat i 1 liter PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I PVP </td><td> 5 g I-PVP i 1 liter d / w </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tabel 2 nedenfor. Tabellen beskriver de anvendte materialer til udskæring af hornhinden og retina og firmaet de modtages fra. Materialer til lagermediet (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Komponenter </td><td> Leverandør </td><td> Katalog nummer </td><td> Koncentration </td><td> Mængde </td></tr><tr><td> MEM(1X) flydende </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiotisk / antimykotisk </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20 ml </td><td> 10 ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Nyfødt kalveserum </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 3. Materialer til opbevaring medium. Fremstillinq af lagermedium Tilsæt alle bestanddelene med de specifikke koncentrationer som angivet ovenfor i en beholder og bland godt. Filtrere demved hjælp af porestørrelse på 0,2 mikron filter (Millipore, Milano, Italien) med hjælp af en peristaltisk pumpe. Bevare medium i kolberne ved stuetemperatur. Materialer til transportmedium (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Komponenter </td><td> Leverandør </td><td> Katalog nummer </td><td> Koncentration </td><td> Mængde </td></tr><tr><td> MEM (1X) væske </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> Nyfødt kalveserum </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / liter) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tabel 4. Materiale til transportmediet. Fremstillinq af transportmedium Tilføj Dextran 6% i ~ 1,5 liter MEM og lad det natten over. Tilsæt resten af ​​ingredienserne i medierne og filtreres under anvendelse af 0,2 mikrometer filter (Millipore, Milano, Italien) med en vakuumpumpe. Bevare medium i kolberne ved stuetemperatur.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleation er den proces at hente den okulære jorden fra en ligdel donor efterlader resten af ​​verden uforstyrret. Excision refererer til genfinding af øjenvæv, især hornhinde, ved at skære den adskilt fra det okulære verden. Udtagning er processen med at fjerne de indre organer nævnte her retina. Den okulære globus består af hornhinden, sclera, glaslegemet, linsen, iris, retina, årehinden, muskler osv. (Suppl. figur 1). Når en patient lider af hornhindeskade, hornhinden skal fjernes, og et sundt skal transplanteres ved keratoplastiske operationer. Genetiske sygdomme eller mangler i nethindens funktion kan kompromittere vision. Humane okulare glober kan anvendes til forskellige kirurgiske procedurer, såsom øjet bank, transplantation af human cornea eller sclera og forskning på øjenvæv. Der er imidlertid kun lidt information tilgængelig om human cornea og retinal excision, sandsynligvis på grund af limited adgang til humane væv. De fleste af de undersøgelser, der beskriver fremgangsmåder svarende udføres på dyremodeller. Forskere afhængige af tilgængeligheden af ​​korrekt dissekerede og velbevaret okulære væv med henblik på at udvide viden om menneskelige øje udvikling, homeostase og funktion. Da vi modtager stor mængde af okulære globusser, hvoraf omkring 40% (tabel 1) af dem anvendes til forskningsformål, vi er i stand til at udføre enorme mængde af eksperimenter på disse væv, definere teknikker til punktafgifter og bevare dem regelmæssigt. Hornhinden er en avaskulær væv, som muliggør transmission af lys på nethinden, og til dette formål bør altid opretholde en god grad af transparens. I hornhinden, hjælper limbus region, som er et reservoir af stamcellerne, genopbygning af epitelceller og begrænser overvækst af conjunctiva opretholde hornhindens transparens og klarhed. Størrelse og th<html> ickness af hornhinden er afgørende for klar vision, som ændringer i nogen af ​​dem kunne føre til distraheret, uklart syn. Hornhinden består af 5 lag, a) epitel, b) Bowmans lag, c) stroma, d) Descemets membran og e) endotel. Alle lag skal fungere korrekt, at sikre en klar vision 4,5,6. Årehinden er den mellemliggende tunika mellem sclera og retina, afgrænset indvendigt af Bruch membran og er ansvarlig for blodgennemstrømningen i øjet. Årehinden hjælper også til at regulere temperaturen og leverer næring til de ydre lag af nethinden 5,6. Nethinden er et lag af nervevæv, der dækker ryggen af den okulære jorden (Suppl. figur 1) og består af to dele: en photoreceptive del og en ikke-modtagelig del. Nethinden hjælper til at modtage lys fra hornhinden og linsen, og konverterer det til den kemiske energi sidst overføres til hjernen med hjælp af den optiske nerve 5,6. ove_content &quot;&gt; Formålet med dette oplæg er at give en protokol til dissektion af hornhinde-og retinal væv fra humane okulare glober. Undgå krydskontaminering med tilstødende væv og bevarelse af RNA-integritet er af afgørende betydning, da disse væv er uundværlige for forskning med henblik formål i (i) karakterisering af transkriptomet af okulære væv, (ii) at isolere stamceller til regenerativ medicin projekter, og (iii) at evaluere histologiske forskelle mellem væv fra normale / berørte personer. I dette papir beskriver vi den teknik, vi i øjeblikket bruger til at fjerne hornhinden, årehinden og nethinden væv fra en okulær verden. Her giver vi en detaljeret protokol for dissektion af det menneskelige øje kloden og udskæring af hornhinde og retinal væv. Den medfølgende video vil hjælpe forskerne til at lære en passende teknik for indhentning af kostbare humane væv, som er vanskelige at finde regelmæssigt.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Papiret beskriver en forenklet teknik til punktafgifter hornhinde og eviscerate retinale væv fra okulær verden af ​​menneskelige ligdel donorer. Den her beskrevne teknik vil hjælpe med til punktafgiftspligtige god kvalitet væv, der skal anvendes til transplantation, kirurgiske eller forskningsformål uden at beskadige andre væv i øjet verden.

En forenklet teknik for<em&gt; In situ</em&gt; Excision af hornhinden og udtagning af retinavæv fra menneskelige øje Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

En forenklet teknik til at producere et iskæmisk sår model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multi-elektrodeformation Optagelser af menneskelige Epileptiske Postoperativ cortexvæv

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolering og udtagelse af murint Aorta; Et alsidigt Teknik I undersøgelsen af ​​kardiovaskulær sygdom

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

Etablering af menneskelige Epithelial Enteroids og Colonoids fra Whole Tissue og biopsi

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Arbejde med Humane væv til Translationel kræftforskning

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

3D ultralyd billedbehandling: hurtig og omkostningseffektiv morfometri bevægeapparatet væv

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Hornhindens epitel slid med okulær Burr som en Model for hornhinden sårheling

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Effekt af kunstige tåreformuleringer på metabolisk aktivitet af humane hornhinde epitelceller efter udsættelse for udtørring

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Karakterisering af en ny human organotypic retinal kultur teknik

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...