Name: cholesterol efflux assay
Uploaded: 2012-03-06T13:00:00
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この作品は、ビクトリア州政府のOIS​​プログラムによる国民健康、オーストラリアの医学研究評議会（NHMRC）（526615と545906）から、一部の補助金によって支えられている。 DSはNHMRCの仲間です。

1。 [3 H] -コレステロールの調製<ol><li>ドラフトでは、1.5ミリリットル遠心チューブ（0.5ウェル当たりμCiの（19放射能）が典型的なアッセイのために必要とされる）に[3 H]コレステロールの必要量を分注する。 </li><li> [3 H] -コレステロールをトルエン中に懸濁されている場合は、同様に1μCi（37放射能/μL。ボルテックスし、ミックスの最終濃度の100％エタノールのN2ガ?...

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	<li>Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+in+health+and+disease.">Cholesterol in health and disease.</a> J. Clin. Invest. 110, 583-590 (2002).</li><li>Brown, M. S., Goldstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+feedback:+from+Schoenheimer's+bottle+to+Scap's+MELADL.">Cholesterol feedback: from Schoenheimer's bottle to Scap's MELADL.</a> J. Lipid Res. 50, 15-27 (2009).</li><li>Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+cellular+cholesterol+accumulation:+basic+concepts+and+physiological+implications.">Consequences of cellular cholesterol accumulation: basic concepts and physiological implications.</a> J. Clin. Invest. 110, 905-911 (2002).</li><li>Murphy, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Density+Lipoprotein+Reduces+the+Human+Monocyte+Inflammatory+Response.">High-Density Lipoprotein Reduces the Human Monocyte Inflammatory Response.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 2071-2077 (2008).</li><li>Mujawar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Immunodeficiency+Virus+Impairs+Reverse+Cholesterol+Transport+from+Macrophages.">Human Immunodeficiency Virus Impairs Reverse Cholesterol Transport from Macrophages.</a> PLoS Biology. 4, 365-36 (2006).</li><li>Patel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+High-Density+Lipoprotein+Increases+Plasma+High-Density+Lipoprotein+Anti-Inflammatory+Properties+and+Cholesterol+Efflux+Capacity+in+Patients+With+Type+2+Diabetes.">Reconstituted High-Density Lipoprotein Increases Plasma High-Density Lipoprotein Anti-Inflammatory Properties and Cholesterol Efflux Capacity in Patients With Type 2 Diabetes.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 53, 962-971 (2009).</li><li>Shaw, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infusion+of+reconstituted+high-density+lipoprotein+leads+to+acute+changes+in+human+atherosclerotic+plaque.">Infusion of reconstituted high-density lipoprotein leads to acute changes in human atherosclerotic plaque.</a> Circ. Res. 103, 1084-1091 (2008).</li><li>Kekulawala, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+freezing+on+high-density+lipoprotein+functionality.">Impact of freezing on high-density lipoprotein functionality.</a> Anal. Biochem. 379, 75-77 (2008).</li><li>D'Souza, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure/Function+Relationships+of+Apolipoprotein+A-I+Mimetic+Peptides:+Implications+for+Antiatherogenic+Activities+of+High-Density+Lipoprotein.">Structure/Function Relationships of Apolipoprotein A-I Mimetic Peptides: Implications for Antiatherogenic Activities of High-Density Lipoprotein.</a> Circ. Res. 107, 217-227 (2010).</li><li>Tchoua, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cholesteryl+ester+transfer+protein+overexpression+and+inhibition+on+reverse+cholesterol+transport.">The effect of cholesteryl ester transfer protein overexpression and inhibition on reverse cholesterol transport.</a> Cardiovasc Res. 77, 732-739 (2008).</li><li>Mukhamedova, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+apolipoprotein+A-I-dependent+cholesterol+efflux+elevates+cholesterol+export+from+macrophages+in+vivo.">Enhancing apolipoprotein A-I-dependent cholesterol efflux elevates cholesterol export from macrophages in vivo.</a> J. Lipid Res. 49, 2312-2322 (2008).</li><li>Mukhamedova, N., Fu, Y., Bukrinsky, M., Remaley, A. T., Sviridov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Different+Regions+of+ATP-Binding+Cassette+Transporter+A1+in+Cholesterol+Efflux.">The Role of Different Regions of ATP-Binding Cassette Transporter A1 in Cholesterol Efflux.</a> Biochemistry. 46, 9388-9398 (2007).</li><li>Sviridov, D., Fidge, N., Beaumier-Gallon, G., Fielding, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+A-I+stimulates+the+transport+of+intracellular+cholesterol+to+cell-surface+cholesterol-rich+domains+(caveolae.">Apolipoprotein A-I stimulates the transport of intracellular cholesterol to cell-surface cholesterol-rich domains (caveolae.</a> Biochem. J. 358, 79-86 (2001).</li><li>Smyth, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+harlequin+ichthyosis+delineates+a+key+role+for+abca12+in+lipid+homeostasis.">A mouse model of harlequin ichthyosis delineates a key role for abca12 in lipid homeostasis.</a> PLoS Genet. 4, e1000192-e1000192 (2008).</li><li>Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Caveolin-1+Enhances+Cholesterol+Efflux+in+Hepatic+Cells.">Expression of Caveolin-1 Enhances Cholesterol Efflux in Hepatic Cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 14140-14146 (2004).</li><li>Calkin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+High-Density+Lipoprotein+Attenuates+Platelet+Function+in+Individuals+With+Type+2+Diabetes+Mellitus+by+Promoting+Cholesterol+Efflux.">Reconstituted High-Density Lipoprotein Attenuates Platelet Function in Individuals With Type 2 Diabetes Mellitus by Promoting Cholesterol Efflux.</a> Circulation. 120, 2095-2104 (2009).</li></ol>

