Name: a genetic screen to isolate toxoplasma gondii host-cell egress mutants
Uploaded: 2012-02-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل علماء الرابطة الأمريكية 0635480N القلب منح التنمية والمعاهد الوطنية للصحة منحة بحثية AI081220. وتدعم الهيئة من قبل العين فرسان منحة مؤسسة أبحاث.

نظرة عامة وتقدم البروتوكولات لتحديد أول جرعة من المغير مما أدى إلى مقتل 70٪ من الطفيليات (بروتوكول 1). ويرد الإجراء التالي لإثراء المسوخ الخروج الناجم عن طفيلي من تجمع mutagenized (بروتوكول 2، الشكل 2). ويعقب ذلك وضع بروتوكول لاختبار حدوث ط?...

<ol>
	<li>Carruthers, V. B., Moreno, S. N., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+and+acetaldehyde+elevate+intracellular+[Ca2+]+and+stimulate+microneme+discharge+in+Toxoplasma+gondii.">Ethanol and acetaldehyde elevate intracellular [Ca2+] and stimulate microneme discharge in Toxoplasma gondii.</a> Biochem. J. 342 (Pt 2), 379-386 (1999).</li><li>Moudy, R., Manning, T. J., Beckers, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+loss+of+cytoplasmic+potassium+upon+host+cell+breakdown+triggers+egress+of+Toxoplasma+gondii.">The loss of cytoplasmic potassium upon host cell breakdown triggers egress of Toxoplasma gondii.</a> J. Biol. Chem. 276 (44), 41492-41501 (2001).</li><li>Silverman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+activation+of+the+Toxoplasma+gondii+nucleoside+triphosphate+hydrolase+leads+to+depletion+of+host+cell+ATP+levels+and+rapid+exit+of+intracellular+parasites+from+infected+cells.">Induced activation of the Toxoplasma gondii nucleoside triphosphate hydrolase leads to depletion of host cell ATP levels and rapid exit of intracellular parasites from infected cells.</a> J. Biol. Chem. 273 (20), 12352-12359 (1998).</li><li>Stommel, E. W., Ely, K. H., Schwartzman, J. D., Kasper, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii:+dithiol-induced+Ca2++flux+causes+egress+of+parasites+from+the+parasitophorous+vacuole.">Toxoplasma gondii: dithiol-induced Ca2+ flux causes egress of parasites from the parasitophorous vacuole.</a> Exp. Parasitol. 87 (2), 88-97 (1997).</li><li>Fruth, I. A., Arrizabalaga, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii:+induction+of+egress+by+the+potassium+ionophore+nigericin.">Toxoplasma gondii: induction of egress by the potassium ionophore nigericin.</a> Int. J. Parasitol. 37 (14), 1559-1567 (2007).</li><li>Endo, T., Sethi, K. K., Piekarski, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii:+calcium+ionophore+A23187-mediated+exit+of+trophozoites+from+infected+murine+macrophages.">Toxoplasma gondii: calcium ionophore A23187-mediated exit of trophozoites from infected murine macrophages.</a> Exp. Parasitol. 53 (2), 179-188 (1982).</li><li>Hoff, E. F., Carruthers, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+Toxoplasma+egress+the+first+step+in+invasion.">Is Toxoplasma egress the first step in invasion.</a> Trends Parasitol. 18 (6), 251-255 (2002).</li><li>Wetzel, D. M., Chen, L. A., Ruiz, F. A., Moreno, S. N., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-mediated+protein+secretion+potentiates+motility+in+Toxoplasma+gondii.">Calcium-mediated protein secretion potentiates motility in Toxoplasma gondii.</a> J. Cell. Sci. 117 (Pt 24), 5739-5748 (2004).</li><li>Lourido, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+protein+kinase+1+is+an+essential+regulator+of+exocytosis+in+Toxoplasma.">Calcium-dependent protein kinase 1 is an essential regulator of exocytosis in Toxoplasma.</a> Nature. 465 (7296), 359-362 (2010).</li><li>Arrizabalaga, G., Ruiz, F., Moreno, S., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionophore-resistant+mutant+of+Toxoplasma+gondii+reveals+involvement+of+a+sodium/hydrogen+exchanger+in+calcium+regulation.">Ionophore-resistant mutant of Toxoplasma gondii reveals involvement of a sodium/hydrogen exchanger in calcium regulation.</a> J. Cell. Biol. 165 (5), 653-662 (2004).</li><li>Black, M. W., Arrizabalaga, G., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionophore-resistant+mutants+of+Toxoplasma+gondii+reveal+host+cell+permeabilization+as+an+early+event+in+egress.">Ionophore-resistant mutants of Toxoplasma gondii reveal host cell permeabilization as an early event in egress.</a> Mol. Cell. Biol. 20 (24), 9399-9408 (2000).</li><li>Chandramohanadas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apicomplexan+Parasites+Co-Opt+Host+Calpains+to+Facilitate+Their+Escape+from+Infected+Cells.">Apicomplexan Parasites Co-Opt Host Calpains to Facilitate Their Escape from Infected Cells.</a> Science. , (2009).</li><li>Eidell, K. P., Burke, T., Gubbels, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+screen+to+dissect+Toxoplasma+gondii+egress.">Development of a screen to dissect Toxoplasma gondii egress.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 171 (2), 97-103 (2010).</li><li>Pfefferkorn, E. R., Pfefferkorn, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii:+isolation+and+preliminary+characterization+of+temperature-sensitive+mutants.">Toxoplasma gondii: isolation and preliminary characterization of temperature-sensitive mutants.</a> Exp. Parasitol. 