Name: overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge
Uploaded: 2012-04-09T13:00:00
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Apoyado en parte por subvenciones de los Institutos Nacionales de Salud (R01 NS37253 y NS055167 N01) y la Sociedad Nacional de Esclerosis Múltiple (RG 3288-A6).

1. Preparación CFA-antígeno emulsionado <ol><li> Disolver cobaya MBP (preparado de acuerdo con el método de Swanborg1 y se almacena en forma liofilizada a 4 ° C) en solución tampón de fosfato (PBS) a una concentración de 2 mg / ml. Si sintetizados péptidos MBP (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 se utilizan, preparar una solución de 2 mg / ml. Elaborar una cantidad apropiada de solución de antígeno (0,1 ml por ratón para ser vacunados) en una jeringa de vidrio con luer-lok. </li><li> E...

<ol>
	<li>Swanborg, R. H., Sabato, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis.">Experimental allergic encephalomyelitis.</a> Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice:+Mapping+of+T+cell+epitopes+and+T+cell+Vb+gene+segment+usage.">Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage.</a> J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).</li><li>McCarron, R., McFarlin, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptively+transferred+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+SJL/J,+PL/J,+and+(SJL/J+x+PL/J)F1+mice.+Influence+of+I-A+haplotypes+on+encephalitogenic+epitope+of+myelin+basic+protein.">Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein.</a> J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge+induces+consistent+murine+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice+and+other+reputed+resistant+strains.">A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains.</a> J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).</li><li>Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-specific+T+cells+also+recognize+neuronal+autoantigen+in+a+transgenic+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis.</a> Nat. Med. 15, 626-632 (2009).</li><li>Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-10+plays+an+important+role+in+the+homeostatic+regulation+of+the+autoreactive+reperteroire+in+na&#239;ve+mice.">IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in na&#239;ve mice.</a> J. Immunol. 173, 828-834 (2004).</li><li>Anderton, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treg+and+T-effector+cells+in+autoimmune+CNS+inflammation:+a+delicate+balance+easily+disturbed.">Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed.</a> Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).</li><li>Arnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis+-+susceptibility+and+suppression.">Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression.</a> Immunol. Rev. 55, 5 (1981).</li><li>Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+mice+by+antibodies+against+IFN-g.">Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g.</a> J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).</li><li>Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis-resistant+mice+have+highly+encephalitogenic+myelin+basic+protein+(MBP)-specific+T+cell+clones+that+recognize+a+MBP+peptide+with+high+affinity+for+MHC+class+II.">Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II.</a> J. Immunol. 154, 388-398 (1995).</li><li>Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+proteolipid+protein-specific+CD4+CD25++regulatory+cells+mediate+genetic+resistance+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).</li><li>Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-+specific+regulatory+T+cells+accumulate+in+the+CNS+but+fail+to+control+autoimmune+inflammation.">Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation.</a> Nature Med. 13, 423-431 (2007).</li><li>Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+adoptive+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice.+Longevity+of+donor+T+cells+and+lack+of+disease+relapses.">Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses.</a> Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).</li></ol>

Los estudios de la EAE en ratones a menudo utilizan los neuroantigens, la proteína básica de mielina (MBP), proteína proteolipídica (PLP) o las proteínas de mielina de oligodendrocitos (MOG). Estudios anteriores utilizan sobre todo MBP. PLP estimula respuestas fuertes y consistentes de los ratones SJL. Más recientemente, MOG es el neuroantigen común usado porque ratones B6 son susceptibles a la inducción de la enfermedad con este antígeno. Muchas de las cepas de ratón de genes específicos están en el fondo B...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Conejillos de Indias la médula espinal </td><td> Rockland inmuno-químicos, Inc. Gilbertsville, PA 19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td> congelado </td></tr><tr><td> Adyuvante de Freund, completo H37Ra </td><td> Difco Laboratories Detroit, MI </td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> Multifit intercambio de jeringas, capaz de </td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com / us</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> MediatechInc. Manassas, VA <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> Ratones </td><td> Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine </td><td> Ratones B6: 0000664 </td><td></td></tr></tbody></table>

overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es una enfermedad inflamatoria del sistema nervioso central (SNC) y se ha utilizado como un modelo animal para el estudio de la enfermedad desmielinizante humana, la esclerosis múltiple (MS). EAE se caracteriza por la infiltración patológica de células mononucleares en el SNC y por la manifestación clínica de la enfermedad paralítica. Similar a la EM, EAE es también bajo control genético en que ciertas cepas de ratón son susceptibles a la inducción de la enfermedad, mientras que otros son resistentes. Por lo general, C57BL / 6 (H-2 b) los ratones inmunizados con la proteína básica de mielina (MBP) no presenta signos de parálisis. Esta falta de respuesta no es ciertamente debido a defectos en el procesamiento de antígenos o la presentación de antígenos de MBP, como un protocolo experimental descrito aquí se han utilizado para inducir EAE severa en ratones C57BL / 6, así como otras cepas de ratón reputadas resistentes. Además, encefalitógenas clones de células T de los ratones C57BL / 6 y ratones Balb / c reactivas a MBP había sido éxitocompletamente aislado y propagado. El protocolo experimental implica el uso de un sistema celular en el que la transferencia adoptiva MBP-cebado (200 ug / ratón) C57BL / 6 donantes células de ganglios linfáticos se aislaron y cultivaron durante cinco días con el antígeno para ampliar el grupo de células T específicas de MBP. Al final del período de cultivo, 50 millones de células viables se transfieren a ingenuos receptores singénicos a través de la vena de la cola. Los ratones receptores así tratados no suelen desarrollar EAE, reafirmando así su condición resistentes, y pueden permanecer normal por tiempo indefinido. Diez días después de la transferencia de células, los ratones receptores tienen el desafío de adyuvante completo de Freund (CFA)-MBP emulsionada en cuatro sitios en los flancos. EAE severa comienza a desarrollarse en estos ratones de diez a catorce días después del desafío. Los resultados mostraron que la inducción de la enfermedad fue específico antigénica como desafío con antígenos irrelevantes no indujo signos clínicos de enfermedad. Significativamente, una titulación de la dosis de antígeno utilizado paradesafiar los ratones receptores mostró que podría ser tan baja como 5 ug / ratón. Además, un estudio cinético de la temporización de una estimulación antigénica mostró que desafío para inducir la enfermedad fue eficaz tan pronto como 5 desafío antigénico días después y mientras más de 445 días post desafío antigénico. Estos datos apuntan claramente hacia la participación de una &quot;larga vida&quot; población de células T en el mantenimiento de la falta de respuesta. La participación de las células T reguladoras (Tregs) en este sistema no está definido.

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Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Ciertas cepas de ratón son capaces de resistir la inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) con proteína básica de mielina. Aquí se describe es un protocolo de inmunización simple que invierte la falta de respuesta e induce la enfermedad paralítica en varios típicas manchas de EAE de ratón resistentes.

Superar la falta de respuesta en encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) cepas de ratones resistentes a través de transferencia adoptiva y la estimulación antigénica

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

La metástasis experimentales y CTL Modelo inmunoterapia adoptiva de transferencia de ratón

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Investigación

Inmunología e Infección

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

La mielina glicoproteína del oligodendrocito (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Inducida por la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en ratones C57BL / 6 ratones

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

La inducción de la inflamación intestinal murino por transferencia adoptiva de Efector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; T células en ratones inmunodeficientes

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Producción simple y eficiente y purificación de ratón mielina de oligodendrocitos de la glucoproteína de la encefalomielitis autoinmune experimental Estudios

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

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Visualizar el deterioro de las barreras endoteliales y Glial de la unidad Neurovascular durante la encefalomielitis Autoinmune Experimental In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Inmunoterapia adoptiva de células iNKT en ratones RA inducidos por glucosa-6-fosfato (G6PI)

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Análisis citométrico de flujo de infiltración de linfocitos en el sistema nervioso central durante la encefalomielitis autoinmune experimental

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Uveítis autoinmune experimental: un modelo de ratón inflamatorio intraocular

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Mejora de la inmunogenicidad por Mycobacterium paratuberculosis en la encefalomielitis autoinmune

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Autor destacado: Actividad adyuvante de Mycobacterium paratuberculosis en la mejora de la inmunogenicidad de los autoantígenos durante la encefalomielitis autoinmune experimental  

Actividad adyuvante de Mycobacterium paratuberculosis en la mejora de la inmunogenicidad de los autoantígenos durante la encefalomielitis autoinmune experimental

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...