Name: real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer
Uploaded: 2012-08-20T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer at JoVE.com

وقدمت الدعم المالي لهذا العمل من خلال المؤسسة الوطنية للعلوم، المعهد الوطني للصحة (NIH)، مواد مركز تكنولوجيا (MTC) وORDA في SIUC. نشكر NSF للحصول على منحة (CHE-0959568) لشراء لFE-SEM. نود أن نشكر الأستاذ ماثيو لإجراء مناقشات مفيدة مكارول. سوف جوليا رييس أود أن أشكر COLCIENCIAS، وجامعة كولومبيا وكالة Pedagogica ذ Tecnologica كولومبيا دي للمنح الدراسية والدعم المالي لها.

A. اصطناع وتوصيف بعض الليبوزومات PDA 4،5،6 ملاحظة 1: حماية الحل بعيدا عن الضوء PDA باستخدام الألومنيوم احباط التفاف على كل الحاويات في جميع أنحاء جميع الخطوات التجريبية. ملاحظة 2: تم إعداد مجمو...

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescence Spectroscopy. , (1999).</li><li>Charych, D. H., Nagy, J. O., Spevak, W., Bednarski, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Colorimetric+Detection+of+a+Receptor-Ligand+Interaction+by+a+Polymerized+Bilayer+Assembly.">Direct Colorimetric Detection of a Receptor-Ligand Interaction by a Polymerized Bilayer Assembly.</a> Science. 261, 585-588 (1993).</li><li>Yoon, B., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Conceptual+and+Technological+Advances+in+Polydiacetylene-based+Supramolecular+Chemosensors.">Recent Conceptual and Technological Advances in Polydiacetylene-based Supramolecular Chemosensors.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1958-1968 (2009).</li><li>Xuelian, L. i., Kohli, P. u. n. i. t. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+Molecular+Interactions+in+Biosensors+Based+on+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer.">Investigating Molecular Interactions in Biosensors Based on Fluorescence Resonance Energy Transfer.</a> J. Phys. Chem. C. 114, 6255-6264 (2010).</li><li>Li, X., Matthews, S., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Polydiacetylene+Liposomes.">Fluorescence Resonance Energy Transfer in Polydiacetylene Liposomes.</a> J. Phys. Chem. B. 112, 13263-13272 (2008).</li><li>Li, X., McCarroll, M., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulating+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Conjugated+Liposomes.">Modulating Fluorescence Resonance Energy Transfer in Conjugated Liposomes.</a> Langmuir. 22, (2006).</li><li>New, R. R. C., New, R. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Liposomes: A Practical Approach. , 33-104 (1990).</li><li>Chen, X., Lee, J., Jou, M. J., Kim, J. -. M., Yoon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+and+Fluorometric+Detection+of+Cationic+Surfactants+Based+on+Conjugated+Polydiacetylene+Supramolecules.">Colorimetric and Fluorometric Detection of Cationic Surfactants Based on Conjugated Polydiacetylene Supramolecules.</a> Chem. Commun. , 3434-3436 (2009).</li><li>Yarimaga, O., Im, M., Choi, Y. -. K., Kim, T. W., Jung, Y. K., Park, H. G., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Color+Display+System+Based+on+Thermochromic+Conjugated+Polydiacetylene.">A Color Display System Based on Thermochromic Conjugated Polydiacetylene.</a> Macromolecular Research. 18, 404-407 (2010).</li></ol>

لقد أجرينا ملزمة انتقائية من بقايا يسين من البروتين على سطح الحويصلية باستخدام NHS-أمين التفاعل. هذا الأسلوب يستند إلى الحنق قادرة على القيام في الوقت الحقيقي رصد البيوتين streptavidin-ملزمة والبروتين (BSA) ملزمة لسطح الحويصلية. ويمكن تطبيق إجراء مشابه لدراسة ديناميات ملزمة ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 10،12-pentacosadiynoic حمض (المؤقتة) </td><td> GFS المواد الكيميائية </td><td> 3261 </td><td> الحساسية للضوء </td></tr><tr><td> N-hydroxysuccinimide (NHS) </td><td> العضوية أكروس </td><td> 157270250 </td><td> الرطوبة الحساسة </td></tr><tr><td> 1 - (3 - (dimethylamino) ن)-3-ethylcarbodiimide هيدروكلوريد (EDC) </td><td> كيمياء المركبات الرائدة الدولية، </td><td> 00050 </td><td></td></tr><tr><td> 1،2-dimyristoyl-SN-glycero-3-phosphocholine (DMPC) </td><td> افانتي الدهون القطبية </td><td> 850345P </td><td></td></tr><tr><td> رودامين الموسومة السير البقريأم الزلال (BSA-ره) </td><td> سيغما الدريتش </td><td> A4537 </td><td></td></tr><tr><td> (1،2-dioleoyl-SN-glycero-3-phosphoethanolamine-N-(biotinyl) (البيوتين-مخدر) </td><td> افانتي الدهون القطبية </td><td> 870282 </td><td></td></tr></tbody></table>

