Name: skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts
Uploaded: 2013-07-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts at JoVE.com

Развитие этого протокола было профинансировано Калифорнийского института регенеративной медицины (CIRM, TR1-01246) и Паркинсона Альянса.

Биопсия кожи получены с использованием стандартных процедур 3 (например, полученные с 4мм круглый инструмент Visipunch) не должны оставаться в полной DMEM СМИ 20% FBS на льду. После того, как образец прибыл в лаборатории, обрабатывать биопсии как можно скорее. 1. Подготовк?...

<ol>
	<li>Nguyen, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRRK2+mutant+iPSC-derived+DA+neurons+demonstrate+increased+susceptibility+to+oxidative+stress.">LRRK2 mutant iPSC-derived DA neurons demonstrate increased susceptibility to oxidative stress.</a> Cell Stem Cell. 8, 267-280 (2011).</li><li>Mak, S. K., Tewari, D., Tetrud, J. W., Langston, J. W., Schule, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+skin+fibroblasts+from+a+Parkinson's+disease+patient+with+an+alpha-synuclein+triplication.">Mitochondrial dysfunction in skin fibroblasts from a Parkinson's disease patient with an alpha-synuclein triplication.</a> Journal of Parkinson's Disease. 1, 175-183 (2011).</li><li>Punch Zuber, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=biopsy+of+the+skin.">biopsy of the skin.</a> Am. Fam. Physician. 65, 1155-1164 (2002).</li><li>Takashima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+fibroblast+cultures.">Establishment of fibroblast cultures.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. Chapter 2, Unit 2, 1 (2001).</li><li>Kuroda, K., Tajima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSP47+is+a+useful+marker+for+skin+fibroblasts+in+formalin-fixed,+paraffin+embedded+tissue+specimens.">HSP47 is a useful marker for skin fibroblasts in formalin-fixed, paraffin embedded tissue specimens.</a> J. Cutan. Pathol. , 241-246 (2004).</li></ol>

С помощью этого протокола относительно чистых культур фибробластов кожи могут быть получены. Фибробласты имеют характерные морфологические особенности удлиненное, веретенообразной клеточных тел, круглой или овальной формы клеточных ядер, и фибробласты растут выровнены и в связках, ...

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissecting microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>S6E</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 cm Tissue Culture Petri dish</td>
 <td>VWR</td>
 <td>25382-166</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-well Tissue Culture plate </td>
 <td>VWR</td>
 <td>73520-906</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Stainless steel disposable sterile scalpels (2), blade No#15, Miltex</td>
 <td>VWR</td>
 <td>21909-660</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile pointed-tip forceps</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 mL Conical tubes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>21008-940</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-894</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-896</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 mL Serological Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>89130-898</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pasteur Pipettes</td>
 <td>VWR</td>
 <td>14672-380</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
Table A. Table of specific reagents and equipments.
 <table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent</td>
 <td>Company </td>
 <td>Catalogue Number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X DMEM: High Glucose</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>11960-069</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>20% Fetal Bovine Serum</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>26140-079</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X L-Glutamine</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>25030-164</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X MEM Non-essential Amino Acids </td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>11140-076</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X Penicillin/Streptomycin</td>
 <td>Invitrogen/Gibco</td>
 <td>15140-163</td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>
Table B. Reagents.

skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts

Тканей и клеточных линий, полученных от индивидуума с заболеваниями являются идеальными источниками для изучения связанных с болезнью сотовых фенотипы. Пациент полученные фибробласты в этом протоколе были успешно использованы при выводе индуцированных плюрипотентных стволовых клеток для модели болезни 1. Ранние проходы этих фибробласты могут также использоваться для основанных на клетках функциональных анализов для изучения конкретных путей заболевание, механизмы 2 и последующие подходы скрининга препаратов. Преимущество представленных протоколов более ферментативной процедуры являются: 1) воспроизводимость техники из небольшого количества тканей, полученных из пожилых пациентов, например пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, 2) технически простым подходом над более сложной методологии использования ферментативного лечения, а также 3 ) время рассмотрения: этот протокол занимает 15-20 минут и может быть выполнена сразу же после прибытия биопсии. Ферментативный лечение может занять до 4 часов, а есть проблемыизбытком, снижение жизнеспособности клеток и последующего прикрепления клеток, когда не обрабатываются должным образом. Этот протокол описывает Вскрытие и подготовка 4-мм человека биопсию кожи для отвлечения культуры фибробластов и имеет очень высокий показатель, что важно при работе с пациентом полученных образцов ткани. В этой культуре, кератиноциты мигрировать из биопсии ткани в течение первой недели после приготовления. Фибробласты появляются через 7-10 дней после первого вырост кератиноцитов. DMEM высокий сред глюкозы с добавлением 20% FBS способствует росту фибробластов на кератиноциты и фибробласты перерасти кератиноцитов. После 2 пассажа кератиноциты были разбавляют что приведет к возможности относительно однородных культур фибробластов выражающая фибробластов маркером SERPINH1 (HSP-47). Используя этот подход, 15-20 млн. фибробласты могут быть получены в течение 4-8 недель для мобильного банкинга. Вскрытие кожи занимает около 15-20 мин, клетки затем контролировать один раз в деньпод микроскопом, и средств массовой информации меняется каждые 2-3 дня после привязанности и нарост клеток.

Кератиноциты, растущие из частей биопсии, как только 48 часа после вскрытия. Первый результат фибробластов можно наблюдать около одной недели после обработки. После скважин достигли слияния, фибробласты пассировать в течение еще двух отрывков, достигнет трех колб 150 см (T150) и клетки замо...

Watch this Scientific Journal Video about Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts at JoVE.com

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

Культуре фибробластов эксплант протокол от человека биопсию кожи удар технически надежной и простой способ для получения клеток кожи в течение 4-8 недель для банковской около 15-20 миллионов клеток на низких проход.

Кожа биопсии эксплантата культуры для отвлечения Первичные человеческие фибробласты

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Экспериментальные Генерация Карцинома-Associated Фибробласты (CAFS) из молочной железы человека Фибробласты

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

Использование первичных фибробластов человека для мониторинга митохондриальной фенотипы в области болезни Паркинсона

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

В пробирке Organoid культуры первичных опухолей толстой мыши

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Трехмерная Tissue Culture моделью для изучения первичного костного мозга человека и его злокачественных новообразований

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Первичная культура человека вестибулярного шванномы

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified BergstrÃƒÆ’Ã‚Â¶m Technique

Человеческого скелета Процедуры биопсии мышц с использованием модифицированного Бергстром Техника

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

Создание человека эпителиальных Enteroids и Colonoids из цельной ткани и биопсия

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Человек<em&gt; латеральной широкой</em&gt; Скелетных мышц Биопсия Используя Weil-Blakesley конхотом

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Ткань Характеристика после нового метода Дезагрегирование для кожи Micro-трансплантатов поколения

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Трехмерная альгинат-шарик культуре человеческих клеток аденомы гипофиза

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...