Name: cholesterol efflux assay
Uploaded: 2012-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cholesterol Efflux Assay at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من الوطنية للصحة ومجلس البحوث الطبية في أستراليا (NHMRC) (526615 و 545906)، وجزئيا من خلال برنامج منظمة المؤتمر الاسلامي وحكومة فيكتوريا. DS زميل NHMRC.

1. إعداد [H 3] الكوليسترول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غطاء محرك السيارة دخان، الاستغناء عن المبلغ المطلوب من [3 H] الكولسترول في أنبوب 1،5 microfuge مل (0.5 مطلوب μCi (19 kBq) لكل بشكل جيد لفحص نموذجي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا [3 H] معلق?...

<ol>
	<li>Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+in+health+and+disease.">Cholesterol in health and disease.</a> J. Clin. Invest. 110, 583-590 (2002).</li><li>Brown, M. S., Goldstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+feedback:+from+Schoenheimer's+bottle+to+Scap's+MELADL.">Cholesterol feedback: from Schoenheimer's bottle to Scap's MELADL.</a> J. Lipid Res. 50, 15-27 (2009).</li><li>Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+cellular+cholesterol+accumulation:+basic+concepts+and+physiological+implications.">Consequences of cellular cholesterol accumulation: basic concepts and physiological implications.</a> J. Clin. Invest. 110, 905-911 (2002).</li><li>Murphy, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Density+Lipoprotein+Reduces+the+Human+Monocyte+Inflammatory+Response.">High-Density Lipoprotein Reduces the Human Monocyte Inflammatory Response.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 2071-2077 (2008).</li><li>Mujawar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Immunodeficiency+Virus+Impairs+Reverse+Cholesterol+Transport+from+Macrophages.">Human Immunodeficiency Virus Impairs Reverse Cholesterol Transport from Macrophages.</a> PLoS Biology. 4, 365-36 (2006).</li><li>Patel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+High-Density+Lipoprotein+Increases+Plasma+High-Density+Lipoprotein+Anti-Inflammatory+Properties+and+Cholesterol+Efflux+Capacity+in+Patients+With+Type+2+Diabetes.">Reconstituted High-Density Lipoprotein Increases Plasma High-Density Lipoprotein Anti-Inflammatory Properties and Cholesterol Efflux Capacity in Patients With Type 2 Diabetes.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 53, 962-971 (2009).</li><li>Shaw, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infusion+of+reconstituted+high-density+lipoprotein+leads+to+acute+changes+in+human+atherosclerotic+plaque.">Infusion of reconstituted high-density lipoprotein leads to acute changes in human atherosclerotic plaque.</a> Circ. Res. 103, 1084-1091 (2008).</li><li>Kekulawala, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+freezing+on+high-density+lipoprotein+functionality.">Impact of freezing on high-density lipoprotein functionality.</a> Anal. Biochem. 379, 75-77 (2008).</li><li>D'Souza, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure/Function+Relationships+of+Apolipoprotein+A-I+Mimetic+Peptides:+Implications+for+Antiatherogenic+Activities+of+High-Density+Lipoprotein.">Structure/Function Relationships of Apolipoprotein A-I Mimetic Peptides: Implications for Antiatherogenic Activities of High-Density Lipoprotein.</a> Circ. Res. 107, 217-227 (2010).</li><li>Tchoua, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cholesteryl+ester+transfer+protein+overexpression+and+inhibition+on+reverse+cholesterol+transport.">The effect of cholesteryl ester transfer protein overexpression and inhibition on reverse cholesterol transport.</a> Cardiovasc Res. 77, 732-739 (2008).</li><li>Mukhamedova, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+apolipoprotein+A-I-dependent+cholesterol+efflux+elevates+cholesterol+export+from+macrophages+in+vivo.">Enhancing apolipoprotein A-I-dependent cholesterol efflux elevates cholesterol export from macrophages in vivo.</a> J. Lipid Res. 49, 2312-2322 (2008).</li><li>Mukhamedova, N., Fu, Y., Bukrinsky, M., Remaley, A. T., Sviridov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Different+Regions+of+ATP-Binding+Cassette+Transporter+A1+in+Cholesterol+Efflux.">The Role of Different Regions of ATP-Binding Cassette Transporter A1 in Cholesterol Efflux.</a> Biochemistry. 46, 9388-9398 (2007).</li><li>Sviridov, D., Fidge, N., Beaumier-Gallon, G., Fielding, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+A-I+stimulates+the+transport+of+intracellular+cholesterol+to+cell-surface+cholesterol-rich+domains+(caveolae.">Apolipoprotein A-I stimulates the transport of intracellular cholesterol to cell-surface cholesterol-rich domains (caveolae.</a> Biochem. J. 358, 79-86 (2001).</li><li>Smyth, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+harlequin+ichthyosis+delineates+a+key+role+for+abca12+in+lipid+homeostasis.">A mouse model of harlequin ichthyosis delineates a key role for abca12 in lipid homeostasis.</a> PLoS Genet. 4, e1000192-e1000192 (2008).</li><li>Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Caveolin-1+Enhances+Cholesterol+Efflux+in+Hepatic+Cells.">Expression of Caveolin-1 Enhances Cholesterol Efflux in Hepatic Cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 14140-14146 (2004).</li><li>Calkin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+High-Density+Lipoprotein+Attenuates+Platelet+Function+in+Individuals+With+Type+2+Diabetes+Mellitus+by+Promoting+Cholesterol+Efflux.">Reconstituted High-Density Lipoprotein Attenuates Platelet Function in Individuals With Type 2 Diabetes Mellitus by Promoting Cholesterol Efflux.</a> Circulation. 120, 2095-2104 (2009).</li></ol>

