Name: a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

Detta arbete stöddes dels genom bidrag som Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 och Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Författarna tackar Dr C. Griffoni för 2009/2010 sammanfattande uppgifter om användningen av mänskliga okulära glober.

1. In situ Excision av hornhinnan från Ocular Jordglober <ol><li> Slå på det laminära luftflödet skåp ca 15 minuter före användning. Rengöra huven laminärt flöde med användning av 70% isopropylalkohol. Sätt på personlig skyddsutrustning som kirurgisk mössa och mask. Skrubba händer och underarmar och torka med användning av en steril duk. Använd sterila handskar och klänning eller hylsor med aseptisk teknik. </li><li> Ställ in det sterila området genom att placera ett sterilt instrument fa...

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Både rätt excision och korrekt bevarande av hornhinnan och retinal vävnader är kritiska som mindre defekter som endotelial skada eller stort antal Descemets veck kan leda till transplantat misslyckande av hornhinnan, medan temperatur förändringar eller misskötsel kan äventyra integriteten i retinala vävnader. Syftet med denna uppsats är att visa hur hornhinnan och retinal vävnader kan isoleras optimalt, utan att inducera skador eller förändringar som kan äventyra deras användning för transplantation elle...

Material för excision av hornhinnan och näthinnan. <table border="1"><tbody><tr><td> Produktbeskrivning </td><td> Dimensioner </td><td> Företag / institut </td></tr><tr><td> Bevakad engångstyp skalpell </td><td> Klingstorlek 15 </td><td> Swann Morton- </td></tr><tr><td> Sterila förband </td><td> 5 cm X 5 cm, 8 skiktade, 5 st </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Steril disponibel medicinska handduk </td><td> 35 X 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Steril sax </td><td> Blades 24 mm / längd överallt. 95 mm böjd, trubbig </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Steril pincett </td><td> Rostfritt stål -100 mm 11 X 2 styrs av 0,70 mm Tänder </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Hornhinnan klo - Disponibel medicintekniska </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Beredningar </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 ml PBS [10x] i 900 ml di / vikt (destillerat vatten) </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-tiosulfat </td><td> 1 g Na-tiosulfat i 1 liter av PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 g l-PVP i 1 liter d / vikt </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tabell 2. Tabellen beskriver material som används för excision av hornhinnan och näthinnan och företaget de tas emot från. Material för lagringsmediet (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Komponenter </td><td> Leverantör </td><td> Katalognummer </td><td> Koncentration </td><td> Kvantitet </td></tr><tr><td> MEM(1X) vätska </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / I) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / I) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antibiotisk / antimykotisk </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20 ml </td><td> 10 ml / liter </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Serum från nyfödd kalv </td><td> Invitrogen </td><td> 26.010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tabell 3. Material för lagringsmedium. Framställning av lagringsmedium Tillsätt alla ingredienserna med användning av de specifika koncentrationerna som ges ovan i en burk och blanda väl. Filtrera bort demanvändning porstorlek av 0,2 mikron filter (Millipore, Milano, Italien) med hjälp av en peristaltisk pump. Bevara det medium i flaskorna vid RT. Material för transportmedium (2000 ml). <table border="1"><tbody><tr><td> Komponenter </td><td> Leverantör </td><td> Katalognummer </td><td> Koncentration </td><td> Kvantitet </td></tr><tr><td> MEM (1X) vätska </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 mM (10 ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Serum från nyfödd kalv </td><td> Invitrogen </td><td> 26.010-74 </td><td> 2% (20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 g / liter) </td><td> 120 g / liter </td></tr></tbody></table> Tabell 4. Material för transport medium. Beredning av transportmedium Lägg 6% dextran i ~ 1,5 liter MEM och lämna den över natten. Tillsätt resten av ingredienserna i mediet och filtrera genom 0,2 mikron filter (Millipore, Milano, Italien) med användning av en vakuumpump. Bevara det medium i flaskorna vid RT.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enucleation är processen att hämta den okulära världen från en avliden donator lämnar resten av världen ostörd. Excision avser hämtning av okulära vävnader, speciellt hornhinnan, genom att skära den separat från okulära världen. Urtagning är processen att ta bort de inre organ som avses här som näthinnan. Den okulära globen består av hornhinnan, senhinnan, glaskroppen, linsen, iris, retina, åderhinnan, muskler etc. (Suppl. figur 1). När en patient lider av skador på hornhinnan, behöver hornhinnan tas bort och en frisk måste transplanteras med keratoplastiska operationer. Genetiska sjukdomar eller defekter i näthinnans funktion kan kompromissa vision. Mänskliga okulära klot kan användas för olika kirurgiska procedurer såsom ögon bank, transplantation av mänsklig hornhinna eller sklera och forskning om okulära vävnader. Emellertid finns inte mycket information om humant korneal och retinal excision, antagligen på grund av limited tillgängligheten till mänskliga vävnader. De flesta av de studier som beskriver liknande förfaranden utförs på djurmodeller. Forskare är beroende av tillgången på rätt sätt dissekerade och väl bevarade okulära vävnader i syfte att utvidga kunskapen om mänskliga ögat utveckling homeostas och funktion. När vi får för höga halter av okulära glober av vilka cirka 40% (tabell 1) av dem används för forskningsändamål, kan vi utföra enormt experiment på dessa vävnader, definiera tekniker för att punktskatter och bevara dem regelbundet. Hornhinnan är en avaskulär vävnad som möjliggör överföring av ljus på näthinnan och för detta ändamål bör alltid ha en hög grad av öppenhet. Inom hornhinnan, hjälper limbus regionen, vilket är en reservoar av stamceller, återuppbyggnaden av epitelceller och begränsar överväxt av bindhinnan upprätthålla hornhinnans transparens och tydlighet. Storleken och th<html> ickness av hornhinnan är avgörande för tydlig vision, som förändringar i någon av dem kan leda till distraherad, oklart vision. Hornhinnan består av 5 skikt; en) epitelet, b) Bowmans skikt, c) stroma, d) Descemets membran och e) endotel. Alla lager ska fungera för att säkerställa tydlig vision 4,5,6. Åderhinnan är den mellanliggande tunika mellan sklera och retina, avgränsas det inre av Bruchs membran och är ansvarig för blodflöde i ögat. Åderhinnan hjälper också till att reglera temperaturen och levererar näring till de yttre skikten av näthinnan 5,6. Näthinnan är ett skikt av nervvävnad som täcker baksidan av den okulära globen (suppl. figur 1) och består av två delar: en ljusmottagande del och en icke-mottaglig delen. Näthinnan hjälper till att ta emot ljuset från hornhinnan och linsen och omvandlar den till kemisk energi så småningom överförs till hjärnan med hjälp av synnerven 5,6. ove_content &quot;&gt; Syftet med denna uppsats är att ge ett protokoll för dissektion av hornhinnan och retinal vävnader från mänskliga ögats glober. undvika korskontaminering med angränsande vävnader och bevara RNA integritet är av grundläggande betydelse som sådana vävnader är en förutsättning för forskning som syftar ändamål till (i) som kännetecknar den transkriptom av okulära vävnader, (ii) att isolera stamceller för regenerativ medicin projekt och (iii) utvärdering av histologiska skillnader mellan vävnader från normala / drabbade individer. I denna uppsats beskriver vi den teknik vi använder idag för att ta bort hornhinnan, åderhinnan och näthinnan vävnad från en okulär världen. Här erbjuder vi ett detaljerat protokoll för dissektion av det mänskliga ögats världen och excision av ögon-och retinal vävnader. Den medföljande video kommer att hjälpa forskare att lära en lämplig teknik för hämtning av värdefulla humana vävnader, vilka är svåra att hitta regelbundet.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Pappret beskriver en förenklad metod för att skära hornhinnan och rensning retinala vävnader från den okulära världen av mänskliga avlidna donatorer. Den teknik som beskrivs här kommer att hjälpa till punktskattebelagda god kvalitet vävnader som skall användas för transplantation, kirurgiska eller forskningsändamål utan att skada andra vävnader hos den okulära globen.

