Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

Diese Arbeit wurde teilweise durch Zuschüsse der Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 und Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009) unterstützt. Die Autoren danken Dr. C. Griffoni für die 2009/2010 zusammengefasste Daten über die Verwendung von menschlichen Auges Globen.

1. In-situ-Exzision der Hornhaut von Ocular Globes <ol><li> Schalten Sie die laminare Luftströmung Schrank ca. 15 Minuten vor dem Gebrauch. Reinigen Sie die Sterilbank mit 70% Isopropylalkohol. Setzen Sie auf persönliche Schutzkleidung wie OP-Mütze und Maske. Schrubben Sie Hände und Unterarme und trocknen Sie mit einem sterilen Tuch. Trage sterile Handschuhe und Kittel oder Hülsen unter aseptischen Bedingungen. </li><li> Richten Sie den sterilen Bereich, indem ein steriles Instrument Tablett aseptisch. S...

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	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Sowohl richtige Exzision und Haltbarmachung von Hornhaut und Netzhaut-Gewebe sind kritisch, da kleinere Mängel wie endotheliale Schäden oder hohe Anzahl von Descemet-Falten können Transplantatversagen der Hornhaut während Temperaturänderungen oder falscher Handhabung kann die Integrität der retinalen Gewebe Kompromittierung führen. Das Ziel dieser Arbeit ist es zu zeigen, wie Hornhaut und Netzhaut-Gewebe optimal isoliert werden kann, ohne Schäden oder Veränderungen zu induzieren, die ihre Verwendung zur Transpl...

Materialien für die Exzision der Hornhaut und Netzhaut. <table border="1"><tbody><tr><td> Produktbeschreibung </td><td> Größe </td><td> Unternehmen / Institut </td></tr><tr><td> Bewachter Einweg-Skalpell </td><td> Blade-Größe 15 </td><td> Swann-Morton </td></tr><tr><td> Sterile Bandagen </td><td> 5 cm x 5 cm, 8 geschichteten, 5 Stück </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Sterile medizinische Einwegprodukte Handtuch </td><td> 35 x 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Einer sterilen Schere </td><td> Klingen 24 mm / Gesamtlänge. 95 mm gebogen, stumpf </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Einer sterilen Pinzette </td><td> Edelstahl -100 mm 11 x 2 von 0,70 mm Zähne ausgeschlossen </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Hornhaut-Kralle - medizinische Einwegprodukte </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Die Vorbereitungen </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml PBS [10x] in 900 ml D / W (destilliertes Wasser) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-Thiosulfat </td><td> 1 g Na-Thiosulfat in 1 Liter PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 g I-PVP in 1-Liter D / W </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Die Tabelle beschreibt die Materialien für die Exzision der Hornhaut und der Netzhaut und die Firma erhielt sie aus verwendet werden. Materialien für Speichermedium (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Komponenten </td><td> Lieferant </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Konzentration </td><td> Menge </td></tr><tr><td> MEM(1X) Flüssigkeit </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-Glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiotikum / Antimykotikum </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Serum von neugeborenen Kälbern </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tabelle 3. Materialien für Speichermedium. Herstellung von Speichermedium Alle Zutaten mit den spezifischen Konzentrationen wie oben in ein Glas gegeben und gut mischen. Filtern siemit Porengröße von 0,2 Mikron-Filter (Millipore, Mailand, Italien) mit Hilfe einer Schlauchpumpe. Bewahren Sie das Medium in den Flaschen bei RT. Materialien für die Transportmittel (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Komponenten </td><td> Lieferant </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Konzentration </td><td> Menge </td></tr><tr><td> MEM (1X) Flüssigkeit </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-Glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> Serum von neugeborenen Kälbern </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / l) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tabelle 4. Material für Transportmedium. Vorbereitung der Transportmedium Fügen Sie Dextran 6% in ~ 1,5 Liter MEM und lassen es über Nacht. Fügen Sie die restlichen Zutaten in den Medien und Filter mit 0,2-Mikrometer-Filter (Millipore, Mailand, Italien) mit einer Vakuumpumpe. Bewahren Sie das Medium in den Flaschen bei RT.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enukleation ist der Prozess, das Abrufen des Augapfels aus einer Leichenspender Verlassen der Rest der Welt ungestört. Exzision bezieht sich auf den Abruf von Augengewebe, insbesondere Hornhaut, indem er getrennt von dem Augapfel. Ausweiden ist der Prozess des Entfernens der inneren Organe hier genannten Netzhaut. Der Augapfel besteht aus der Hornhaut, der Lederhaut, den Glaskörper, die Linse, der Iris, der Netzhaut, der Aderhaut, Muskeln etc. (Suppl. Abbildung 1). Wenn ein Patient aus Hornhautschäden leiden, muss die Hornhaut entfernt werden und ein gesundes muss man durch keratoplastischer Operationen transplantiert werden. Genetische Störungen oder Defekte in der Netzhaut-Funktion kann beeinträchtigt Vision. Menschliche Auge Globen kann für verschiedene chirurgische Verfahren wie Augen-Banking, Transplantation menschlicher Hornhaut oder Lederhaut und Forschung auf Augengeweben verwendet werden. Allerdings gibt es wenig Informationen über die menschliche Hornhaut und Netzhaut-Exzision, wahrscheinlich aufgrund der limited Zugang zu menschlichen Geweben. Die meisten Studien beschreiben ähnliche Verfahren an Tiermodellen durchgeführt. Forscher verlassen sich auf die Verfügbarkeit von gut präpariert und gut erhaltenen Augengeweben um das Wissen über menschliche Auge Entwicklung, Homöostase und Funktion zu verlängern. Da wir hohe Menge an okularen Globen, aus denen ca. 40% erhalten (Tabelle 1) von ihnen zu Forschungszwecken verwendet werden, sind wir in der Lage, sehr große Menge von Experimenten an diesen Geweben führen, definieren Techniken, um Verbrauchsteuern und bewahren Sie sie regelmäßig. Die Hornhaut ist eine avaskuläre Gewebe, das die Übertragung von Licht auf die Netzhaut ermöglicht und zu diesem Zweck sollte immer ein gutes Maß an Transparenz. Innerhalb der Hornhaut, hilft der Limbus Region, die ein Reservoir der Stammzellen ist, den Wiederaufbau von Epithelzellen und beschränkt die Wucherung der Bindehaut Aufrechterhaltung Hornhaut Transparenz und Klarheit. Die Größe und th<html> ickness der Hornhaut sind entscheidend für die klare Vision, wie Änderungen in einer von ihnen ablenken, unklare Vision führen könnte. Die Hornhaut besteht aus 5 Schichten: a) Epithel, b) Bowman-Schicht, c) Stroma, d) Descemetschen Membran und e) Endothel. Alle Schichten sollten einwandfrei funktionieren, um sicherzustellen, klare Vision 4,5,6. Die Aderhaut ist die Zwischenschicht zwischen der Tunika Sklera und der Retina, auf der Innenseite durch die Bruch-Membran begrenzt und ist verantwortlich für den Blutfluss in die Augen. Die Choroidea hilft auch, um die Temperatur und liefert Nahrung zu den äußeren Schichten der Netzhaut 5,6 zu regeln. Die Retina ist eine Schicht von Nervengewebe, das die Rückseite des Augapfels (Suppl. 1) umfasst und besteht aus zwei Teilen: einem lichtempfindlichen Teil und einen nicht-empfänglichen Teil. Die Netzhaut hilft, das Licht von der Hornhaut und der Linse zu erhalten und wandelt sie in der chemischen Energie schließlich an das Gehirn mit Hilfe des Sehnervs 5,6 übertragen. ove_content &quot;&gt; Das Ziel dieses Papiers ist es, ein Protokoll für die Präparation des Hornhaut-und Netzhaut-Gewebe aus menschlichen Auges Globen stellen. Vermeidung von Kreuzkontaminationen in das umgebende Gewebe und die Erhaltung RNA-Integrität ist von fundamentaler Bedeutung als solche Gewebe zu Forschungszwecken ausgerichtet sind unverzichtbar an (i) die Charakterisierung der Transkriptom der Augengewebe, (ii) Isolierung von Stammzellen für die regenerative Medizin-Projekte, und (iii) Bewertung der histologischen Unterschiede zwischen den Geweben von normal / den betroffenen Fächern. In diesem Beitrag beschreiben wir die Technik, die wir derzeit zur Entfernung Die Hornhaut, die Aderhaut und Netzhaut-Gewebe aus einem Augapfel. Hier bieten wir Ihnen ein detailliertes Protokoll für das Sezieren des menschlichen Augapfels und der Entfernung der Hornhaut und Netzhaut-Gewebe. Das dazugehörige Video wird den Forschern helfen, eine geeignete Technik für den Abruf lernen von kostbaren menschlichen Geweben, die schwer zu finden sind regelmäßig.