تم تصميم الطريقة الموضحة لقياس نسبة الكوليسترول هروب رأس المال لقياس حركة الكولسترول من الخلايا الى متقبل الكوليسترول خارج الخلية. هناك اعتبارات عدة حاسم في فهم هذه المنهجية. وضع البطاقات التعريفية وموازنة <p class="jove_content" style=";text-...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكواشف \ خلايا </td><td> هيلا </td><td> THP-1 </td><td> RAW </td><td> HUVEC </td><td> BHK-21 </td><td> HFF </td></tr><tr><td> كاملة وسائل الإعلام </td><td colspan="3"> RPMI - FCS 10٪ - 1٪ L-الجلوتامين - بكتيريا القلم 0.2٪ </td><td> M199 - FCS 5٪ - 1٪ L-الجلوتامين - بكتيريا القلم 1٪ - HEPES 2٪ (1M) - 7٪ نمو الخلايا البطانية الملحق (رسم القلب) </td><td colspan="2"> DMEM - FCS 10٪ - 1٪ L-الجلوتامين - بكتيريا القلم 0.2٪ </td></tr><tr><td> حرية الإعلام في المصل </td><td colspan="3"> RPMI - 1٪ L-الجلوتامين - بكتيريا القلم 0.2٪ </td><td> M199 - 1٪ L-الجلوتامين - بكتيريا القلم 1٪ - HEPES 2٪ (1M) - الخلايا البطانية 7٪ النموالملحق الرابع (رسم القلب) </td><td colspan="2"> DMEM - 1٪ L-الجلوتامين - بكتيريا القلم 0.2٪ </td></tr><tr><td> مرور الطريقة </td><td> 1 × التربسين </td><td> تعليق </td><td> كشط </td><td colspan="3"> 1 × التربسين </td></tr><tr><td> نسبة مرور </td><td> 03:10 </td><td> 01:03 </td><td></td><td> 01:20 </td><td> 01:03 </td><td> 01:03 </td></tr><tr><td> تنشيط الخلية (اختياري) </td><td></td><td colspan="5"> TO-901317 - LXR ناهض - اضرب النهائي. 4 ميكرومتر </td></tr><tr><td> الكواشف الأخرى </td><td></td><td> phorbol 12-13-myristate خلات (PMA) - خلية التمايز - اضرب النهائي. 0.1μg/ml </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cholesterol efflux assay

