Name: real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer
Uploaded: 2012-08-20T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer at JoVE.com

תמיכה כספית עבור עבודה זו סופקה באמצעות הקרן הלאומי למדע, המכון הלאומי לבריאות (NIH), חומרים במרכז טכנולוגי (MTC) ואורדע בSIUC. אנו מודים למענק NSF (מל&quot;ג 0959568) לרכישת FE-SEM. ברצוננו להודות לפרופ &#39;מתיו McCarroll לדיונים מועילים. ג&#39;וליה רייס תהיה להודות לCOLCIENCIAS, סוכנות קולומביאנית וUniversidad Pedagogica y Tecnologica דה קולומביה למלגה שלה ותמיכה כספית.

סינתזה ואפיון של א &#39;ליפוזומים PDA 4,5,6 הערה 1: הגן על פתרון PDA מאור באמצעות עטיפת נייר אלומיניום על כל מכל לאורך כל שלבי הניסוי. הערה 2: שתי קבוצות שונות של פתרון יפוזום (B ו-C) הוכנו הנוהל הבא (?...

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescence Spectroscopy. , (1999).</li><li>Charych, D. H., Nagy, J. O., Spevak, W., Bednarski, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Colorimetric+Detection+of+a+Receptor-Ligand+Interaction+by+a+Polymerized+Bilayer+Assembly.">Direct Colorimetric Detection of a Receptor-Ligand Interaction by a Polymerized Bilayer Assembly.</a> Science. 261, 585-588 (1993).</li><li>Yoon, B., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Conceptual+and+Technological+Advances+in+Polydiacetylene-based+Supramolecular+Chemosensors.">Recent Conceptual and Technological Advances in Polydiacetylene-based Supramolecular Chemosensors.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1958-1968 (2009).</li><li>Xuelian, L. i., Kohli, P. u. n. i. t. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+Molecular+Interactions+in+Biosensors+Based+on+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer.">Investigating Molecular Interactions in Biosensors Based on Fluorescence Resonance Energy Transfer.</a> J. Phys. Chem. C. 114, 6255-6264 (2010).</li><li>Li, X., Matthews, S., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Polydiacetylene+Liposomes.">Fluorescence Resonance Energy Transfer in Polydiacetylene Liposomes.</a> J. Phys. Chem. B. 112, 13263-13272 (2008).</li><li>Li, X., McCarroll, M., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulating+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Conjugated+Liposomes.">Modulating Fluorescence Resonance Energy Transfer in Conjugated Liposomes.</a> Langmuir. 22, (2006).</li><li>New, R. R. C., New, R. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Liposomes: A Practical Approach. , 33-104 (1990).</li><li>Chen, X., Lee, J., Jou, M. J., Kim, J. -. M., Yoon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+and+Fluorometric+Detection+of+Cationic+Surfactants+Based+on+Conjugated+Polydiacetylene+Supramolecules.">Colorimetric and Fluorometric Detection of Cationic Surfactants Based on Conjugated Polydiacetylene Supramolecules.</a> Chem. Commun. , 3434-3436 (2009).</li><li>Yarimaga, O., Im, M., Choi, Y. -. K., Kim, T. W., Jung, Y. K., Park, H. G., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Color+Display+System+Based+on+Thermochromic+Conjugated+Polydiacetylene.">A Color Display System Based on Thermochromic Conjugated Polydiacetylene.</a> Macromolecular Research. 18, 404-407 (2010).</li></ol>

אנחנו בצענו מחייבים סלקטיבית של שיירי ליזין של חלבון על פני שטח יפוזום באמצעות תגובה NHS-אמינה. זה סריג שיטה מבוססת הוא מסוגלת לעשות ניטור בזמן אמת של ביוטין-streptavidin מחייב וחלבון (BSA) מחייב למשטח יפוזום. הליך דומה ניתן ליישם כדי ללמוד את הדינמיקה המחייבת של אינטראקציות ח...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> חומצה 10,12-pentacosadiynoic (PCDA) </td><td> כימיקלי GFS </td><td> 3261 </td><td> אור רגיש </td></tr><tr><td> N-hydroxysuccinimide (NHS) </td><td> אורגני acros </td><td> 157270250 </td><td> לחות רגישה </td></tr><tr><td> hydrochloride-3-ethylcarbodiimide (EDC) 1 - - ((dimethylamino) propyl 3) </td><td> Chem-Impex הבינלאומי </td><td> 00050 </td><td></td></tr><tr><td> 1,2-dimyristoyl-SN-glycero-3-phosphocholine (DMPC) </td><td> שומני פולאר AVANTI </td><td> 850345P </td><td></td></tr><tr><td> Rhodamine-תויג Ser שוראממ אלבומין (BSA-Rh) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A4537 </td><td></td></tr><tr><td> (1,2-dioleoyl-SN-glycero-3-phosphoethanolamine-N-(biotinyl) (ביוטין-סמים) </td><td> שומני פולאר AVANTI </td><td> 870282 </td><td></td></tr></tbody></table>

