Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

Dit werk werd mede ondersteund door subsidies van de Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 en Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). De auteurs danken dr. C. Griffoni voor de 2009/2010 beknopte gegevens over het gebruik van menselijke oculaire bollen.

1. In situ Excisie van het hoornvlies van Ocular Globes <ol><li> Schakel de laminaire flow-kast 15 minuten vóór gebruik. Maak de laminaire stroming kap met behulp van 70% isopropylalcohol. Zet op persoonlijke beschermende kleding, zoals chirurgische pet en masker. Scrub handen en onderarmen en afdrogen met een steriele doek. Draag steriele handschoenen en een schort of bussen met een aseptische techniek. </li><li> Stel de steriele veld door het plaatsen van een steriel instrument lade aseptisch. Controleer ...

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Zowel de juiste excisie en een goede bewaring van het hoornvlies en het netvlies weefsels zijn van cruciaal belang als kleine gebreken, zoals endotheliale schade of hoog aantal van Descemet plooien kan leiden tot transplantaatfalen van het hoornvlies terwijl de temperatuur wijzigingen of verkeerd gebruik kan de integriteit van het netvlies weefsels in gevaar brengen. Het doel van dit artikel is te laten zien hoe het hoornvlies en het netvlies weefsels optimaal worden geïsoleerd, zonder het induceren van schade of wijzi...

Materialen voor excisie van hoornvlies en netvlies. <table border="1"><tbody><tr><td> Product omschrijving </td><td> Afmeting </td><td> Bedrijf / Instituut </td></tr><tr><td> Bewaakte wegwerp scalpel </td><td> Blade grootte 15 </td><td> Swann-Morton </td></tr><tr><td> Steriel verband </td><td> 5 cm x 5 cm, 8 gelaagd, 5 stuks </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Steriele disposable medische handdoek </td><td> 35 X 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Steriele scharen </td><td> Bladen 24 mm / totale lengte. 95 mm gebogen, stompe </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Steriel pincet </td><td> Roestvrij staal -100 mm 11 X 2 geregeerd door 0,70 mm tanden </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Cornea klauw - Wegwerp medisch hulpmiddel </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Voorbereidingen </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml PBS [10x] in 900 ml d / w (gedestilleerd water) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-thiosulfaat </td><td> 1 g Na-thiosulfaat in 1 liter PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 g I-PVP in 1 liter d / w </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tabel 2. De tabel beschrijft de gebruikte materialen voor excisie van het hoornvlies en het netvlies en het bedrijf waar ze worden ontvangen uit. Materialen voor opslagmedium (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Componenten </td><td> Leverancier </td><td> Catalogusnummer </td><td> Concentratie </td><td> Hoeveelheid </td></tr><tr><td> MEM(1X) vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvaat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiotica / antimycotica </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Pasgeboren kalf serum </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 3. Materialen voor opslagmedium. Bereiding van opslagmedium Voeg alle ingrediënten met behulp van de specifieke concentraties zoals hierboven gegeven in een pot en meng goed. Filterenmet poriegrootte van 0,2 micron filter (Millipore Milaan, Italië) met behulp van een peristaltische pomp. Behouden het medium in de flessen bij KT. Materialen voor transportmedium (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Componenten </td><td> Leverancier </td><td> Catalogusnummer </td><td> Concentratie </td><td> Hoeveelheid </td></tr><tr><td> MEM (1X) vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvaat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> Pasgeboren kalf serum </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / liter) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tabel 4. Materiaal voor transportmedium. Voorbereiding van transportmedium Voeg Dextraan 6% in ~ 1.5 liter van MEM en &#39;s nachts te laten. Voeg de rest van de ingrediënten in de media en filteren met behulp van 0,2 micron filter (Millipore, Milaan, Italië) met behulp van een vacuümpomp. Behouden het medium in de flessen bij KT.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleatie is het proces van het ophalen van de oculaire hele wereld van een overleden donor en de rest van de wereld ongestoord. Excisie verwijst naar het ophalen van oculaire weefsels, in het bijzonder hoornvlies, door een vermindering van het los van het oculair wereld. Ingewanden is het verwijderen van de ingewanden hier aangeduid als retina. De oculaire wereld bestaat uit het hoornvlies, de sclera, het glasachtig lichaam, de lens, de iris, het netvlies, het vaatvlies, spieren enz. (Suppl. figuur 1). Wanneer een patiënt lijdt aan beschadiging van het hoornvlies, de cornea verwijderd moet worden en een gezonde men moet worden getransplanteerd door keratoplastische operaties. Genetische aandoeningen of gebreken in functie van de retina in gevaar kunnen brengen visie. Menselijke oculaire bollen kan worden gebruikt voor verschillende chirurgische procedures, zoals de ogen bankieren, transplantatie van menselijke cornea of ​​sclera en onderzoek op het oculaire weefsels. Er is echter weinig informatie beschikbaar over het menselijk hoornvlies en het netvlies excisie, waarschijnlijk te wijten aan de limited toegankelijkheid van menselijke weefsels. De meeste studies beschrijven van soortgelijke procedures worden uitgevoerd op diermodellen. Onderzoek wetenschappers rekenen op de beschikbaarheid van goed ontleed en goed geconserveerde oculaire weefsels in om de kennis uit te breiden op de menselijke ogen ontwikkeling, homeostase en functie. Zoals we ontvangen hoog bedrag van oculaire bollen, waarvan ongeveer 40% (tabel 1) van hen worden gebruikt voor onderzoeksdoeleinden zijn wij in staat om grote hoeveelheid experimenten uit te voeren op deze weefsels, het definiëren van technieken om de accijnzen en regelmatig te bewaren hen. Het hoornvlies is een avasculaire weefsel dat de transmissie van licht in staat stelt op het netvlies en voor dit doel moet altijd handhaven van een goede mate van transparantie. Binnen het hoornvlies, de limbus regio, die is een reservoir van de stamcellen, helpt de reconstructie van epitheliale cellen en beperkt de begroeiing van het bindvlies behoud van het hoornvlies transparantie en duidelijkheid. De grootte en e<html> ickness van het hoornvlies zijn van cruciaal belang voor de duidelijke visie, zoals veranderingen in een van beide zou kunnen leiden tot afgeleid, onduidelijke visie. Het hoornvlies bestaat uit 5 lagen; a) epitheel, b) Bowman&#39;s laag, c) stroma, d), Descemet membraan en e), endotheel. Alle lagen moeten goed functioneren om te zorgen voor duidelijke visie 4,5,6. Het vaatvlies is de intermediair tuniek tussen de sclera en de retina, begrensd aan de binnenkant van de membraan van Bruch en is verantwoordelijk voor de bloedstroom in het oog. De choroid helpt om de temperatuur en levert voeding regelen op de buitenste lagen van het netvlies 5,6. Het netvlies is een laag van zenuwweefsel dat de achterkant van het oculair wereld (Suppl. figuur 1) omvat en bestaat uit twee delen: een photoreceptive deel en een niet-ontvankelijke deel. Het netvlies zorgt voor het ontvangen van het licht van het hoornvlies en de lens en zet het om in de chemische energie uiteindelijk doorgegeven aan de hersenen met behulp van de optische zenuw 5,6. ove_content &quot;&gt; Het doel van dit artikel is om een ​​protocol voor het ontleden van het hoornvlies en het netvlies weefsels van menselijke oculaire bollen. Het vermijden van kruisbesmetting met aangrenzende weefsels en het behoud van RNA integriteit is van fundamenteel belang als dergelijke weefsels onmisbaar zijn voor gericht onderzoeksdoeleinden op (i) het karakteriseren van het transcriptoom van de oculaire weefsels, (ii) het isoleren van stamcellen voor regeneratieve geneeskunde projecten, en (iii) de evaluatie van histologische verschillen tussen de weefsels van de normale / getroffen personen. In dit artikel beschrijven we de techniek die we nu gebruiken voor het verwijderen het hoornvlies, het vaatvlies en het netvlies weefsels van een oculaire hele wereld. Hier bieden wij u een gedetailleerd protocol voor de ontleding van het menselijk oculaire hele wereld en de excisie van het hoornvlies en het netvlies weefsels. De bijbehorende video zal onderzoekers helpen om een ​​geschikte techniek voor het ophalen te leren kostbare weefsels die moeilijk regelmatig vinden.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