يجب الحفاظ على نسبة الكولسترول من الخلايا في حدود ضيقة جدا، وكثيرا جدا أو قليلا جدا نسبة الكولسترول في نتائج خلية في اختلال الأغشية الخلوية، وموت الخلايا المبرمج ونخر 1. يمكن للخلايا الكولسترول مصدر من تركيب الخلايا والبروتينات الدهنية من البلازما، وعلى حد سواء مصادر كافية لتلبية متطلبات تماما الخلايا للكولسترول. وينظم بإحكام عمليات تركيب الكولسترول وامتصاص وأوجه القصور من الكوليسترول هي 2 نادر. الكولسترول الزائد هو أكثر 3 المشتركة المشكلة. مع استثناء من خلايا الكبد، وبعض الخلايا درجة قشرة الكظر، والخلايا غير قادرة على تتحلل الكولسترول. خلايا ديك خياران للحد من محتواها الكولسترول: لتحويل الكولسترول إلى استرات الكوليسترول، وهو خيار مع قدرة محدودة على الحمولة الزائدة الخلايا مع استرات الكوليسترول أيضا السامة، وهروب رأس المال الكولسترول، وهو خيار مع قدرة غير محدودة على الأرجح. هروب رأس المال الكولسترول هي المواصفاتIFIC العملية التي يتم تنظيمها من قبل عدد من شركات النقل داخل الخلايا، مثل ملزم للاعبي التنس المحترفين كاسيت نقل البروتينات A1 ​​(ABCA1) وG1 (ABCG1) وB1 زبال نوع المستقبلة. ومتقبل طبيعي من الكوليسترول في بلازما عالية الكثافة (HDL) ومنظمة العفو الدولية ئي. تم تصميم فحص الكولسترول هروب رأس المال إلى quantitate معدل هروب رأس المال الكولسترول من الخلايا مثقف. فهو يقيس قدرة الخلايا للحفاظ على هروب رأس المال الكوليسترول و / أو قدرة على قبول يقبلون بلازما الكولسترول أطلق سراحهم من الخلايا. الفحص يتكون من الخطوات التالية. الخطوة 1: وصفها الكولسترول الخلوي من خلال إضافة إلى مصل الكوليسترول المسمى المحتوية على المديين المتوسط ​​واحتضان مع الخلايا لمدة 24-48 ساعة. ويمكن الجمع بين هذه الخطوة مع التحميل من الخلايا التي تحتوي على الكوليسترول في الدم. الخطوة 2: حضانة الخلايا في مصل الدم خالية من المتوسط ​​للتوازن الكوليسترول باللقاء بين جميع أحواض الكولسترول بين الخلايا. ويمكن الجمع بين هذه المرحلة مع تفعيل الفصل الخلويةolesterol النقل. الخطوة 3: حضانة الخلايا مع متقبل خارج الخلية وتحديد الكميات من حركة الكولسترول من الخلايا التي تحمل علامات للمتقبل. إذا تم استخدام السلائف الكولسترول لتسمية الكولسترول تصنيعه حديثا، وهي الخطوة الرابعة، وتنقية من الكوليسترول، قد يكون مطلوبا. الفحص توفر المعلومات التالية: (ط) كيف يمكن لعلاج خاص (طفرة، ضربة إلى أسفل، overexpression 1 أو علاج أ) يؤثر على قدرة الخلية إلى هروب رأس المال ونسبة الكولسترول (II) كيفية قدرة يقبلون البلازما لقبول نسبة الكولسترول متضرر من المرض أو العلاج. وغالبا ما تستخدم هذه الطريقة في سياق البحوث القلب والأوعية الدموية، والاضطرابات الأيضية والاعصاب، والأمراض المعدية والصحة الإنجابية.

Watch this Scientific Journal Video about Cholesterol Efflux Assay at JoVE.com

Cholesterol Efflux Assay

تم تصميم فحص الكولسترول لquantitate معدل هروب رأس المال الكولسترول من الخلايا مثقف وقدرة يقبلون البلازما لقبول نسبة الكولسترول أطلق سراحهم من الخلايا. الفحص يتكون من خلايا وصفها مع موازنة، والكولسترول الكولسترول بين تجمعات داخل الخلايا وإطلاق الكوليسترول في الدم إلى متقبل خارج الخلية.

الكولسترول الدفق الفحص

Cholesterol content of cells must be maintained within the very tight limits, too much or too little cholesterol in a cell results in disruption of ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Medicine

Fundamentals

Chemistry of Life

SCIENTISTS IN ACTION

Experimental Metastasis Assay

الفحص التجريبي الإنبثاث

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients.  To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established ...

In Vivo Canine Muscle Function Assay

In Vivo Canine Muscle Function Assay

فيفو الناب في العضلات وظيفة الفحص

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

نموذج الفأر من القرنية الفحص جيب للدراسة الأوعية الدموية

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

Spheroid Assay to Measure TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Invasion

كروي الفحص لقياس TGF - β بفعل الغزو

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

على<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; الفحص لفحص الدم نفاذية سفينة

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; CAM-مقايسة باعتبارها Xenograftmodel عن الورم اللحمي

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay

Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay

محاكاة البنكرياس المرونة العصبية:<em&gt; في المختبر</em&gt; ثنائي الخلايا العصبية اللدونة الفحص

Neuroplasticity is an inherent feature of the enteric nervous system and gastrointestinal (GI) innervation under pathological conditions. However, the ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles

الآثار المتفاوتة للأدوية الخافضة للدهون في تحوير مورفولوجيا جزيئات الكوليسترول

Treatment of dyslipidemia patients with lipid-lowering drugs leads to a significant reduction in low-density lipoproteins (LDL) level and a low to ...

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled Cholesterol Efflux Assay

والرزن Efflux الفائق المسمى نيتروبينزوكساديازولي نسبة الكولسترول في الدم

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in ...