Name: real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer
Uploaded: 2012-08-20T12:00:00
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この仕事のための財政支援は、SIUCで全米科学財団、国立衛生研究所（NIH）、材料技術センター（MTC）やオルダを通じて提供されていました。我々は、FE-SEMの購入のための助成金（CHE-0959568）でNSFに感謝します。我々は有用な議論を教授マシュー·マッキャロルに感謝したいと思います。ジュリアレイエスは彼女の奨学金や財政支援のためにCOLCIENCIAS、コロンビア庁と大学Pedagogica Y Tecnologicaデコロンビアに感謝します。

PDAリポソーム4,5,6のA.合成とキャラクタリゼーション注1：すべての実験手順全体すべてのコンテナにラッピングアルミ箔を使用した光から、PDAソリューションを保護します。 注2：リポソーム溶液の2つの異なるセット（BとC）は、次の手順を実行して調製した携帯情報端末（PDAリポソームの合成とキャラクタリゼーション）。 <p class="jove_step...

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	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescence Spectroscopy. , (1999).</li><li>Charych, D. H., Nagy, J. O., Spevak, W., Bednarski, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Colorimetric+Detection+of+a+Receptor-Ligand+Interaction+by+a+Polymerized+Bilayer+Assembly.">Direct Colorimetric Detection of a Receptor-Ligand Interaction by a Polymerized Bilayer Assembly.</a> Science. 261, 585-588 (1993).</li><li>Yoon, B., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Conceptual+and+Technological+Advances+in+Polydiacetylene-based+Supramolecular+Chemosensors.">Recent Conceptual and Technological Advances in Polydiacetylene-based Supramolecular Chemosensors.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1958-1968 (2009).</li><li>Xuelian, L. i., Kohli, P. u. n. i. t. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+Molecular+Interactions+in+Biosensors+Based+on+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer.">Investigating Molecular Interactions in Biosensors Based on Fluorescence Resonance Energy Transfer.</a> J. Phys. Chem. C. 114, 6255-6264 (2010).</li><li>Li, X., Matthews, S., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Polydiacetylene+Liposomes.">Fluorescence Resonance Energy Transfer in Polydiacetylene Liposomes.</a> J. Phys. Chem. B. 112, 13263-13272 (2008).</li><li>Li, X., McCarroll, M., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulating+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Conjugated+Liposomes.">Modulating Fluorescence Resonance Energy Transfer in Conjugated Liposomes.</a> Langmuir. 22, (2006).</li><li>New, R. R. C., New, R. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Liposomes: A Practical Approach. , 33-104 (1990).</li><li>Chen, X., Lee, J., Jou, M. J., Kim, J. -. M., Yoon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+and+Fluorometric+Detection+of+Cationic+Surfactants+Based+on+Conjugated+Polydiacetylene+Supramolecules.">Colorimetric and Fluorometric Detection of Cationic Surfactants Based on Conjugated Polydiacetylene Supramolecules.</a> Chem. Commun. , 3434-3436 (2009).</li><li>Yarimaga, O., Im, M., Choi, Y. -. K., Kim, T. W., Jung, Y. K., Park, H. G., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Color+Display+System+Based+on+Thermochromic+Conjugated+Polydiacetylene.">A Color Display System Based on Thermochromic Conjugated Polydiacetylene.</a> Macromolecular Research. 18, 404-407 (2010).</li></ol>

私たちは、NHS-アミン反応を用いてリポソーム表面にタンパク質のリジン残基の選択的な結合を行った。これは、ベースの方法は、リポソーム表面に結合するビオチン - ストレプトアビジン結合とタンパク質（BSA）のリアルタイムモニタリングを行うことが可能ですフレット。同様の手順は、それらの選択的受容体と様々なタンパク質相互作用の結合ダイナミクスを研究するために適用するこ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td> 10,12 - pentacosadiynoic酸（PCDA） </td><td> GFSの薬品</td><td> 3261 </td><td>光感受性</td></tr><tr><td> N-ヒドロキシスクシンイミド（NHS） </td><td>アクロスの有機物</td><td> 157270250 </td><td>湿気に敏感</td></tr><tr><td> 1 - （3 - （ジメチルアミノ）プロピル）-3 - エチルカルボジイミド塩酸塩（EDC） </td><td>ケム-IMPEX国際</td><td> 00050 </td><td></td></tr><tr><td> 1,2 -ジミリストイル-sn-グリセロ-3 -ホスホコリン（DMPC） </td><td>アヴァンティ極性脂質</td><td> 850345P </td><td></td></tr><tr><td>ローダミンタグ付きウシ出願UMアルブミン（BSA-RH） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> A4537 </td><td></td></tr><tr><td> （1,2 -ジオレオイル-sn-グリセロ-3 -ホスホエタノールアミン-N-（ビオチニル）（ビオチン-DOPE） </td><td>アヴァンティ極性脂質</td><td> 870282 </td><td></td></tr></tbody></table>