En förenklad Teknik för<em&gt; In situ</em&gt; Excision av hornhinna och urtagning av retinal Vävnad från Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Teknik för att samla Fungiform (smak) papiller från Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

En förenklad teknik för framställning av en ischemisk sårmodell

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multi-elektrod Array Inspelningar av Human Epileptic Postoperativ kortikalvävnad

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolering och Excision av murina Aorta; En Mångsidig Teknik studien av kardiovaskulär sjukdom

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

Etablering av Human Epithelial Enteroids och Colonoids från Whole Tissue och biopsi

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Arbeta med mänskliga vävnader för translationell cancerforskning

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

3D Ultrasound Imaging: Fast and Cost-effective Morphometry of Musculoskeletal Tissue

3D ultraljud: snabb och kostnadseffektiv morfometri muskuloskeletala vävnad

The developmental goal of 3D ultrasound imaging (3DUS) is to engineer a modality to perform 3D morphological ultrasound analysis of human muscles. 3DUS ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Hornhinnans epitel nötning med okulär Burr som modell för hornhinnan sårläkning

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Effekten av konstgjorda tårformuleringar på den metaboliska aktiviteten hos humana hornhinnans epitelceller efter exponering för uttorkning

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Karakterisering av en ny mänsklig organotypisk retinal kulturteknik

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...