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A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Das Papier beschreibt ein vereinfachtes Verfahren zur Hornhaut-und Verbrauchssteuern zu retinalen Gewebe aus dem Augapfel von menschlichen Leichen Spendern auszuhöhlen. Die hier beschriebene Technik wird verbrauchsteuerpflichtige guter Qualität zu Geweben zur Transplantation oder chirurgische Zwecke oder Forschungszwecke ohne Beschädigung anderer Gewebe des Augapfels verwendet werden zu helfen.

Ein vereinfachtes Verfahren für<em&gt; In-situ</em&gt; Exzision der Hornhaut und der Netzhaut Ausweiden von Gewebe aus menschlichen Augapfel

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

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Technik zu pilzförmigen (Taste) Papillen aus menschlichen Zunge sammeln

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

Forschung

Medizin

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Eine vereinfachte Methode zur Herstellung eines ischämischen Wundmodell

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multi-Elektroden-Array Recordings of Human Epileptische Postoperative Rindengewebe

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolierung und Exzision Murine Aorta; Eine vielseitige Technik in das Studium der Herz-Kreislauf-Krankheit

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

Gründung des Menschen Epithelial Enteroids und Colonoids von Whole Gewebe und Biopsie

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Arbeiten mit menschlichen Geweben für Translationale Krebsforschung

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

3D Ultraschall-Bildgebung: schnelle und kostengünstige Morphometrie des Muskel-Skelett-Gewebe

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Epitheliale Korneaabnutzung mit okulärer Burr als Modell für die Hornhaut Wundheilung

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Wirkung künstlicher Tränenformulierungen auf die Metabolische Aktivität menschlicher Hornhautepithelzellen nach Exposition gegenüber Dericcation

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Charakterisierung einer neuartigen humanen organotypischen Netzhautkulturtechnik

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...