39 (3), 365-376 (1976).</li><li>Pfefferkorn, E. R., Schwartzman, J. D., Kasper, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii:+use+of+mutants+to+study+the+host-parasite+relationship.">Toxoplasma gondii: use of mutants to study the host-parasite relationship.</a> Ciba. Found. Symp. 99, 74-91 (1983).</li><li>Striepen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+complementation+in+apicomplexan+parasites.">Genetic complementation in apicomplexan parasites.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99 (9), 6304-6309 (2002).</li><li>White, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+rescue+of+a+Toxoplasma+gondii+conditional+cell+cycle+mutant.">Genetic rescue of a Toxoplasma gondii conditional cell cycle mutant.</a> Mol. Microbiol. 55 (4), 1060-1071 (2005).</li><li>Gubbels, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+Genetic+Analysis+of+the+Apicomplexan+Cell+Division+Cycle+in+Toxoplasma+gondii.">Forward Genetic Analysis of the Apicomplexan Cell Division Cycle in Toxoplasma gondii.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e36-e36 (2008).</li><li>Carruthers, V. B., Hakansson, S., Giddings, O. K., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+uses+sulfated+proteoglycans+for+substrate+and+host+cell+attachment.">Toxoplasma gondii uses sulfated proteoglycans for substrate and host cell attachment.</a> Infect. Immun. 68 (7), 4005-4011 (2000).</li><li>Camps, M., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii:+selective+killing+of+extracellular+parasites+by+oxidation+using+pyrrolidine+dithiocarbamate.">Toxoplasma gondii: selective killing of extracellular parasites by oxidation using pyrrolidine dithiocarbamate.</a> Exp. Parasitol. 98 (4), 206-214 (2001).</li><li>Roos, D. S., Donald, R. G., Morrissette, N. S., Moulton, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+tools+for+genetic+dissection+of+the+protozoan+parasite+Toxoplasma+gondii.">Molecular tools for genetic dissection of the protozoan parasite Toxoplasma gondii.</a> Methods Cell Biol. 45, 27-63 (1994).</li><li>Gubbels, M. J., Li, C., Striepen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+growth+assay+for+Toxoplasma+gondii+using+yellow+fluorescent+protein.">High-throughput growth assay for Toxoplasma gondii using yellow fluorescent protein.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 47 (1), 309-316 (2003).</li><li>Carey, K. L., Westwood, N. J., Mitchison, T. J., Ward, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small-molecule+approach+to+studying+invasive+mechanisms+of+Toxoplasma+gondii.">A small-molecule approach to studying invasive mechanisms of Toxoplasma gondii.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101 (19), 7433-7438 (2004).</li><li>Kafsack, B. F., Carruthers, V. B., Pineda, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+modeling+of+Toxoplasma+gondii+invasion.">Kinetic modeling of Toxoplasma gondii invasion.</a> J. Theor. Biol. 249 (4), 817-825 (2007).</li><li>Hanash, S. M., Boehnke, M., Chu, E. H., Neel, J. V., Kuick, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonrandom+distribution+of+structural+mutants+in+ethylnitrosourea-treated+cultured+human+lymphoblastoid+cells.">Nonrandom distribution of structural mutants in ethylnitrosourea-treated cultured human lymphoblastoid cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 85 (1), 165-169 (1988).</li><li>Kafsack, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+membrane+disruption+by+a+perforin-like+protein+facilitates+parasite+exit+from+host+cells.">Rapid membrane disruption by a perforin-like protein facilitates parasite exit from host cells.</a> Science. 323 (5913), 530-533 (2009).</li><li>Lovett, J. L., Marchesini, N., Moreno, S. N., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+microneme+secretion+involves+intracellular+Ca(2+)+release+from+inositol+1,4,5-triphosphate+(IP(3))/ryanodine-sensitive+stores.">Toxoplasma gondii microneme secretion involves intracellular Ca(2+) release from inositol 1,4,5-triphosphate (IP(3))/ryanodine-sensitive stores.</a> J. Biol. Chem. 277 (29), 25870-25876 (2002).</li><li>Nagamune, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abscisic+acid+controls+calcium-dependent+egress+and+development+in+Toxoplasma+gondii.">Abscisic acid controls calcium-dependent egress and development in Toxoplasma gondii.</a> Nature. 451 (7175), 207-210 (2008).</li><li>Tomita, T., Yamada, T., Weiss, L. M., Orlofsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Externally+triggered+egress+is+the+major+fate+of+Toxoplasma+gondii+during+acute+infection.">Externally triggered egress is the major fate of Toxoplasma gondii during acute infection.</a> J. Immunol. 183 (10), 6667-6680 (2009).</li><li>Persson, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+receptor+ligation+or+exposure+to+perforin+trigger+rapid+egress+of+the+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii.">Death receptor ligation or exposure to perforin trigger rapid egress of the intracellular parasite Toxoplasma gondii.</a> J. Immunol. 179 (12), 8357-8365 (2007).</li></ol>

