Name: synthesis of an in vivo mri-detectable apoptosis probe
Uploaded: 2012-07-31T12:00:00
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National Institutes of Health, NHLBI (RD, PY, PS). American Heart Association (JL). Stanford University, VPUE Grant (JL).

Adaptado a partir de estudo prévio 1. 1. Conjugação de anexina V para SPIO <ol><li> Oxidar partículas SPIO (oceano Nanotech Inc., 5 mg / mL) durante 1 hora a 20 ° C no escuro em solução com 0,15 M de sódio periodato (NaIO4) (4:1 em peso: proporção em peso) 2. </li><li> Incubar a SPIO oxidado durante 12 horas com purificado ANX proteína (proporção 1:1, peso: peso) em borato de sódio 0,15 M (Na 2 B 4 O 7 10H <sub...

<ol>
	<li>Dash, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+MRI+probe+to+detect+treatment+of+cardiac+apoptosis+in+vivo.">A molecular MRI probe to detect treatment of cardiac apoptosis in vivo.</a> Magn. Reson. Med. , (2011).</li><li>Khym, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reaction+of+methylamine+with+periodate-oxidized+adenosine+5'-phosphate.">The reaction of methylamine with periodate-oxidized adenosine 5'-phosphate.</a> Biochemistry. 2, 344-350 (1963).</li><li>Liu, Y. Y., Yu, Y., Zhang, G. B., Tang, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterization,+and+controlled+release+of+novel+nanoparticles+based+on+MMA/beta-CD+copolymers.">Preparation, characterization, and controlled release of novel nanoparticles based on MMA/beta-CD copolymers.</a> Macromol. Biosci. 7, 1250-1257 (2007).</li><li>Seo, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FeCo/graphitic-shell+nanocrystals+as+advanced+magnetic-resonance-imaging+and+near-infrared+agents.">FeCo/graphitic-shell nanocrystals as advanced magnetic-resonance-imaging and near-infrared agents.</a> Nat. Mater. 5, 971-976 (2006).</li><li>Hsiao, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+nanoparticle+labeling+of+mesenchymal+stem+cells+without+transfection+agent:+cellular+behavior+and+capability+of+detection+with+clinical+1.5+T+magnetic+resonance+at+the+single+cell+level.">Magnetic nanoparticle labeling of mesenchymal stem cells without transfection agent: cellular behavior and capability of detection with clinical 1.5 T magnetic resonance at the single cell level.</a> Magn. Reson. Med. 58, 717-724 (2007).</li><li>Zhao, M., Beauregard, D. A., Loizou, L., Davletov, B., Brindle, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+detection+of+apoptosis+using+magnetic+resonance+imaging+and+a+targeted+contrast+agent.">Non-invasive detection of apoptosis using magnetic resonance imaging and a targeted contrast agent.</a> Nat. Med. 7, 1241-1244 (2001).</li><li>van Tilborg, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internalization+of+annexin+A5-functionalized+iron+oxide+particles+by+apoptotic+Jurkat+cells.">Internalization of annexin A5-functionalized iron oxide particles by apoptotic Jurkat cells.</a> Contrast Media Mol. Imaging. 4, 24-32 (2009).</li><li>Sosnovik, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+of+cardiomyocyte+apoptosis+with+a+novel+magneto-optical+nanoparticle.">Magnetic resonance imaging of cardiomyocyte apoptosis with a novel magneto-optical nanoparticle.</a> Magn. Reson. Med. 54, 718-724 (2005).</li><li>Sosnovik, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+MRI+detects+low+levels+of+cardiomyocyte+apoptosis+in+a+transgenic+model+of+chronic+heart+failure.">Molecular MRI detects low levels of cardiomyocyte apoptosis in a transgenic model of chronic heart failure.</a> Circ. Cardiovasc. Imaging. 2, 468-475 (2009).</li><li>Dumont, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+death+induced+by+myocardial+ischemia+and+reperfusion:+measurement+with+recombinant+human+annexin-V+in+a+mouse+model.">Cardiomyocyte death induced by myocardial ischemia and reperfusion: measurement with recombinant human annexin-V in a mouse model.</a> Circulation. 102, 1564-1568 (2000).</li><li>Blankenberg, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+detection+and+imaging+of+phosphatidylserine+expression+during+programmed+cell+death.">In vivo detection and imaging of phosphatidylserine expression during programmed cell death.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 6349-6354 (1998).</li><li>Schellenberger, E. A., Sosnovik, D., Weissleder, R., Josephson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magneto/optical+annexin+V,+a+multimodal+protein.">Magneto/optical annexin V, a multimodal protein.</a> Bioconjug. Chem. 15, 1062-1067 (2004).</li></ol>

