Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

Este trabalho foi financiado em parte através de doações da Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 e Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Os autores agradecem o Dr. C. Griffoni para os dados de 2009/2010 de síntese sobre o uso de globos oculares humanos.

1. Na excisão in situ da córnea de globos oculares <ol><li> Ligue o câmara de fluxo laminar de ar de aproximadamente 15 minutos antes da utilização. Limpar a câmara de fluxo laminar usando 70% de álcool isopropílico. Coloque roupas de proteção pessoal, como touca cirúrgica e máscara. Esfregue as mãos e os antebraços e secar com uma toalha estéril. Usar luvas estéreis e vestido de mangas ou usando uma técnica asséptica. </li><li> Configure o campo estéril, colocando uma bandeja inst...

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Tanto a excisão, correta e boa conservação dos tecidos da córnea e da retina são críticos como defeitos menores, tais como lesão endotelial ou elevado número de dobras de Descemet pode levar à falência do enxerto da córnea enquanto que alterações de temperatura ou manuseio incorreto pode comprometer a integridade dos tecidos da retina. O objetivo deste trabalho é mostrar como os tecidos da córnea e da retina pode ser isolado da melhor maneira, sem induzir danos ou alterações que possam comprometer sua u...

Materiais para excisão da córnea e retina. <table border="1"><tbody><tr><td> Descrição do produto </td><td> Dimensões </td><td> Empresa / Instituto </td></tr><tr><td> Guardado descartável bisturi </td><td> Tamanho de lâmina 15 </td><td> Swann-Morton </td></tr><tr><td> Ataduras estéreis </td><td> 5 cm x 5 cm, 8 camadas, 5 unid </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Toalha descartável estéril médica </td><td> 35 X 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Tesoura estéril </td><td> Blades 24 mm / comprimento total. 95 mm curvo, sem corte </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Pinças esterilizadas </td><td> Aço inoxidável de 11 mm -100 X 2 governado por 0,70 mm de dentes </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Garra da córnea - dispositivo médico descartável </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Preparativos </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml de PBS [10x] em 900 ml d / w (água destilada) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-tiossulfato </td><td> 1 gm de Na-tiossulfato em 1 litro de PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 gm I-PVP em 1 litro d / w </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tabela 2. A tabela descreve os materiais utilizados para a excisão de córnea e da retina e da empresa que são recebidas a partir de. Materiais para meio de armazenamento (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Componentes </td><td> Fornecedor </td><td> Número de catálogo </td><td> Concentração </td><td> Quantidade </td></tr><tr><td> MEM(1X) líquido </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Piruvato de sódio </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiótico / antimicótico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> De soro de vitelo recém-nascido </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tabela 3. Materiais para meio de armazenamento. Preparação de meio de armazenamento Adicionar todos os ingredientes, usando as concentrações específicas como dadas acima em um frasco e misturar bem. Filtrá-losusando tamanho de poro de 0,2 micron de filtro (Millipore, Milão, Itália), com a ajuda de uma bomba peristáltica. Preservar o meio nas garrafas à RT. Materiais para meio de transporte (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Componentes </td><td> Fornecedor </td><td> Número de catálogo </td><td> Concentração </td><td> Quantidade </td></tr><tr><td> MEM líquido (1X) </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Piruvato de sódio </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> De soro de vitelo recém-nascido </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dextran t500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / litro) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tabela 4. Material para o meio de transporte. Preparação de meio de transporte Adicionar dextrano 6% em ~ 1,5 litros de MEM e deixe durante a noite. Adicionar o resto dos ingredientes nos meios de comunicação e filtrar através de filtro de 0,2 micron (Millipore, Milão, Itália), utilizando uma bomba de vácuo. Preservar o meio nas garrafas à RT.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleação é o processo de recuperação do globo ocular de um dador de cadáver deixando o resto do globo não perturbada. Excisão refere-se à recuperação de tecidos oculares, especialmente córnea, cortando-a separada a partir do globo ocular. Evisceração é o processo de remoção dos órgãos internos referidos aqui como retina. O globo ocular consiste na córnea, a esclerótica, o corpo vítreo, a lente, a íris, a retina, a coróide, etc músculos (Suppl. Figura 1). Quando um paciente está a sofrer de lesões da córnea, a córnea precisa de ser removido e um saudável deve ser transplantado por cirurgias keratoplastic. Doenças genéticas ou defeitos na função da retina pode comprometer a visão. Globos oculares humanos pode ser utilizado para vários procedimentos cirúrgicos, tais como bancos olho, o transplante da córnea humana ou esclerótica e investigação sobre os tecidos oculares. No entanto, há pouca informação disponível sobre a excisão da córnea e da retina humana, provavelmente devido ao lacessibilidade imited para os tecidos humanos. A maioria dos estudos que descrevem procedimentos semelhantes são realizados em modelos animais. Os cientistas da pesquisa depende da disponibilidade de tecidos oculares devidamente dissecadas e bem conservada, a fim de ampliar o conhecimento sobre a homeostase humana olho, desenvolvimento e função. Como recebemos grande quantidade de globos oculares, dos quais aproximadamente 40% (Tabela 1) deles são usados ​​para fins de pesquisa, somos capazes de realizar grande quantidade de experiências sobre esses tecidos, definindo técnicas para consumo e preservá-los regularmente. A córnea é um tecido avascular, que permite a transmissão de luz na retina e para este propósito deve sempre manter um bom grau de transparência. Dentro da córnea, a região limbo, que é um reservatório das células estaminais, ajuda a reconstrução de células epiteliais e restringe o crescimento excessivo da conjuntiva manter a transparência da córnea e de clareza. O tamanho e th<html> ickness da córnea são críticos para a visão clara, como alterações em qualquer um deles pode levar a distraído visão, claro. A córnea compreende de 5 camadas, a) epitélio, b) camada de Bowman, c) estroma, d) membrana de Descemet ee) endotélio. Todas as camadas devem funcionar corretamente para garantir uma visão clara 4,5,6. A coróide é a túnica intermédia entre a esclerótica e da retina, delimitada no interior pela membrana de Bruch e é responsável para o fluxo de sangue no olho. A coróide também ajuda a regular a alimentação de temperatura e material para as camadas exteriores da retina 5,6. A retina é uma camada de tecido nervoso, que cobre a parte de trás do globo ocular (Suppl. Figura 1) e consiste de duas partes: uma parte fotorreceptor e uma parte não receptivo. A retina ajuda para receber a luz a partir da córnea e do cristalino e converte-os em a energia química, eventualmente, transmitido para o cérebro, com a ajuda do nervo óptico 5,6. ove_content &quot;&gt; O objetivo deste trabalho é fornecer um protocolo para a dissecção dos tecidos da córnea e da retina de globos oculares humanos. Evitar a contaminação cruzada com tecidos adjacentes e preservando a integridade do RNA é de fundamental importância como esses tecidos são indispensáveis ​​para fins de pesquisa voltadas em (i) caracterizar o transcriptoma dos tecidos oculares, (ii) o isolamento de células-tronco para projetos de medicina regenerativa, e (iii) avaliar diferenças histológicas entre os tecidos normais de / afetados assuntos. Neste artigo descrevemos a técnica que usamos atualmente para remover a córnea, a coróide e tecidos da retina de um globo ocular. Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado para a dissecção do globo ocular humano ea excisão dos tecidos da córnea e da retina. O vídeo que o acompanha vai ajudar os pesquisadores a aprender uma técnica adequada para a recuperação de preciosos tecidos humanos que são difíceis de encontrar regularmente.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