<html> بروتوكول وصف يوفر وسيلة فعالة لعزل المسوخ التوكسوبلازما مع عيب الخروج. لقد نجحنا في عزل المسوخ على طول خطوات مختلفة لمسار الخروج، وبعضها لديها النمط الظاهري غزو المزدوج 13. ويمكن تحديد الآثار المحتملة على الغزو باستخدام ما يسمى الأحمر والأخضر الفحص، ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> ENU </td><td> سيغما الدريخ </td><td> N3385 </td><td> 1 M الأسهم في DMSO، متجر في -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> EMS </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M0880 </td><td> 1 M الأسهم في DMSO، متجر في -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> ديكستران كبرت </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D4911 </td><td></td></tr><tr><td> PDTC </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P8765 </td><td> 100 سهم ملم في برنامج تلفزيوني </td></tr><tr><td> فرق سريعة </td><td> EMD كيماويات </td><td> 65044-93 </td><td></td></tr><tr><td> مرشح حائز </td><td> كول، Parmer </td><td> 540100 </td><td></td></tr><tr><td> 3 ميكرومتر البولي فلتر </td><td> Whatmanشلايشر وSchuell </td><td> 110612 </td><td></td></tr><tr><td> عدادة الكريات </td><td> Hausser العلمية </td><td> 1475 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 حاضنات </td><td> مختلف الشركات المصنعة </td><td></td><td> مرطب، أول أكسيد الكربون بنسبة 5٪ 2، في 37 و 35 و 40 درجة مئوية </td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> مختلف الشركات المصنعة </td><td></td><td> ، مقلوب من الناحية المثالية واسعة المجال مع هدف نفط 63x أو 100X </td></tr></tbody></table> HBSSc (وفقا لوآخرون الأسود 11): <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 98.0 مل هانكس المتوازن محلول ملحي (Hyclone رقم الكتالوج SH30588) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 MgCl 1M ميكرولتر 2 (100 ملي نهاية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 ميكروليتر 1M CaCl 2 (100 ملي نهاية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2.0 مل 1M Hepes درجة الحموضة 7.3 (20 نهاية ملي) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 84 ملغ NaHCO 3 (10 نهاية ملي) </li></ul>