O método de conjugação descrito para a ligação de SPIO a anexina V explora os grupos de cadeia lateral de amina de anexina e as porções carboxilo da nanopartícula SPIO. Através específicos de oxidação-redução passos, ligação covalente destes compostos pode ser alcançado, e as nanopartículas resultante funcionalizado pode ser isolado. Este método pode ser generalizado a outras proteínas e nanopartículas de interesse. Os passos mais críticos são as condições de oxidaç...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do Reagente </td><td> Companhia </td><td> Catálogo # </td></tr><tr><td> Óxido de ferro superparamagnético </td><td> Oceano Nanotech, Inc. </td><td> ICK-40-005 </td></tr><tr><td> A doxorrubicina </td><td> Sigma </td><td> D1515-10MG </td></tr><tr><td> SuperMag Separator </td><td> Oceano Nanotech, Inc. </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Zetasizer Nano máquina DLS </td><td> Malvern, Inc </td><td> N / A </td></tr></tbody></table>

synthesis of an in vivo mri-detectable apoptosis probe

Apoptose celular é uma característica proeminente de muitas doenças, e esta morte celular programada normalmente ocorre antes de manifestações clínicas da doença são evidentes. Um meio para detectar apoptose em suas primeiras etapas reversíveis e iria pagar um pré-clínica &quot;janela&quot; durante o qual as medidas preventivas ou terapêuticas podem ser tomadas para proteger o coração contra danos permanentes. Apresentamos aqui um método simples e robusto para conjugar humano anexina V (ANX), que avidamente se liga às células durante as primeiras, etapas reversíveis de apoptose, a superparamagnéticas óxido de ferro (SPIO) nanopartículas, que servem como um agente de contraste para IRM-detectável. O método de conjugação começa com uma oxidação das nanopartículas SPIO que oxida grupos carboxilo na casca de polissacárido de SPIO. Proteína purificada ANX é então adicionado na configuração de uma solução de borato de sódio para facilitar a interacção covalente de ANX com SPIO num tampão de redução. Um passo de redução final com borohydrid de sódioe é realizada para completar a redução, e, em seguida, a reacção é arrefecida. ANX não conjugada é removido da mistura por filtração microcentrifugadora. O tamanho e pureza do produto ANX-SPIO é verificada por dispersão dinâmica de luz (DLS). Este método não necessita de adição a, ou a modificação de, o polissacárido SPIO concha, em oposição a ligação cruzada de partículas de óxido de ferro métodos de conjugação ou biotina-rotulados nanopartículas. Como resultado, este método representa uma abordagem simples, robusto que pode ser alargado a conjugação de outras proteínas de interesse.

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Synthesis of an In vivo MRI-detectable Apoptosis Probe

A detecção precoce de apoptose pode identificar populações de risco de células em uma variedade de doenças. Aqui demonstramos um método para ligar uma proteína de apoptose de detecção precoce (anexina V) a uma nanopartícula de óxido de MRI-detectável de ferro (SPIO). Este método pode ser estendido para outras proteínas de interesse para gerar sondas de ressonância magnética-detectáveis ​​de imagens moleculares.

Síntese de um<em&gt; Em vivo</em&gt; Sonda Apoptosis MRI-detectável

Cellular apoptosis is a prominent feature of many diseases, and this programmed cell death typically occurs before clinical manifestations of disease are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Synthesis of an In vivo MRI-detectable Apoptosis Probe

Homemade Site Directed Mutagenesis of Whole Plasmids

Mutagênese do site caseiros Direção de Plasmids Whole

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. With this method the cloned ...

Biologia

Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells

Fotoconversão de proteínas purificadas fluorescentes e Dual-sonda Destacando Optical em células vivas

Photoconvertible fluorescent proteins (pc-FPs) are a class of fluorescent proteins with "optical highlighter" capability, meaning that the color of ...

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In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo de imagens e tratamentos terapêuticos em um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Mudanças Dinâmicas de monitoramento dos níveis de cálcio mitocondrial durante a apoptose através de um sensor de cálcio geneticamente codificado

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Ativação da apoptose por microinjeção citoplasmática de citocromo C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

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O tomate / GFP-FLP / FRT Method for Imaging ao vivo de Mosaico Adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; As células fotorreceptoras

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Análise de apoptose em embriões Zebrafish por Whole-mount imunofluorescência para detectar Caspase 3 ativado

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...

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Uma In vivo A reticulação Abordagem para isolar Complexos de proteínas a partir de Drosophila Os embriões

Many cellular processes are controlled by multisubunit protein complexes. Frequently these complexes form transiently and require native environment to ...

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Uma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sistema Cultura para estudar o desenvolvimento da tireóide

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Estratégias para Rastreamento Anastasis, uma célula de sobrevivência Fenômeno que reverte apoptose

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important ...