Name: cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel
Uploaded: 2012-01-11T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر نورمان كروجر لدعمه فنية ممتازة.

1. الجزء 1 : ثقافة hNPCs في PuraMatrix <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقدما للجيل من سقالة مع التركيز PuraMatrix من 0.25 ٪ دون laminin واحد يحتاج إلى إعداد الحلول التالية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير محلول يحتوي على 20 ٪ والسكروز محلول يحتوي على 10 ٪ سكروز المذاب في ا?...

<ol>
	<li>Zhang, S., Gelain, F., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+3D+tissue+cell+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for 3D tissue cell cultures.</a> Semin. Cancer. Biol. 15, 413-420 (2005).</li><li>Gelain, F., Horii, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+scaffolds+for+3-d+tissue+cell+cultures+and+regenerative+medicine.">Designer self-assembling peptide scaffolds for 3-d tissue cell cultures and regenerative medicine.</a> Macromol. Biosci. 7, 544-551 (2007).</li><li>Blow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+building+a+better+matrix.">Cell Culture: building a better matrix.</a> Nature. Methods. 6 (8), 619-622 (2009).</li><li>Hauser, C. A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+biological+materials.">Designer self-assembling peptide nanofiber biological materials.</a> Chem. Soc. Rev. 39, 2780-2790 (2010).</li><li>Teng, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+mediated+by+a+unique+polymer+scaffold+seeded+with+neural+stem+cells.">Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99, 3024-3029 (2002).</li><li>Silva, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+differentiation+of+neural+progenitor+cells+by+high-epitope+density+nanofibers.">Selective differentiation of neural progenitor cells by high-epitope density nanofibers.</a> Science. 303, 1352-1355 (2004).</li><li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS. ONE. 1, e119-e119 (2006).</li><li>Taraballi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycine-spacers+influence+functional+motifs+exposure+and+self-assembling+propensity+of+functionalized+substrates+tailored+for+neural+stem+cell+cultures.">Glycine-spacers influence functional motifs exposure and self-assembling propensity of functionalized substrates tailored for neural stem cell cultures.</a> Front Neuroengineering. 3, 1-1 (2010).</li><li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane.">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 3334-3338 (1993).</li><li>Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+oligopeptide+matrices+support+mammalian+cell+attachment.">Self-complementary oligopeptide matrices support mammalian cell attachment.</a> Biomaterials. 16, 1385-1393 (1995).</li><li>Horii, A., Wang, X., Gelain, F., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+significantly+enhance+osteoblast+proliferation,+differentiation+and+3-D+migration.">Biological designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds significantly enhance osteoblast proliferation, differentiation and 3-D migration.</a> PLoS. ONE. 2, e190-e190 (2007).</li><li>Thonhoff, J. R., Lou, D. I., Jordan, P. M., Zhao, X., Wu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compatibility+of+human+fetal+neural+stem+cells+with+hydrogel+biomaterials+in+vitro.">Compatibility of human fetal neural stem cells with hydrogel biomaterials in vitro.</a> Brain. Res. 1187, 42-51 (2008).</li><li>Ortinau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+3D-scaffold+formation+on+differentiation+and+survival+in+human+neural+progenitor+cells.">Effect of 3D-scaffold formation on differentiation and survival in human neural progenitor cells.</a> Biomed. Eng. Online. 9, 70-70 (2010).</li><li>Abu-Yousif, A. O., Rizvi, I., Evans, C. L., Celli, J. P., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PuraMatrix+Encapsulation+of+Cancer+Cells.">PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells.</a> J. Vis. Exp. (34), e1692-e1692 (2009).</li><li>Morgan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+neurons+derived+from+human+neural+progenitor+cells+by+veratridine.">Protection of neurons derived from human neural progenitor cells by veratridine.</a> Neuroreport. 20, 1225-1229 (2009).</li><li>Giese, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+and+the+effect+of+oxygen+during+proliferation+and+differentiation+of+human+neural+progenitor+cells.">Erythropoietin and the effect of oxygen during proliferation and differentiation of human neural progenitor cells.</a> BMC. Cell Biol. 11, 94-94 (2010).</li><li>Schm&#246;le, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+indolylmaleimide+acts+as+GSK-3beta+inhibitor+in+human+neural+progenitor+cells.">Novel indolylmaleimide acts as GSK-3beta inhibitor in human neural progenitor cells.</a> Bioorg. Med. Chem. 18, 6785-6795 (2010).</li><li>PuraMatrix, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+Hydrogel.">Peptide Hydrogel.</a> Guidelines for Use. Catalog No 354250, (2006).</li></ol>