コレステロール流出を測定するために記載した方法は、細胞外コレステロール受容体への細胞からのコレステロールの動きを測定するために設計されています。この方法論を理解する上で、いくつかの重要な考慮事項があります。 ラベルと平衡記載された方法論で標識されたコレステロールは血清含有血清に追加されます。詳細に調べなかったが、そ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬\セル </td><td> HeLa細胞 </td><td> THP-1 </td><td> RAW </td><td> HUVEC </td><td> BHK-21 </td><td> HFF </td></tr><tr><td> 完全なメディア </td><td colspan="3"> RPMI - 10％FCS - 1％L-グルタミン - 0.2％のペン連鎖球菌</td><td> M199 - 5％FCS - 1％L-グルタミン - 1％ペン連鎖球菌 - 2％HEPES（1M） - 7％内皮細胞増殖サプリメント（ECGS） </td><td colspan="2"> DMEM - 10％FCS - 1％L-グルタミン - 0.2％のペン連鎖球菌</td></tr><tr><td> 無血清培地 </td><td colspan="3"> RPMI - 1％L-グルタミン - 0.2％のペン連鎖球菌</td><td> M199 - 1％L-グルタミン - 1％ペン連鎖球菌 - 2％HEPES（1M） - 7％内皮細胞の成長目のサプリメント（ECGS） </td><td colspan="2"> DMEM - 1％L-グルタミン - 0.2％のペン連鎖球菌</td></tr><tr><td> 通過方法 </td><td> 1×トリプシン</td><td>サスペンション</td><td>落とす</td><td colspan="3"> 1×トリプシン</td></tr><tr><td> 通過率 </td><td>午前3時10分</td><td> 1時03分</td><td></td><td> 1時20分</td><td> 1時03分</td><td> 1時03分</td></tr><tr><td> 細胞活性化（オプション） </td><td></td><td colspan="5"> TO-901317 - LXRアゴニスト - ファイナルの濃4μM </td></tr><tr><td> その他の試薬 </td><td></td><td> ホルボール12 -ミリステート13 -アセテート（PMA） - 細胞分化 - ファイナルの濃0.1μg/ml </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cholesterol efflux assay

細胞のコレステロール含有量は、細胞膜の破壊、アポトーシスとネクローシス1のセルの結果に多すぎる、または少なすぎるコレステロール、非常にタイトな限界内に維持する必要があります。細胞は細胞内合成から、血漿リポタンパク質からソースコレステロール、両方のソースは完全にコレステロールの細胞の要件を満たすのに十分であることができます。コレステロール合成と取り込みのプロセスが厳密に制御し、コレステロールの欠点は、2稀であるされています。過剰なコレステロールは、より一般的な問題は3です。肝細胞の例外を除いて、ある程度副腎皮質細胞に、細胞はコレステロールを低下させることができません。細胞は、そのコレステロール含有量を削減するための2つのオプションがあります。も有毒であるコレステリルエステルで細胞をオーバーロードとしてコレステリルエステル、限られた容量を持つオプションにコレステロール値を変換し、コレステロール流出、潜在的に無限の容量を持つオプションに。コレステロール流出は仕様です。このようなATP結合カセットトランスポータータンパク質A1（ABCA1）とG1（ABCG1）とスカベンジャー受容体タイプのB1の細胞内輸送、数によって規制されてIFICプロセス。血漿中のコレステロールの自然な受容体は高密度リポタンパク質（HDL）およびアポリポタンパク質AIです。 コレステロール流出のアッセイは、培養細胞からのコレステロール流出の割合を定量化するために設計されています。それはコレステロール流出および/または細胞から放出されるコレステロールを受け入れるようにプラズマ受容体の能力を維持するために、セルの容量を測定します。アッセイは、次の手順で構成されます。ステップ1：血清含有培地に標識コレステロールを添加し、24〜48時間のために細胞とインキュベートすることにより、細胞のコレステロールをラベリング。この手順は、コレステロールの細胞のローディングと組み合わせることができる。ステップ2：すべての細胞内コレステロールプール間で標識されたコレステロールを平衡化するための無血清培地中の細胞のインキュベーション。この段階は、細胞のchの活性化と組み合わせることができるolesterolトランスポーター。ステップ3：細胞外受容体や細胞から受容体への標識コレステロールの動きの定量と細胞のインキュベーション。コレステロールの前駆体は、新たに合成されたコレステロールを標識するために使用された場合、第四ステップは、コレステロールの精製は、必要な場合があります。 特定の治療（突然変異、ノックダウン、過剰発現または治療）が流出コレステロール、および（ii）プラズマアクセプターの容量がコレステロールを受け付ける方法に、セルの容量をどのように影響するか（I）：アッセイは、以下の情報を提供します病気や治療の影響を受けています。このメソッドは、しばしば心血管研究、代謝および神経変性疾患、感染症と生殖疾患のコンテキストで使用されます。

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Cholesterol Efflux Assay

コレステロールアッセイは、培養細胞からのコレステロール流出率と細胞から放出されるコレステロールを受け入れるようにプラズマ受容体の能力を定量化するために設計されています。アッセイは、細胞内プールと細胞外受容体へのコレステロールのリリース間でのコレステロールコレステロール、平衡で細胞を標識で構成されています。

コレステロール流出アッセイ

Cholesterol content of cells must be maintained within the very tight limits, too much or too little cholesterol in a cell results in disruption of ...

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