a genetic screen to isolate toxoplasma gondii host-cell egress mutants

، وتلزم على نطاق واسع داخل الخلايا، طفيل بروتوزوا المقوسة الغوندية يسبب مرض الانتهازية في المناعية للخطر المرضى ويسبب تشوهات خلقية على العدوى الخلقية. وتتميز دورة النسخ المتماثل التحللي من ثلاث مراحل: 1. نشط غزو خلية المضيفة الأنوية، 2. تكرار داخل الخلية المضيفة، 3. نشط الخروج من الخلية المضيفة. وعلى نحو متزايد آلية الخروج يجري تقديره بوصفه عملية فريدة من نوعها، تنظيما، والتي لا تزال غير مفهومة على المستوى الجزيئي. وقد اتسمت مسارات الإشارات الكامنة وراء الخروج من خلال استخدام وكلاء الدوائية تعمل على جوانب مختلفة من مسارات 1-5. على هذا النحو، وقد تم تحديد عدة مشغلات مستقلة من الخروج التي تتلاقى كل على اطلاق سراح الكالسيوم داخل الخلايا 2 +، إشارة إلى أن من المهم أيضا للغزو الخلية المضيفة 6-8. وأبلغت هذه الرؤية نهج الجين مرشح الذي أدى إلى identiتقويتها من النباتات مثل الكالسيوم بروتين كيناز تعتمد (CDPK) تشارك في الخروج 9. وبالإضافة إلى ذلك، تم تحقيق اختراقات عديدة مؤخرا في الخروج التفاهم باستخدام (مادة كيميائية) النهج الوراثية 10-12. من الجمع بين وفرة المعلومات الدوائية مع إمكانية الوصول الوراثية المتزايدة للالتوكسوبلازما أنشأنا مؤخرا على شاشة السماح لتخصيب اليورانيوم لالمسوخ طفيلي مع وجود خلل في خروج الخلية المضيفة 13. على الرغم من استخدام الطفرات الكيميائية باستخدام N-إيثيل-N-nitrosourea (ENU) أو إيثيل methanesulfonate (EMS) لعقود من الزمان في دراسة علم الأحياء التوكسوبلازما 11،14،15، إلا في الآونة الأخيرة ورسم الخرائط الوراثية من الطفرات الكامنة وراء الظواهر تصبح روتينية 16 -18. وعلاوة على ذلك، من خلال توليد الحرارة حساسة المسوخ، يمكن تشريح العمليات الأساسية والجينات الكامنة التي تم تحديدها مباشرة. هذه المسوخ تتصرف كما نوع البرية تحت درجة حرارة متساهلة (35 درجة مئوية)، لكنه يفشل في فroliferate في درجة الحرارة تقييدا ​​(40 درجة مئوية) وذلك نتيجة للطفرة في السؤال. نحن هنا لتوضيح طريقة جديدة لعزل الفحص المظهري المسوخ مع النمط الظاهري الخروج حساسة للحرارة 13. والتحدي الذي يواجه شاشات الخروج هو الفصل egressed من غير egressed طفيليات، وهي مسألة معقدة بسبب بسرعة إعادة غزو والحساسية العامة للطفيليات إلى الخلايا المضيفة. واستند شاشة الخروج المحددة سابقا على سلسلة معقدة من الخطوات للفصل بين الخلايا biotinylation من طفيليات خارج الخلية 11. هذا الأسلوب أيضا لم تولد المسوخ الشرطي مما أدى إلى ضعف الظواهر. الطريقة الموضحة هنا يتغلب على تعلقه الشديد من egressing الطفيليات بما في ذلك من قبل منافس غليكان، كبريتات ديكستران (DS)، الذي يمنع الطفيليات من الالتصاق إلى الخلية المضيفة 19. وعلاوة على ذلك، يتعرضون للقتل على وجه التحديد طفيليات خارج الخلية قبالة عن طريق dithiocarbamate بيروليدين (PDTC)، الذي يترك الطفيليات داخل الخلايادون أن يصاب بأذى 20. لذلك، مع شاشة المظهري جديدة لعزل تحديدا المسوخ طفيلي مع عيوب في الخروج الناجم، ويمكن الآن قوة علم الوراثة يمكن نشرها بالكامل لكشف الآليات الجزيئية الكامنة وراء خروج الخلية المضيفة.