O artigo descreve uma técnica simplificada de córnea especiais de consumo e eviscerar os tecidos da retina do globo ocular de humanos doadores cadavéricos. A técnica descrita aqui vai ajudar a impostos especiais de consumo tecidos de boa qualidade para ser utilizados para transplantação, cirúrgicos ou de pesquisa, sem danificar outros tecidos do globo ocular.

Uma técnica simplificada para<em&gt; In situ</em&gt; Excisão de Córnea e evisceração de tecido da retina do globo ocular humano

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Técnica para coletar fungiformes (Taste) papilas da língua humana

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

Medicina

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Uma técnica simplificada para a produção de um modelo de ferida isquêmica

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multieletrodos Recordings Matriz de Human epiléptica pós-operatória Cortical Tissue

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolamento e excisão de Murino Aorta; A técnica versátil no Estudo de Doenças Cardiovasculares

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

Estabelecimento de epiteliais humanas Enteroids e Colonoids de tecido inteiro e biópsia

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Trabalhando com tecidos humanos para Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

Imagens de ultra-som 3D: rápida e econômica de morfometria do tecido músculo-esquelético

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Cicatrização de feridas abrasão epitelial da córnea com Burr Ocular como um modelo para córnea

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Efeito das formulações de lágrimas artificiais na atividade metabólica das células epiteliais da córnea humana após exposição à dessecação

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Caracterização de uma nova técnica de cultura de retina organotipípica humana

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...