استخدام 3D - السقالات يتيح الفرصة لدراسة تطوير أنواع مختلفة من الخلايا في خلية ثقافة الوضع أقرب إلى الوضع في الجسم الحي. ومع ذلك ، بخصوص تحليل تمايز الخلايا العصبية مثلا أو الدراسات الفنية للمرء أن التغلب على بعض العقبات التي تحول دون الحصول على بيانات موثوق بها ل...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> PuraMatrix الببتيد هيدروجيل </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354250 </td><td></td></tr><tr><td> أنا الماوس laminin </td><td> Cultrex </td><td> 400-2009090 </td><td></td></tr><tr><td> السكروز </td><td> سيغما </td><td> S9378 - 1KG </td><td></td></tr><tr><td> الماعز العادي المصل </td><td> داكو </td><td> X0907 </td><td></td></tr><tr><td> تريتون X 100 </td><td> روث </td><td> 3051.3 </td><td></td></tr><tr><td> PBS Dulbecco </td><td> Biochrom AG </td><td> L 1825 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170-088 </td><td> هانكس &quot;محلول الملح المتوازن 1X </td></tr><tr><td&gt; βIII - تويولين الأضداد </td><td> سانتا كروز </td><td> SC - 51670 </td><td> الماوس ، وحيدة النسيلة ، 1:500 </td></tr><tr><td> الكسا فلور 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A 11029 </td><td> الماعز α الماوس ، 1:1000 </td></tr><tr><td> الكسا فلور 568 </td><td> Invitrogen </td><td> A 11031 </td><td> الماعز α الماوس ، 1:1000 </td></tr><tr><td> الكسا فلور 647 </td><td> Invitrogen </td><td> A 21235 </td><td> الماعز α الماوس ، 1:1000 </td></tr><tr><td> Mowiol 4-88 الكاشف </td><td> Calbiochem </td><td> 475904 </td><td></td></tr><tr><td> Dabco </td><td> الدريتش </td><td> D2 ،780 - 2 </td><td> 1،4 - Diazabicyclo [2.2.2] اوكتان 98 ٪ </td></tr><tr><td> خلية مصفاة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 352350 </td><td> 70 ميكرون حجم المسام </td></tr><tr><td> سابونين </td><td> ميرك </td><td> 7695 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين/ EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td> Benzonase 250 U / ميكروليتر </td><td> ميرك </td><td> 1.01654.0001 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين المانع </td><td> سيغما </td><td> T6522 (500 ملغ) </td><td></td></tr><tr><td> 20 ٪ HSA </td><td> Octapharma </td><td> الإنسان الزلال كابي 20 ٪ </td><td></td></tr></tbody></table>

cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel

تأثير السقالات (3D) 3 الأبعاد على تمايز نمو وانتشار الخلايا العصبية وأخيرا هي ذات أهمية كبيرة من أجل العثور على طرق جديدة لعلاج الخلايا وموحدة تستند في اضطرابات عصبية أو أمراض الاعصاب. ومن المتوقع أن هياكل 3D لتوفير بيئة أقرب الى الوضع في الجسم الحي من الثقافات 2D. في سياق الطب التجديدي ، ومزيج من مادة بيولوجية مع السقالات والخلايا الجذعية العصبية السلف يحمل وعدا كبيرا كأداة علاجية. أثبتت أنظمة الثقافة 1-5 محاكاة بيئة ثلاثية الأبعاد للتأثير على انتشار والتفريق في أنواع مختلفة من الساق و السلف الخلايا. هنا ، في تشكيل وfunctionalisation من microenviroment - 3D المهم تحديد بقاء ومصير الخلايا المدمجة. 6-8 تستخدم نحن هنا PuraMatrix 9،10 (RADA16 ، م) ، وهو يستند الببتيد سقالة هيدروجيل ،الذي يوصف بشكل جيد وتستخدم لدراسة تأثير بيئة - 3D على أنواع مختلفة من الخلايا يمكن. 7،11-14 PuraMatrix تكون مخصصة بسهولة وتلفيق الاصطناعية من ألياف النانو يوفر نظام الثقافة 3D - الموثوقية العالية ، والتي بالإضافة xeno خالية. مؤخرا درسنا تأثير تركيز - PM على تشكيل سقالة 13 في هذه الدراسة استخدام تركيزات رئيس مجلس الوزراء كان لها تأثير مباشر على تشكيل هيكل - 3D ، والذي تجلى من خلال مجهر القوة الذرية. وكشف تحليل لاحقة للبقاء على قيد الحياة والتمايز من hNPCs تأثير تركيزات من استخدام رئيس مجلس الوزراء حول مصير الخلايا المدمجة. ومع ذلك ، فإن تحليل بقاء أو تمايز الخلايا العصبية عن طريق تمتلك تقنيات المناعي بعض العقبات. للحصول على بيانات موثوق بها ، وعلى المرء أن تحديد العدد الإجمالي للخلايا داخل مصفوفة للحصول على العدد النسبي للمثل. الخلايا العصبية التي تميزت βIII - تويولين. هذا متطلبات تقنية لتحليل السقالات في جميع الأبعاد 3 - بواسطة المجهر مبائر أو تقنية مشابهة مثل المجاهر مضان قادرا على اتخاذ Z - أكوام من العينة. وعلاوة على هذا النوع من التحليل هو قتا طويلا جدا. نحن هنا شرح طريقة للافراج عن الخلايا من السقالات 3D - لتحليلها لاحقا من قبل مثل التدفق الخلوي. في هذا البروتوكول ومثقف خلايا العصبية السلف (hNPCs) من الخلية ReNcell خط VM (ميليبور الولايات المتحدة) ومتمايزة في 3D - السقالات التي تتكون من PuraMatrix (بعد الظهر) ، أو تستكمل مع PuraMatrix laminin (PML). في أيدينا كانت PM - تركيز 0.25 ٪ المثلى لزراعة الخلايا 13 ، لكن يمكن تطويعها للتركيز على أنواع الخلايا الأخرى (12). ويمكن استخدام الخلايا الافراج عن immunocytochemical الدراسات على سبيل المثال وتحليلها في وقت لاحق من قبل التدفق الخلوي. يسرع هذا التحليل وموإعادة أكثر ، وبقية البيانات التي تم الحصول عليها بناء على قاعدة أوسع ، وتحسين موثوقية البيانات.

Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel at JoVE.com

Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel

نحن هنا وصف استخدام ذاتي تجميع 3 الابعاد سقالة للثقافة الإنسان الخلايا العصبية السلف. نقدم بروتوكولا للافراج عن الخلايا من السقالات التي سيتم تحليلها في وقت لاحق من قبل مثل التدفق الخلوي. قد يكون هذا البروتوكول لتكييف أنواع الخلايا الأخرى لتنفيذ دراسات مفصلة ميكانيكيا.

زراعة خلايا العصبية السلف في هيدروجيل 3 الابعاد الذاتي تجميع الببتيد

The  influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally  neuronal differentiation is of great interest in order to find new ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System

وهناك طريقة لتغليف المسام المبيض والثقافة في نظام 3 تحلل Proteolytically الأبعاد

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that secretes sex hormones and supports oocyte maturation. In vitro  follicle techniques provide ...

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

عضوي النمط I الكولاجين الفحص: A منهاج طيع لتقييم سلوك الخلية في سياق الأبعاد 3-

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

Adaptation of a Haptic Robot in a 3T fMRI

التكيف من الروبوت في الرنين المغناطيسي الوظيفي لمسي 3T

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) provides excellent functional brain imaging via the BOLD signal 1 with advantages including non-ionizing ...

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

الكهربائية الميدانية التي تسيطر عليها هجرة إخراج من الخلايا العصبية السلف في البيئات 2D و 3D

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

سقالات الإبلاغ الذاتي للخلية ثقافة 3 الأبعاد

Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

زراعة خلايا الثدييات عن طريق استخدام المفرد نظام هوائي تفاعلات الاحيائية

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized ...

Improved 3D Hydrogel Cultures of Primary Glial Cells for In Vitro Modelling of Neuroinflammation

Improved 3D Hydrogel Cultures of Primary Glial Cells for In Vitro Modelling of Neuroinflammation

تحسين 3D المائية الثقافات من الخلايا الدبقية الأولية لنمذجة في المختبر نيوروينفلاميشن

In the central nervous system, numerous acute injuries and neurodegenerative disorders, as well as implanted devices or biomaterials engineered to enhance ...

Hyaluronic-Acid Based Hydrogels for 3-Dimensional Culture of Patient-Derived Glioblastoma Cells

حمض الهيالورونيك أساس الهلاميات المائية للثقافة 3-الأبعاد من الخلايا جليوبلاستوما المستمدة من المريض

Glioblastoma (GBM) is the most common, yet most lethal, central nervous system cancer. In recent years, many studies have focused on how the extracellular ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

توليد الظروف البيئية الديناميكية باستخدام جهاز Microfluidic عالي الإنتاجية

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...

Synthesis of Strong Adhesive Hydrogel, Gelatin O-Nitrosobenzaldehyde

تخليق هيدروجيل لاصق قوي ، جيلاتين O-نيتروسوبنزالديهيد

Adhesive materials have become popular biomaterials in the field of biomedical and tissue engineering. In our previous work, we presented a new material - ...