real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer

סריג הוא תהליך שבו אנרגיה היא בלתי radiatively הועבר ממולקולת תורם נרגשת למולקולת acceptor מצב קרקע דרך אינטראקציות ארוכות טווח דיפול דיפול-1. בבדיקת החישה הנוכחית, אנו מנצלים תכונה מעניינת של PDA: משמרת כחולה בספקטרום UV-Vis האלקטרוני הספיגה של PDA (איור 1) לאחר אנליטי אינטראקציה עם קולטנים המחוברים למחשב כף היד 2,3,4,7. שינוי זה בספקטרום ספיגת PDA מספק שינויים בחפיפת הרפאים (J) בין מחשב כף היד (acceptor) וrhodamine (תורם) שמובילים לשינויים ביעילות סריג. כך, יחסי הגומלין בין אנליטי (יגנד) והקולטנים שזוהו באמצעות סריג בין fluorophores התורם ומחשבי כף יד. בפרט, אנו מראים את החישה של streptavidin מולקולת חלבון דגם. אנחנו גם להפגין קוולנטי מחייבים של שור אלבומין (BSA) על פני שטח יפוזום עם סריג מנגנון. אינטראקציות אלה בין tהוא יפוזומים bilayer ומולקולות חלבון ניתן לחוש בזמן אמת. השיטה המוצעת היא שיטה כללית לחישה כימית קטנים ומולקולות ביוכימיות גדולות. מאז פלואורסצנטי הוא מהותי יותר רגיש מcolorimetry, גבול הגילוי של assay יכול להיות במגוון תת nanomolar או נמוך 8. יתר על כן, מחשב כף יד יכולה לשמש acceptor אוניברסלי בסריג, מה שאומר שחיישנים מרובים ניתן לפתח עם PDA (acceptor) פונקציונליים עם תורמים ורצפטורים שונים שהוצמדו על פני השטח של ליפוזומים מחשבי כף יד.

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer at JoVE.com

Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer

אנחנו מדגימים סריג בין polydiacetylene מצומדת פולימר (PDA) וfluorophore מחובר אל פני השטח של כף יד ליפוזומים את החישה של ביומולקולות. יפוזומים PDA הכילו גם מולקולות הקולטן על משטחיהם לביומולקולות כדי לשמש כחלליות. אינטראקציות יגנד רצפטור להוביל לשינויים ביעילות סריג בין fluorophore ומחשבי כף היד, שהוא הבסיס של מנגנון החישה.

ניטור בזמן אמת של אינטראקציות יגנד רצפטור עם פלואורסצנטי תהודת העברת אנרגיה

FRET is a process  whereby energy is non-radiatively transferred from an excited donor molecule to  a ground-state acceptor molecule through long-range ...

Research

JoVE Journal

Biology

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

זמן לשגות הדמיה של מיטוזה לאחר transfection siRNA

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

לטווח ארוך רעילות מבחן קטלני עם לסרטן הארטמיה franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

סריג מיקרוסקופי לניטור בזמן אמת של אירועי איתות בתאים חיים באמצעות Biosensors Unimolecular

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

תאי יונקים האוטונומיים bioluminescent לניטור רציף וזמן אמת של Cytotoxicity

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

חוקר חלבונים אינטראקציות בתאים חיים באמצעות העברת פליטת אור התהודה אנרגיה

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance (SPR)

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance SPR

מדידות בזמן אמת של חלבון ממברנה: קולט אינטראקציות שימוש תהודה Plasmon Surface (SPR)

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and  understanding the nature of such interactions is a central ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

בזמן אמת המבוסס על הבדיקה PCR גישות למדידת כמותית של מיקרו-רנ&quot;א

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

הדמיה של Dynamics שטח תא הצמח עם זווית משתנה epifluorescence מיקרוסקופית בזמן אמת

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

ניטור בזמן אמת של אורורה קינאז הפעלה באמצעות Biosensors FRET קונפורמציה בתאים חיים

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

שדה רחב, הדמיה בזמן אמת של אותות פצע מקומיים ומערכתיים ב Arabidopsis

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...