Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

עבודה זו נתמכה בחלקה באמצעות מענקים של ונטו Regione (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 ו Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). המחברים מודים לד&quot;ר ג Griffoni עבור הנתונים 2009/2010 סיכום על השימוש גלובס עיניים אנושיות.

1. כריתת באתרו של הקרנית מן גלובס העינים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את ארון האוויר זרימה למינרית כ 15 דקות לפני השימוש. לנקות את מכסה המנוע באמצעות זרימה למינרית איזופרופיל אלכוהול 70%. ללבוש ביגוד מגן אישי, כגון שווי המסכה כירורגית. ...

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

שניהם, כריתה נכונה ושמירה נכונה של רקמות הקרנית הרשתית הם קריטיים כמו פגמים קלים כגון נזק האנדותל או מספר גבוה של קפלים של descemet יכול להוביל לכישלון השתל של הקרנית ואילו שינויים בטמפרטורה או טיפולו הכושל יכול להתפשר על שלמות רקמות הרשתית. מטרת מאמר זה היא להראות כיצד ?...

חומרים כריתה של הקרנית ואת הרשתית. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> תאור המוצר </td><td> מידות </td><td> החברה / המוסד </td></tr><tr><td> שמרו הפנויה אזמל </td><td> Blade בגודל 15 </td><td> סוואן, מורטון </td></tr><tr><td> תחבושות סטריליות </td><td> 5 ס&quot;מ על 5 ס&quot;מ, 8 שכבות, 5 יח&#39; </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> מגבת סטרילית רפואי חד פעמי </td><td> 35 X 50 ס&quot;מ </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> עקרות מספריים </td><td> להבים 24 מ&quot;מ / אורכו הכולל. 95 מ&quot;מ מעוגלת, בוטה </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> סטרילית מלקחיים </td><td> נירוסטה -100 מ&quot;מ 11 X 2 הנשלט על ידי השיניים 0.70 מ&quot;מ </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> טופר הקרנית - מכשיר רפואי חד פעמי </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> ההכנות </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 מ&quot;ל PBS [10x] ב 900 (מים מזוקקים) מ&quot;ל ד / ל </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-thiosulphate </td><td> 1 גרם Na-thiosulphate ב 1 ליטר של PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 גרם I-PvP ב 1 ליטר ד / ל </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> טבלה 2. הטבלה מתארת ​​את החומרים המשמשים כריתה של הקרנית ואת הרשתית לבין החברה הם מתקבלים. חומרים עבור אמצעי אחסון (2000 מ&quot;ל). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> רכיבי </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td><td> ריכוז </td><td> כמות </td></tr><tr><td> MEM(1X) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> נתרן פירובט </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> אנטיביוטיקה / antimycotic </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 מ&quot;ל / ליטר </td><td> 20 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סובך של יילוד בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 40 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table> לוח 3. חומרים בינוני האחסון. הכנת אמצעי אחסון להוסיף את כל החומרים באמצעות ריכוזים ספציפיים שניתנו לעיל בצנצנת ומערבבים היטב. לסנן אותםבאמצעות גודל הנקבוביות של 0.2 מיקרון המסנן (Millipore, מילאנו, איטליה) עם עזרה של המשאבה peristaltic. לשמר את המדיום בבקבוקים ב RT. חומרים בינוני הובלה (2000 מ&quot;ל). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> רכיבי </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td><td> ריכוז </td><td> כמות </td></tr><tr><td> MEM (1X) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> נתרן פירובט </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> סובך של יילוד בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 מ&quot;ל / ל &#39;) </tד&gt; <td> 40 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 גרם / ליטר) </td><td> 120 גר &#39;/ ל </td></tr></tbody></table> לוח 4. חומר בינוני התחבורה. הכנת אמצעי התחבורה הוסף dextran 6% ב 1.5 ליטר ~ של MEM ולהשאיר אותה בן לילה. מוסיפים את יתר החומרים בכלי התקשורת ולסנן באמצעות 0.2 מיקרון המסנן (Millipore, מילאנו, איטליה) באמצעות משאבת ואקום. לשמר את המדיום בבקבוקים ב RT.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

העיתון מתאר שיטה פשוטה כדי הקרנית בלו וכדי להוציא את העקר רקמות רשתית העין מן העולם של תורמים גווייה אדם. הטכניקה המתוארת כאן יעזור ובלו רקמות באיכות טובה כדי לשמש להשתלה, למטרות מחקר או ניתוח מבלי לפגוע ברקמות אחרות של הגלובוס העין.

טכניקה פשוטה עבור<em&gt; באתרו</em&gt; כריתת של הקרנית ואת הוצאת הקרביים של רקמת רשתית מ גלוב Ocular האדם

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

שיטת איסוף Fungiform (טעם) ואדומות מן הלשון האדם

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

טכניקה פשוטה לייצור דגם פצע איסכמי

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

הקלטות מערך רב-אלקטרודה של רקמה האנושית אפילפטיים לאחר הניתוח בקליפת המוח

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

הקמתו של ארגון Human אפיתל Enteroids וColonoids מרקמות שלמות וביופסיה

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

עבודה עם רקמות אנושיות לחקר סרטן Translational

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

אולטראסאונד תלת-ממד הדמיה: Morphometry מהירה וחסכונית של רקמת שריר-שלד

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

ההשפעה של ניסוחים דמעה מלאכותית על הפעילות המטבולית של תאי אפיתל הקרנית האנושית לאחר חשיפה להתייבשות

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

אפיון טכניקה חדשנית של תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...