Watch this Scientific Journal Video about A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants at JoVE.com

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

تقدم علم الوراثة هو وسيلة قوية لكشف المستوى الجزيئي لكيفية<em&gt; التوكسوبلازما</em&gt; المخارج من الخلية المضيفة لها. وتقدم بروتوكولات mutagenize كيميائيا الطفيليات، وإثراء لالمسوخ مع العيوب التي يسببها في الخروج، والتحقق من صحة النمط الظاهري من المسوخ المستنسخة.

شاشة الوراثية لعزل التوكسوبلازما جوندياي المسوخ الخروج المضيف الخلية

The widespread, obligate intracellular, protozoan parasite Toxoplasma gondii causes opportunistic disease in immuno-compromised patients and causes birth ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

الحصول على عالي النقاء المقوسة الغوندية البيضات من قبل التدرج كلوريد السيزيوم متقطع

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan pathogen that commonly infects humans. It is a well characterized apicomplexan associated with ...

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

التوكسوبلازما جدار الكيس الغوندية تشكيل المنشط تقوم البلاعم في نخاع العظام والمستمدة من الشروط المتباطئة

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear الفئران مع الخصوصيات المحددة مسبقا ضد مستقبلات الخلايا T المقوسة الغوندية الحصول عليها عن طريق SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

باستخدام الفحص ميكروأري عموم الفيروسي (Virochip) إلى الشاشة العينات السريرية لمسببات الأمراض الفيروسية

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

وهناك طريقة بسيطة وفعالة لعزل تقوم البلاعم من الثقافات الابتدائية المختلطة من خلايا الكبد الكبار

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

إرساء ثقافة السائل المغطاة من مجرى الهواء الإنسان المستقطب طلائي Calu-3 خلايا لدراسة استجابة الخلية المضيفة لمسببات الأمراض التنفسية<em&gt; في المختبر</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Genetic Manipulation in &Delta;ku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

Genetic Manipulation in ÃƒÅ½Ã¢â‚¬Âku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

التلاعب الجيني في<em&gt; Δku80</em&gt; سلالات لتحليل الجينوم الوظيفي لل<em&gt; التوكسوبلازما جوندياي</em

Targeted genetic manipulation using homologous recombination is the method of choice for functional genomic analysis to obtain a detailed view of gene ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

باستخدام الكيمياء فوق لقياس تأثير عدوى فيروسية في خلية المضيف RNA التجميعي

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³-Dependent Cell Autonomous Immunity

الى الامام علم الوراثة شاشات طريق الضامة لتحديد<em&gt; التوكسوبلازما</em&gt; الجينات هامة الحصانة الذاتية للمقاومة إلى الإنترفيرون γ التي تعتمد على خلية

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...

Use of the Soft-agar Overlay Technique to Screen for Bacterially Produced Inhibitory Compounds

استخدام تقنية تراكب لينة أجار للكشف عن المركبات المثبطة إنتاج البكتريا

The soft-agar overlay technique was originally developed over 70 years ago and has been widely used in several areas of microbiological research, ...