Name: skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts
Uploaded: 2013-07-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts at JoVE.com

وقد تم تمويل تطوير هذا البروتوكول من قبل معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM، TR1-01246) وباركنسون التحالف.

يجب أن تبقى على الجلد التي تم الحصول عليها لكمة خزعة باستخدام الإجراء القياسي 3 (على سبيل المثال تم الحصول عليها مع 4MM صك Visipunch جولة) في كامل DMEM 20٪ FBS وسائل الاعلام على الجليد. مرة واحدة قد وصلت العينة في المختبر، معالجة خزعة في أقرب وقت ممكن. <p class="jove_title" style="...

<ol>
	<li>Nguyen, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRRK2+mutant+iPSC-derived+DA+neurons+demonstrate+increased+susceptibility+to+oxidative+stress.">LRRK2 mutant iPSC-derived DA neurons demonstrate increased susceptibility to oxidative stress.</a> Cell Stem Cell. 8, 267-280 (2011).</li><li>Mak, S. K., Tewari, D., Tetrud, J. W., Langston, J. W., Schule, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+skin+fibroblasts+from+a+Parkinson's+disease+patient+with+an+alpha-synuclein+triplication.">Mitochondrial dysfunction in skin fibroblasts from a Parkinson's disease patient with an alpha-synuclein triplication.</a> Journal of Parkinson's Disease. 1, 175-183 (2011).</li><li>Punch Zuber, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=biopsy+of+the+skin.">biopsy of the skin.</a> Am. Fam. Physician. 65, 1155-1164 (2002).</li><li>Takashima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+fibroblast+cultures.">Establishment of fibroblast cultures.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. Chapter 2, Unit 2, 1 (2001).</li><li>Kuroda, K., Tajima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSP47+is+a+useful+marker+for+skin+fibroblasts+in+formalin-fixed,+paraffin+embedded+tissue+specimens.">HSP47 is a useful marker for skin fibroblasts in formalin-fixed, paraffin embedded tissue specimens.</a> J. Cutan. Pathol. , 241-246 (2004).</li></ol>

مع هذا البروتوكول، ويمكن الحصول على الثقافات نقي نسبيا من الخلايا الليفية الجلد. الخلايا الليفية لها سمات شكلية متميزة من ممدود، أجسام الخلايا مثل مغزل، وجولة لنوى الخلايا البيضاوي، والخلايا الليفية تنمو في الانحياز وحزم عندما متموجة. تدعم وسائل الإعلام نمو الخلاي...

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissecting microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>S6E</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 cm Tissue Culture Petri dish</td>
 <td>VWR</td>
 <td>25382-166</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-well Tissue Culture plate </td>
 <td>VWR</td>
 <td>73520-906</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Stainless steel disposable sterile scalpels (2), blade No#15, Miltex</td>
 <td>VWR</td>
 <td>21909-660</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile pointed-tip forceps</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 mL Conical tubes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>21008-940</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-894</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-896</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-898</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pasteur Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>14672-380</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
Table A. Table of specific reagents and equipments.
 <table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent</td>
 <td>Company </td>
 <td>Catalogue Number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X DMEM: High Glucose</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>11960-069</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>20% Fetal Bovine Serum</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>26140-079</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X L-Glutamine</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>25030-164</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X MEM Non-essential Amino Acids </td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>11140-076</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X Penicillin/Streptomycin</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>15140-163</td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>
Table B. Reagents.

skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts

الأنسجة وخطوط الخلايا المشتقة من الفرد مع المرض هي مصادر المثالي لدراسة الظواهر الخلوية المرتبطة بتلك الأمراض. الخلايا الليفية المريض المستمدة في هذا البروتوكول قد استخدمت بنجاح في اشتقاق الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها المرض إلى نموذج 1. ويمكن أيضا الممرات في وقت مبكر من هذه الخلايا الليفية أن تستخدم لالمقايسات الفنية المستندة إلى الخلايا لدراسة مسارات محددة المرض، وآليات 2 والنهج فحص المخدرات لاحقة. الاستفادة من بروتوكول المعروضة على الإجراءات الأنزيمية هي 1) استنساخ هذه التقنية من كميات صغيرة من الأنسجة المستمدة من المرضى من كبار السن، مثل المرضى المصابين يعانون من مرض باركنسون، 2) نهج بسيط من الناحية الفنية على منهجيات أكثر تحديا باستخدام العلاجات الأنزيمية، و3 ) النظر الوقت: هذا البروتوكول يأخذ 15-20 دقيقة ويمكن القيام بها على الفور بعد وصول الخزعة. العلاجات الأنزيمية يمكن أن يستغرق فترة تصل الى 4 ساعات ولها مشاكلoverdigestion، والحد من بقاء الخلية والمرفقات اللاحقة من الخلايا عندما لم يتم التعامل معها بشكل صحيح. يصف هذا البروتوكول تشريح وإعداد الجلد البشري 4 ملم خزعة لاشتقاق ثقافة الخلايا الليفية، ولها نسبة نجاح عالية جدا وهو أمر مهم عند التعامل مع عينات الأنسجة المشتقة من المريض. في هذه الثقافة، الكيراتينية تهاجر من الأنسجة خزعة خلال الأسبوع الأول بعد إعداد. الخلايا الليفية تظهر بعد 7-10 أيام ثمرة أول من الخلايا الكيراتينية. DMEM وسائل الإعلام ارتفاع نسبة الجلوكوز تستكمل مع FBS 20٪ تفضل ونمو الخلايا الليفية أكثر من الخلايا الكيراتينية والخلايا الليفية اكتسى الخلايا الكيراتينية. بعد 2 الممرات وقد تضعف الخلايا الكيراتينية خارج مما أدى إلى الثقافات الليفية متجانسة نسبيا والذي يعبر عن الخلايا الليفية SERPINH1 علامة (HSP-47). باستخدام هذا النهج، يمكن أن تستمد 15-20000000 الخلايا الليفية في 4-8 أسابيع للأعمال المصرفية الخلية. تشريح الجلد يستغرق حوالي 15-20 دقيقة، ثم يتم رصد خلايا مرة واحدة في اليومتحت المجهر، وسائل الإعلام يتم تغيير بعد كل 2-3 أيام المرفقات وثمرة من الخلايا.

الكيراتينية نابتا من القطع الخزعة في أقرب وقت 48 ساعة بعد تشريح. ويمكن ملاحظة الخلايا الليفية أول ثمرة بعد حوالي أسبوع واحد من المعالجة. مرة واحدة وصلت إلى الآبار confluency، و passaged الخلايا الليفية لمدة أكثر الممرات لتصل إلى ثلاث قوارير 150 سم (T150) وcryopreserved الخلايا. نحن تولد م...

Watch this Scientific Journal Video about Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts at JoVE.com

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

بروتوكول ثقافة يزدرع الخلايا الليفية من الخزعات لكمة جلد الإنسان هو وسيلة قوية من الناحية الفنية وبسيطة لاستخلاص خلايا الجلد في غضون 4-8 أسابيع للأعمال المصرفية من حوالي 15-20 مليون خلية في عدد مرور منخفض.

الجلد لكمة خزعة الثقافة ازدراع لاشتقاق الخلايا الليفية الإنسان الابتدائية

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

الجيل التجريبية للسرطان ، المرتبطين بها الخلايا الليفية (مقاهي) من الخلايا الليفية الثديية البشرية

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

استخدام الخلايا الليفية الإنسان الأساسية لرصد نمط ظاهري الميتوكوندريا في مجال مرض باركنسون

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

في المختبر الثقافة عضوي من أورام القولون ماوس

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

ثقافة الأنسجة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الابتدائية نخاع العظم الإنسان والأورام الخبيثة في

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

الثقافة الأولية من الإنسان الدهليزي Schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified BergstrÃƒÆ’Ã‚Â¶m Technique

الهيكل العظمي إجراءات خزعة العضلات البشرية باستخدام تقنية التعديل بيرجستروم

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

إنشاء الإنسان الظهارية Enteroids وColonoids من الأنسجة كامل وخزعة

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

الانسان<em&gt; المتسعة الوحشية</em&gt; الهيكل العظمي خزعة العضلات باستخدام ويل Blakesley مبضع المحارات

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

توصيف الأنسجة بعد طريقة جديدة تصنيفها فيما يتعلق الجلد الصغرى الطعوم الجيل

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

ثلاثي الأبعاد الثقافة الجيني حبة من خلايا الإنسان ورم الغدة النخامية

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...