Name: cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel
Uploaded: 2012-01-11T12:00:00
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Gli autori desiderano ringraziare Norman Krüger per il suo eccellente supporto tecnico.

1. Parte 1: Cultura della hNPCs in PuraMatrix <ol><li> In anticipo per la generazione di un ponteggio con una concentrazione PuraMatrix del 0,25% senza laminina si ha la necessità di preparare le seguenti soluzioni </li><li> Preparare una soluzione contenente 20% di saccarosio e una soluzione contenente il 10% di saccarosio disciolto in acqua distillata sterile. </li><li> Per la soluzione 1 mix 120 ml di soluzione di saccarosio al 20% con 120 ml di acqua distillata in una provetta da 1,5 ml. </li><li> Per la soluzion...

<ol>
	<li>Zhang, S., Gelain, F., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+3D+tissue+cell+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for 3D tissue cell cultures.</a> Semin. Cancer. Biol. 15, 413-420 (2005).</li><li>Gelain, F., Horii, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+scaffolds+for+3-d+tissue+cell+cultures+and+regenerative+medicine.">Designer self-assembling peptide scaffolds for 3-d tissue cell cultures and regenerative medicine.</a> Macromol. Biosci. 7, 544-551 (2007).</li><li>Blow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+building+a+better+matrix.">Cell Culture: building a better matrix.</a> Nature. Methods. 6 (8), 619-622 (2009).</li><li>Hauser, C. A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+biological+materials.">Designer self-assembling peptide nanofiber biological materials.</a> Chem. Soc. Rev. 39, 2780-2790 (2010).</li><li>Teng, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+mediated+by+a+unique+polymer+scaffold+seeded+with+neural+stem+cells.">Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99, 3024-3029 (2002).</li><li>Silva, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+differentiation+of+neural+progenitor+cells+by+high-epitope+density+nanofibers.">Selective differentiation of neural progenitor cells by high-epitope density nanofibers.</a> Science. 303, 1352-1355 (2004).</li><li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS. ONE. 1, e119-e119 (2006).</li><li>Taraballi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycine-spacers+influence+functional+motifs+exposure+and+self-assembling+propensity+of+functionalized+substrates+tailored+for+neural+stem+cell+cultures.">Glycine-spacers influence functional motifs exposure and self-assembling propensity of functionalized substrates tailored for neural stem cell cultures.</a> Front Neuroengineering. 3, 1-1 (2010).</li><li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane.">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 3334-3338 (1993).</li><li>Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+oligopeptide+matrices+support+mammalian+cell+attachment.">Self-complementary oligopeptide matrices support mammalian cell attachment.</a> Biomaterials. 16, 1385-1393 (1995).</li><li>Horii, A., Wang, X., Gelain, F., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+significantly+enhance+osteoblast+proliferation,+differentiation+and+3-D+migration.">Biological designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds significantly enhance osteoblast proliferation, differentiation and 3-D migration.</a> PLoS. ONE. 2, e190-e190 (2007).</li><li>Thonhoff, J. R., Lou, D. I., Jordan, P. M., Zhao, X., Wu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compatibility+of+human+fetal+neural+stem+cells+with+hydrogel+biomaterials+in+vitro.">Compatibility of human fetal neural stem cells with hydrogel biomaterials in vitro.</a> Brain. Res. 1187, 42-51 (2008).</li><li>Ortinau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+3D-scaffold+formation+on+differentiation+and+survival+in+human+neural+progenitor+cells.">Effect of 3D-scaffold formation on differentiation and survival in human neural progenitor cells.</a> Biomed. Eng. Online. 9, 70-70 (2010).</li><li>Abu-Yousif, A. O., Rizvi, I., Evans, C. L., Celli, J. 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L&#39;uso del 3D-scaffold offre l&#39;opportunità di studiare lo sviluppo di diversi tipi di cellule in una situazione di coltura cellulare più vicino alla situazione in vivo. Per quanto riguarda invece l&#39;analisi di esempio differenziamento neuronale o studi funzionali si deve superare alcuni ostacoli per ottenere dati affidabili per la quantificazione esempio di tipi di cellule. Qui abbiamo descritto la cultura del hNPCs in idrogel a base di peptidi patibolo PuraMatrix e il c...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> PuraMatrix peptide idrogel </td><td> BD Bioscience </td><td> 354250 </td><td></td></tr><tr><td> I mouse laminina </td><td> Cultrex </td><td> 400-2009090 </td><td></td></tr><tr><td> Saccarosio </td><td> Sigma </td><td> S9378-1KG </td><td></td></tr><tr><td> Siero di capra normale </td><td> Dako </td><td> X0907 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X 100 </td><td> Roth </td><td> 3051,3 </td><td></td></tr><tr><td> PBS Dulbecco </td><td> Biochrom AG </td><td> L 1825 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170-088 </td><td> Sale Hanks &#39;soluzione equilibrata 1X </td></tr><tr><td&gt; ΒIII-tubulina di anticorpi </td><td> Santa Cruz </td><td> Sc-51670 </td><td> Mouse, monoclonale, 1:500 </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A 11029 </td><td> Capra α mouse, 1:1000 </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 568 </td><td> Invitrogen </td><td> A 11031 </td><td> Capra α mouse, 1:1000 </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 647 </td><td> Invitrogen </td><td> A 21235 </td><td> Capra α mouse, 1:1000 </td></tr><tr><td> Mowiol 4-88 reagente </td><td> Calbiochem </td><td> 475904 </td><td></td></tr><tr><td> DABCO </td><td> Aldrich </td><td> D2 ,780-2 </td><td> 1,4-diazabiciclo [2.2.2] ottano 98% </td></tr><tr><td> Cellulare filtro </td><td> BD Biosciences </td><td> 352350 </td><td> 70 micron dimensione dei pori </td></tr><tr><td> Saponina </td><td> Merck </td><td> 7695 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina/ EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td> Benzonasi 250 U / mL </td><td> Merck </td><td> 1.01654.0001 </td><td></td></tr><tr><td> Inibitore della tripsina </td><td> Sigma </td><td> T6522 (500 mg) </td><td></td></tr><tr><td> 20% di HSA </td><td> Octapharma </td><td> Albumina umana Kabi-20% </td><td></td></tr></tbody></table>

cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel

L&#39;influenza di 3 dimensioni (3D) ponteggi sulla differenziazione della crescita, la proliferazione neuronale e, infine, è di grande interesse al fine di trovare nuovi metodi per le terapie basate sulle cellule e standardizzati a disturbi neurologici o malattie neurodegenerative. Strutture 3D sono tenuti a fornire un ambiente molto più vicino alla situazione in vivo di culture 2D. Nel contesto della medicina rigenerativa, la combinazione di ponteggi biomateriale con staminali neurali e cellule progenitrici promette grandi come strumento terapeutico. 1-5 sistemi di cultura che emula un ambiente di tre dimensioni hanno dimostrato di influenzare la proliferazione e la differenziazione in diversi tipi di staminali e cellule progenitrici. Qui, la formazione e la funzionalizzazione del 3D-microenviroment è importante determinare la sopravvivenza e il destino delle cellule incorporato. 6-8 Qui abbiamo usato PuraMatrix 9,10 (RADA16, PM), un peptide idrogel a base patibolo,che è ben descritto e usato per studiare l&#39;influenza di un ambiente 3D su diversi tipi di cellule. 7,11-14 PuraMatrix possono essere personalizzati in modo semplice e sintetico la realizzazione di nano-fibre fornisce una 3D-cultura sistema di alta affidabilità, che in aggiunta xeno-free. Recentemente abbiamo studiato l&#39;influenza della concentrazione di PM-sulla formazione del patibolo. 13 In questo studio le concentrazioni di PM utilizzato ha avuto un impatto diretto sulla formazione della struttura 3D, che è stato dimostrato dalla microscopia a forza atomica. Una successiva analisi della sopravvivenza e della differenziazione dei hNPCs rivelato un&#39;influenza delle concentrazioni di PM utilizzate sul destino delle cellule incorporato. Tuttavia, l&#39;analisi di sopravvivenza o la differenziazione neuronale mediante tecniche di immunofluorescenza possiede alcuni ostacoli. Per ottenere dati attendibili, si deve determinare il numero totale di celle all&#39;interno di una matrice per ottenere il numero relativo di esempio. cellule neuronali segnato da βIII-tubulina. Questi prerequisiti di una tecnica per analizzare i ponteggi in tutte le 3-Dimensioni da un microscopio confocale o una tecnica paragonabile come microscopi a fluorescenza in grado di prendere z-stack del campione. Inoltre questo tipo di analisi è estremamente tempo. Qui mostriamo un metodo per rilasciare le cellule dal 3D-scaffold per l&#39;esempio, una successiva analisi in citometria a flusso. In questo protocollo umani le cellule progenitrici neurali (hNPCs) della linea cellulare ReNcell VM (Millipore USA) sono state coltivate e differenziati in 3D ponteggi costituito da PuraMatrix (PM) o PuraMatrix integrato con laminina (PML). Nelle nostre mani un PM concentrazione dello 0,25% è stato ottimale per la coltivazione delle cellule 13, tuttavia la concentrazione potrebbe essere adattato per altri tipi di cellule. 12 Le cellule rilasciato può essere utilizzato ad esempio per studi immunocitochimiche e successivamente analizzate mediante citometria a flusso. Questo accelera l&#39;analisi e more oltre, il resto i dati ottenuti su una base più larga, migliorando l&#39;affidabilità dei dati.

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Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel

Qui si descrive l&#39;uso di un auto-assemblaggio 3-dimensionale patibolo alla cultura cellule umane progenitrici neurali. Vi presentiamo un protocollo per liberare le cellule dai ponteggi da analizzare successivamente, ad esempio mediante citometria di flusso. Questo protocollo potrebbe essere adattato per altri tipi di cellule per effettuare studi dettagliati meccanicisticamente.

La coltivazione di cellule progenitrici neurali umane in un 3-dimensionale di auto-assemblaggio Peptide Hydrogel

The  influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally  neuronal differentiation is of great interest in order to find new ...

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