Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

Questo lavoro è stato finanziato in parte attraverso borse di studio della Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 e la Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Gli autori ringraziano il dottor C. Griffoni per i dati 2009/2010 riassunto sull&#39;uso dei globi oculari umane.

1. Excisione situ della cornea da globi oculari <ol><li> Accendere la cappa a flusso laminare d&#39;aria circa 15 minuti prima dell&#39;uso. Pulire la cappa a flusso laminare con il 70% di alcool isopropilico. Indossare indumenti protettivi, come cappello e maschera chirurgica. Scrub mani e gli avambracci e asciugare con un telo sterile. Indossare guanti sterili e camice o maniche con tecnica asettica. </li><li> Impostare il campo sterile inserendo un vassoio sterile strumento asettico. Verificare che gli str...

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	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Entrambi, l&#39;escissione e la corretta conservazione dei tessuti corneali e retiniche sono fondamentali come difetti minori come il danno endoteliale o elevato numero di pieghe Descemet può portare al fallimento del trapianto di cornea, mentre alterazioni di temperatura o di maltrattamento può compromettere l&#39;integrità dei tessuti retinici. Lo scopo di questo lavoro è quello di mostrare come i tessuti corneali e retiniche possono essere isolate in modo ottimale, senza indurre danni o alterazioni che possono co...