De paper beschrijft een vereenvoudigde techniek om accijnzen hoornvlies en het netvlies weefsels uithalen van de oculaire bol van de menselijke postmortale donoren. De techniek die hier beschreven zal helpen om accijnzen goede kwaliteit weefsels worden gebruikt voor transplantatie, chirurgisch of wetenschappelijke doeleinden zonder deze te beschadigen andere weefsels van het oculair wereld.

Een vereenvoudigde methode voor<em&gt; In situ</em&gt; Excisie van het hoornvlies en het verwijderen van de ingewanden van retinaal weefsel van Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Techniek om Fungiform (smaak) papillen verzamelen van Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Een vereenvoudigde methode voor het produceren van een ischemische Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multi-electrode array Opnamen van Human Epileptische Postoperatieve Cortical Tissue

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolatie en Excisie van Muriene Aorta; Een veelzijdige techniek in de studie van hart- en vaatziekten

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

Oprichting van Human Epithelial Enteroids en Colonoids van Whole Tissue en Biopsie

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Werken met menselijke weefsels for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

3D echografie Imaging: snelle en rendabele Morphometry van Musculoskeletal Tissue

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Hoornvlies epitheliale schuren met oogbeschadigingen en/of Burr als een Model voor hoornvlies wondgenezing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Effect van kunstmatige traanformuleringen op de metabolische activiteit van menselijke cornea-epitheelcellen na blootstelling aan uitdroging

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Karakterisering van een nieuwe menselijke organotypische retinale cultuurtechniek

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...