real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer

FRETは、エネルギーは非放射長距離双極子-双極子相互作用を介して1基底状態の受容体分子に励起されたドナー分子から転写されるプロセスです。検体は、PDA 2,3,4,7に接続されている受容体と相互作用した後に、PDAのUV-Vis電子吸収スペクトルの青色シフト（ 図1）：本センシングアッセイでは、PDAの興味深い性質を利用しています。 PDAの吸収スペクトルにおけるこのシフトは、FRET効率の変化につながるのPDA（アクセプタ）とローダミン（ドナー）との間のスペクトルの重なりの変化（J）を提供しています。このように、分析対象物（リガンド）と受容体間の相互作用は、ドナーフルオロフォアおよびPDAの間のFRETで検出されます。特に、我々は、モデルタンパク質分子ストレプトアビジンの検出を示す。我々はまた、ウシ血清アルブミン（BSA）へのリポソーム表面の共有結合機構をFRETを示しています。 tとの間にこれらの相互作用彼重層リポソームとタンパク質分子をリアルタイムで感知することができる。提案手法は、小さな化学と大生化学分子を感知するための一般的な方法です。蛍光が測色よりも本質的に敏感であるので、アッセイの検出限界はサブナノモル範囲または下位8にすることができます。さらに、PDAは、複数のセンサがドナーとPDAリポソームの表面に付着している別の受容体と官能のPDA（アクセプター）を使用して開発することができることを意味FRETにおける普​​遍アクセプタとして作用することができる。

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Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer

我々は、共役高分子ポリジアセチレン（PDA）およびフルオロフォアの生体分子の検出のためのPDAのリポソームの表面に付着した間のFRETを示しています。 PDAのリポソームはまた、プローブとして使用する生体分子のための彼らの表面上の受容体分子が含まれていました。リガンド - 受容体相互作用感知機構の基礎であり、フルオロフォアおよびPDA間でFRET効率の変化につながる。

蛍光共鳴エネルギー移動によるリガンド - 受容体相互作用のリアルタイム監視

FRET is a process  whereby energy is non-radiatively transferred from an excited donor molecule to  a ground-state acceptor molecule through long-range ...

Research

JoVE Journal

Biology

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

siRNAトランスフェクション後の有糸分裂のタイムラプスイメージング

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

甲殻類との長期致死毒性試験アルテミアfranciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

単分子バイオセンサーを用いた生細胞中のシグナル伝達事象をリアルタイムで監視するための顕微鏡のFRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

細胞毒性の継続とリアルタイム監視のための自律的に生物発光哺乳類細胞

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

生物発光共鳴エネルギー転移を用いて生細胞中のタンパク質 - タンパク質相互作用を調査する

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance (SPR)

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance SPR

膜タンパク質のリアルタイム測定：受容体相互作用は、表面プラズモン共鳴を使用した（SPR）

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and  understanding the nature of such interactions is a central ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

プローブベースのリアルタイムPCRは、マイクロRNAの定量的測定のためのアプローチ

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

可変角度落射蛍光顕微鏡を用いて植物細胞表面ダイナミクスのリアルタイムイメージング

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

ライブ細胞におけるコンソジショナルフレットバイオセンサーを用いたオーロラキナーゼ活性化のリアルタイムモニタリング

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

Wide-Field, Real-Time Imaging of Local and Systemic Wound Signals in Arabidopsis

シロイヌナズナにおける局所および全身創傷信号の広視野、リアルタイムイメージング

Plants respond to mechanical stresses such as wounding and herbivory by inducing defense responses both in the damaged and in the distal undamaged parts. ...