Materiali per l&#39;asportazione della cornea e della retina. <table border="1"><tbody><tr><td> Descrizione del prodotto </td><td> Dimensioni </td><td> Azienda / Istituto </td></tr><tr><td> Custodito bisturi monouso </td><td> Lama taglia 15 </td><td> Swann-Morton </td></tr><tr><td> Bende sterili </td><td> 5 cm x 5 cm, 8 strati, 5 pezzi </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Sterile asciugamano usa e getta medica </td><td> 35 X 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Forbici sterili </td><td> Lame 24 mm / lunghezza complessiva. 95 mm curvato, smussato </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Pinza sterile </td><td> In acciaio inox -100 mm 11 X 2 governato da 0,70 mm denti </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Corneale claw - dispositivi medici monouso </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Preparativi </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml di PBS [10x] in 900 ml d / w (acqua distillata) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-tiosolfato </td><td> 1 gm Na-tiosolfato in 1 litro di PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 gm I-PVP in 1 litro d / w </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tabella 2. La tabella descrive i materiali utilizzati per escissione della cornea e della retina e la società sono ricevute dal. Materiali per supporto di memorizzazione (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Componenti </td><td> Fornitore </td><td> Numero di catalogo </td><td> Concentrazione </td><td> Quantità </td></tr><tr><td> MEM(1X) di liquido </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Sodio piruvato </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiotico / antimicotico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Newborn di siero di vitello </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tabella 3. Materiali per supporto di memorizzazione. Preparazione del supporto di memorizzazione Aggiungere tutti gli ingredienti utilizzando le concentrazioni di specifici sopra riportati in un barattolo e mescolare bene. Filtra lorocon dimensione dei pori di 0,2 micron (Millipore, Milano, Italia) con l&#39;aiuto di una pompa peristaltica. Conservare il terreno nelle bottiglie a temperatura ambiente. Materiali per mezzo di trasporto (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Componenti </td><td> Fornitore </td><td> Numero di catalogo </td><td> Concentrazione </td><td> Quantità </td></tr><tr><td> MEM (1X) di liquido </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Sodio piruvato </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> Newborn di siero di vitello </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Destrano T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / litro) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tabella 4. Materiale per mezzo di trasporto. Preparazione del mezzo di trasporto Aggiungi Destrano 6% in ~ 1,5 litri di MEM e lasciare tutta la notte. Aggiungere il resto degli ingredienti nei media e filtrare su 0,2 micron (Millipore, Milano, Italia) utilizzando una pompa a vuoto. Conservare il terreno nelle bottiglie a temperatura ambiente.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleazione è il processo di recupero del globo oculare da un donatore cadavere lasciando il resto del globo indisturbata. Escissione si riferisce al recupero dei tessuti oculari, in particolare cornea, tagliandolo separato dal globo oculare. L&#39;eviscerazione è il processo di rimozione degli organi interni di cui qui retina. Il globo oculare consiste nella cornea, sclera, il corpo vitreo, la lente, l&#39;iride, la retina, coroide, etc muscoli (Suppl. Figura 1). Quando un paziente è affetto da danno corneale, la cornea deve essere rimosso e un sano deve essere trapiantato da interventi cheratoplastica. Malattie genetiche o difetti della funzione retinica, può compromettere la visione. Globi oculari umani possono essere utilizzate per varie procedure chirurgiche come banche degli occhi, il trapianto di cornea o la sclera umana e ricerca su tessuti oculari. Tuttavia, vi sono poche informazioni disponibili sulla cornea umana escissione e della retina, probabilmente a causa della Limited accessibilità ai tessuti umani. La maggior parte degli studi che descrivono procedure simili vengono eseguiti su modelli animali. Ricercatori contare sulla disponibilità di tessuti oculari adeguatamente sezionati e ben conservata al fine di estendere la conoscenza sui diritti umani lo sviluppo degli occhi, l&#39;omeostasi e la funzione. Come riceviamo elevata quantità di globi oculari di cui circa il 40% (Tabella 1) di essi sono utilizzati per scopi di ricerca, siamo in grado di eseguire la grande quantità di esperimenti su questi tessuti, la definizione di tecniche per accise e conservare regolarmente. La cornea è un tessuto avascolare che consente la trasmissione della luce sulla retina e per questo scopo deve sempre mantenere un buon grado di trasparenza. All&#39;interno della cornea, la regione limbus, che è un serbatoio delle cellule staminali, aiuta la ricostruzione delle cellule epiteliali e limita la crescita eccessiva della congiuntiva mantenere trasparenza corneale e chiarezza. La dimensione e th<html> ickness della cornea sono essenziali per la visione chiara, come cambiamenti di una di esse potrebbe portare a distrarsi, la visione chiara. La cornea è composto da 5 strati: a) epitelio, b) strato di Bowman, c) stroma, d), della membrana di Descemet e e) endotelio. Tutti i livelli dovrebbe funzionare correttamente per garantire una visione chiara 4,5,6. La coroide è la tunica intermedia tra la sclera e retina, delimitata all&#39;interno dalla membrana del Bruch ed è responsabile del flusso di sangue nell&#39;occhio. Il coroide aiuta anche a regolare la temperatura e fornisce nutrimento per gli strati esterni della retina 5,6. La retina è uno strato di tessuto nervoso che copre la parte posteriore del globo oculare (Suppl. figura 1) e consiste di due parti: una parte fotosensibile e un non-ricettivo dell&#39;articolo. La retina aiuta a ricevere la luce dalla cornea e del cristallino e lo converte in energia chimica eventualmente trasmessa al cervello con l&#39;aiuto del nervo ottico 5,6. ove_content &quot;&gt; Lo scopo di questo lavoro è quello di fornire un protocollo per la dissezione dei tessuti corneali e retiniche da globi oculari umani. Evitare la contaminazione incrociata con i tessuti adiacenti e preservando l&#39;integrità dell&#39;RNA è di fondamentale importanza in quanto tali tessuti sono indispensabili per scopi di ricerca finalizzati a (i) che caratterizza il trascrittoma dei tessuti oculari, (ii) isolare le cellule staminali per i progetti di medicina rigenerativa, e (iii) valutare le differenze istologiche tra i tessuti normali da / soggetti interessati. In questo articolo descriviamo la tecnica attualmente si sta adoperando per rimuovere la cornea, la coroide e dei tessuti retinici da un globo oculare. Qui forniamo un protocollo dettagliato per la dissezione del globo oculare umana e l&#39;asportazione dei tessuti corneali e retiniche. Il video di accompagnamento aiuterà i ricercatori a imparare una tecnica appropriata per il recupero di preziosi tessuti umani, che sono difficili da trovare regolarmente.

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A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Il documento descrive una tecnica semplificata per corneale accise e di sviscerare i tessuti della retina dal globo oculare di donatori cadaveri umani. La tecnica qui descritta aiuterà a accise tessuti di buona qualità da usare per il trapianto, a fini chirurgici o di ricerca senza danneggiare altri tessuti del globo oculare.

Una tecnica semplificata per<em&gt; In situ</emEscissione&gt; della cornea e l&#39;eviscerazione del tessuto retinico dal globo oculare umano

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

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Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

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Medicina

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