Name: skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts
Uploaded: 2013-07-07T13:00:00
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इस प्रोटोकॉल के विकास पुनर्योजी चिकित्सा के लिए कैलिफोर्निया इंस्टीट्यूट (सीआईआरएम, TR1-01246) और पार्किंसंस गठबंधन द्वारा वित्त पोषित किया गया.

पंच बायोप्सी मानक प्रक्रिया 3 (जैसे 4mm दौर Visipunch साधन प्राप्त के साथ) का उपयोग कर प्राप्त त्वचा बर्फ पर पूरा DMEM 20% FBS के मीडिया में रखा जाना चाहिए. एक बार नमूना प्रयोगशाला में आ गया है, जल्द से जल्द बायोप?...

<ol>
	<li>Nguyen, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRRK2+mutant+iPSC-derived+DA+neurons+demonstrate+increased+susceptibility+to+oxidative+stress.">LRRK2 mutant iPSC-derived DA neurons demonstrate increased susceptibility to oxidative stress.</a> Cell Stem Cell. 8, 267-280 (2011).</li><li>Mak, S. K., Tewari, D., Tetrud, J. W., Langston, J. W., Schule, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+skin+fibroblasts+from+a+Parkinson's+disease+patient+with+an+alpha-synuclein+triplication.">Mitochondrial dysfunction in skin fibroblasts from a Parkinson's disease patient with an alpha-synuclein triplication.</a> Journal of Parkinson's Disease. 1, 175-183 (2011).</li><li>Punch Zuber, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=biopsy+of+the+skin.">biopsy of the skin.</a> Am. Fam. Physician. 65, 1155-1164 (2002).</li><li>Takashima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+fibroblast+cultures.">Establishment of fibroblast cultures.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. Chapter 2, Unit 2, 1 (2001).</li><li>Kuroda, K., Tajima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSP47+is+a+useful+marker+for+skin+fibroblasts+in+formalin-fixed,+paraffin+embedded+tissue+specimens.">HSP47 is a useful marker for skin fibroblasts in formalin-fixed, paraffin embedded tissue specimens.</a> J. Cutan. Pathol. , 241-246 (2004).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल के साथ, त्वचा fibroblasts की अपेक्षाकृत शुद्ध संस्कृतियों प्राप्त किया जा सकता है. fibroblasts के अंडाकार सेल नाभिक को दौर लम्बी, धुरी की तरह सेल निकायों की विशेषता रूपात्मक विशेषताएं हैं, और जब मिला हुआ ...

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissecting microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>S6E</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 cm Tissue Culture Petri dish</td>
 <td>VWR</td>
 <td>25382-166</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-well Tissue Culture plate </td>
 <td>VWR</td>
 <td>73520-906</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Stainless steel disposable sterile scalpels (2), blade No#15, Miltex</td>
 <td>VWR</td>
 <td>21909-660</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile pointed-tip forceps</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 mL Conical tubes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>21008-940</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-894</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-896</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-898</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pasteur Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>14672-380</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
Table A. Table of specific reagents and equipments.
 <table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent</td>
 <td>Company </td>
 <td>Catalogue Number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X DMEM: High Glucose</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>11960-069</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>20% Fetal Bovine Serum</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>26140-079</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X L-Glutamine</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>25030-164</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X MEM Non-essential Amino Acids </td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>11140-076</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X Penicillin/Streptomycin</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>15140-163</td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>
Table B. Reagents.

skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts

रोग के साथ एक व्यक्ति से ली गई ऊतकों और सेल लाइनों रोग से संबंधित सेलुलर phenotypes अध्ययन करने के लिए आदर्श स्रोत हैं. इस प्रोटोकॉल में रोगी व्युत्पन्न fibroblasts के सफलतापूर्वक मॉडल रोग 1 से प्रेरित pluripotent स्टेम सेल की व्युत्पत्ति में इस्तेमाल किया गया है. इन fibroblasts की प्रारंभिक अंश भी विशिष्ट बीमारी रास्ते, तंत्र 2 और बाद में दवा स्क्रीनिंग दृष्टिकोण का अध्ययन करने के लिए सेल आधारित कार्यात्मक assays के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एंजाइमी प्रक्रियाओं पर प्रस्तुत प्रोटोकॉल का लाभ 1) एंजाइमी उपचार का उपयोग पुराने रोगियों, पार्किंसंस रोग, 2 के साथ प्रभावित जैसे रोगियों) अधिक चुनौतीपूर्ण तरीके से अधिक तकनीकी रूप से सरल दृष्टिकोण से व्युत्पन्न ऊतक की छोटी मात्रा से तकनीक के reproducibility, और 3 रहे हैं ) समय ध्यान: इस प्रोटोकॉल 15-20 मिनट लगते हैं और बायोप्सी आने के बाद तुरंत किया जा सकता है. Enzymatic उपचार 4 घंटे तक का समय लग और की समस्या हो सकती हैसेल व्यवहार्यता और ठीक से संभाला नहीं जब कोशिकाओं के बाद कुर्की की overdigestion, कमी. इस प्रोटोकॉल में एक 4 मिमी मानव त्वचा एक तंतुप्रसू संस्कृति की व्युत्पत्ति के लिए बायोप्सी के विच्छेदन और तैयारी का वर्णन करता है और रोगी व्युत्पन्न ऊतक के नमूने से निपटने के लिए महत्वपूर्ण है जो एक बहुत ही उच्च सफलता दर है. इस संस्कृति में, केरेटिनकोशिकाओं तैयारी के बाद पहले सप्ताह के भीतर बायोप्सी ऊतक से बाहर पलायन. Fibroblasts keratinocytes के पहले परिणाम के 7-10 दिन बाद दिखाई देते हैं. 20% FBS के साथ पूरक DMEM उच्च ग्लूकोज मीडिया केरेटिनकोशिकाओं और fibroblasts अधिक fibroblasts की वृद्धि केरेटिनकोशिकाओं बढ़ना होगा पक्ष में है. 2 मार्ग के बाद केरेटिनकोशिकाओं तंतुप्रसू मार्कर SERPINH1 (HSP-47) को व्यक्त करता है जो अपेक्षाकृत समरूप तंतुप्रसू संस्कृतियों में जिसके परिणामस्वरूप बाहर पतला कर दिया गया है. इस दृष्टिकोण का प्रयोग, 15-20000000 fibroblasts सेल बैंकिंग के लिए 4-8 सप्ताह में प्राप्त किया जा सकता है. त्वचा विच्छेदन 15-20 मिनट का समय लगता है, कोशिकाओं तो एक दिन में एक बार निगरानी कर रहे हैंखुर्दबीन के नीचे, और मीडिया हर 2-3 दिनों लगाव और कोशिकाओं के परिणाम के बाद बदल गया है.

Keratinocytes विच्छेदन के बाद 48 घंटे के रूप में जल्द ही बायोप्सी टुकड़े से बाहर बढ़ रहा है. पहले fibroblasts के परिणाम के बारे में एक सप्ताह के प्रसंस्करण के बाद देखा जा सकता है. कुओं confluency पर पहुंच गया है एक बार, fibroblasts के तीन ...

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Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

मानव त्वचा पंच बायोप्सी से तंतुप्रसू explant संस्कृति प्रोटोकॉल एक कम बीतने संख्या में दस लाख के बारे में 15-20 कोशिकाओं की बैंकिंग के लिए 4-8 सप्ताह के भीतर त्वचा कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए एक तकनीकी रूप से मजबूत और आसान तरीका है.

प्राथमिक मानव fibroblasts की व्युत्पत्ति के लिए त्वचा पंच बायोप्सी explant संस्कृति

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

कार्सिनोमा - एसोसिएटेड Fibroblasts के प्रायोगिक मानव स्तन Fibroblasts से जनरेशन (CAFs)

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

पार्किंसंस रोग के क्षेत्र में Mitochondrial phenotypes की निगरानी के लिए प्राथमिक मानव fibroblasts का प्रयोग करें

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

प्राथमिक माउस पेट के ट्यूमर की इन विट्रो Organoid संस्कृति में

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

प्राथमिक मानव अस्थि मज्जा और उसके Malignancies अध्ययन के लिए एक तीन आयामी ऊतक संस्कृति मॉडल

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

मानव Vestibular Schwannomas के प्राथमिक संस्कृति

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified BergstrÃƒÆ’Ã‚Â¶m Technique

संशोधित Bergstrom तकनीक का प्रयोग मानव कंकाल की मांसपेशी बायोप्सी प्रक्रियाओं

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

पूरे ऊतक और बायोप्सी से मानव उपकला Enteroids और Colonoids की स्थापना

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

मानव<em&gt; उत्तर lateralis</em&gt; कंकाल की मांसपेशी बायोप्सी वेल-Blakesley Conchotome का प्रयोग

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

त्वचा माइक्रो Grafts पीढ़ी के लिए एक नई विधि disaggregation के बाद ऊतक विशेषता

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

मानव पिट्यूटरी ग्रंथ्यर्बुद कोशिकाओं के तीन आयामी Alginate मनका संस्कृति

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...