real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer

الحنق هو العملية التي يتم بواسطتها الطاقة الإشعاعية غير المنقولة من جزيء المانحة متحمس لجزيء متقبل الأرض التابعة للدولة من خلال التفاعلات ثنائي القطب ثنائي القطب، طويلة المدى 1. في مقايسة الحاضر الاستشعار عن بعد، ونحن الاستفادة من العقار المميز من PDA: الأزرق تحول في الطيف للأشعة فوق البنفسجية فيس امتصاص الإلكترونية PDA (الشكل 1) بعد تحليلها يتفاعل مع المستقبلات المرتبطة PDA 2،3،4،7. هذا التحول في امتصاص الطيف PDA ويوفر التغييرات في التداخل الطيفي (J) بين PDA (متقبل) ورودامين (المانحين) الذي يؤدي إلى تغييرات في كفاءة الحنق. وهكذا، تم الكشف عن التفاعلات بين الحليلة (يجند) والمستقبلات من خلال الحنق بين fluorophores المانحة وPDA. على وجه الخصوص، وتبين لنا أن الاستشعار من جزيء البروتين streptavidin نموذج. علينا أن نبرهن أيضا التساهمية ملزم للمصل الألبومين البقري (BSA) لسطح الحويصلية مع الحنق آلية. هذه التفاعلات بين رويمكن لمس انه الليبوزومات طبقة ثنائية وجزيئات البروتين في الوقت الحقيقي. الطريقة المقترحة هي طريقة عامة لاستشعار كيميائية صغيرة والجزيئات الكيميائية الحيوية الكبيرة. منذ مضان هذا بحد ذاته أكثر حساسية من قياس الألوان، ويمكن الحد من الكشف الفحص يكون في شبه nanomolar مجموعة أو أقل 8. علاوة على ذلك، PDA يمكن أن تكون بمثابة متقبل العالمية في الحنق، مما يعني أن يمكن تطوير أجهزة استشعار متعددة مع PDA (متقبل) functionalized مع الجهات المانحة ومستقبلات مختلفة تعلق على سطح الليبوزومات PDA.

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer at JoVE.com

Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer

علينا أن نبرهن الحنق بين polydiacetylene البوليمر مترافق (PDA) وتعلق fluorophore إلى سطح الليبوزومات PDA للاستشعار من الجزيئات الحيوية. الليبوزومات PDA الواردة أيضا جزيئات مستقبلات على سطحها لالجزيئات الحيوية لاستخدامها تحقيقات. يجند مستقبلات التفاعلات تؤدي إلى تغييرات في كفاءة الحنق بين fluorophore وPDA التي هي أساس لآلية الاستشعار عن بعد.

في الوقت الحقيقي رصد يجند مستقبلات التفاعل مع الإسفار نقل الطاقة الرنين

FRET is a process  whereby energy is non-radiatively transferred from an excited donor molecule to  a ground-state acceptor molecule through long-range ...

Research

JoVE Journal

Biology

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

الوقت الفاصل بين التصوير من الانقسام الميتوزي بعد ترنسفكأيشن سيرنا

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

على المدى الطويل اختبار السمية المهلكة مع القشريات الأرتيميا franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

الحنق المجهر لمراقبة الوقت الحقيقي من أحداث في اشارة الخلايا الحية باستخدام أجهزة الاستشعار Unimolecular

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

خلايا الثدييات إضاءة الحيوية مستقل للمراقبة المستمرة وريال مدريد في الوقت السمسة

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

التحقيق البروتين البروتين التفاعلات في الخلايا الحية باستخدام الرنين ضوء بارد نقل الطاقة

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance (SPR)

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance SPR

قياسات الوقت الحقيقي من البروتين غشاء: مستقبلات التفاعلات عن طريق مأكل السطح الرنين (SPR)

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and  understanding the nature of such interactions is a central ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

يستند التحقيق، في الوقت الحقيقي PCR مقاربات للقياس الكمي من microRNAs

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

التصوير في الوقت الحقيقي من النبات خلية سطح حيوية مع زاوية المتغير المجهر epifluorescence

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

المراقبة في الوقت الحقيقي لتنشيط Aurora kinase A باستخدام أجهزة الاستشعار الحيوية FRET التوافقية في الخلايا الحية

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

تصوير واسع المجال وفي الوقت الحقيقي للإشارات الجرح المحلية والجهازية في Arabidopsis

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...