Name: cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel
Uploaded: 2012-01-11T12:00:00
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著者は、彼の優秀な技術サポートのためにノーマンクルーガーに感謝します。

1。パート1：PuraMatrixのhNPCsの文化<ol><li>ラミニンなしで0.25％のPuraMatrix濃度と足場の世代に、事前に以下の溶液を調製する必要があります。 </li><li> 20％ショ糖と滅菌蒸留水に溶解した10％ショ糖を含む溶液を含む溶液を準備します。 </li><li> 1.5ミリリットルコニカルチューブに蒸留水120μlの20％ショ糖溶液の溶液1ミックス120μlのために。 </li><li> 1.5ミリリットルコニカルチューブに20％ショ糖?...

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	<li>Zhang, S., Gelain, F., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+3D+tissue+cell+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for 3D tissue cell cultures.</a> Semin. Cancer. Biol. 15, 413-420 (2005).</li><li>Gelain, F., Horii, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+scaffolds+for+3-d+tissue+cell+cultures+and+regenerative+medicine.">Designer self-assembling peptide scaffolds for 3-d tissue cell cultures and regenerative medicine.</a> Macromol. Biosci. 7, 544-551 (2007).</li><li>Blow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+building+a+better+matrix.">Cell Culture: building a better matrix.</a> Nature. Methods. 6 (8), 619-622 (2009).</li><li>Hauser, C. A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+biological+materials.">Designer self-assembling peptide nanofiber biological materials.</a> Chem. Soc. Rev. 39, 2780-2790 (2010).</li><li>Teng, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+mediated+by+a+unique+polymer+scaffold+seeded+with+neural+stem+cells.">Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99, 3024-3029 (2002).</li><li>Silva, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+differentiation+of+neural+progenitor+cells+by+high-epitope+density+nanofibers.">Selective differentiation of neural progenitor cells by high-epitope density nanofibers.</a> Science. 303, 1352-1355 (2004).</li><li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS. ONE. 1, e119-e119 (2006).</li><li>Taraballi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycine-spacers+influence+functional+motifs+exposure+and+self-assembling+propensity+of+functionalized+substrates+tailored+for+neural+stem+cell+cultures.">Glycine-spacers influence functional motifs exposure and self-assembling propensity of functionalized substrates tailored for neural stem cell cultures.</a> Front Neuroengineering. 3, 1-1 (2010).</li><li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane.">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 3334-3338 (1993).</li><li>Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+oligopeptide+matrices+support+mammalian+cell+attachment.">Self-complementary oligopeptide matrices support mammalian cell attachment.</a> Biomaterials. 16, 1385-1393 (1995).</li><li>Horii, A., Wang, X., Gelain, F., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+significantly+enhance+osteoblast+proliferation,+differentiation+and+3-D+migration.">Biological designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds significantly enhance osteoblast proliferation, differentiation and 3-D migration.</a> PLoS. ONE. 2, e190-e190 (2007).</li><li>Thonhoff, J. R., Lou, D. I., Jordan, P. M., Zhao, X., Wu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compatibility+of+human+fetal+neural+stem+cells+with+hydrogel+biomaterials+in+vitro.">Compatibility of human fetal neural stem cells with hydrogel biomaterials in vitro.</a> Brain. Res. 1187, 42-51 (2008).</li><li>Ortinau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+3D-scaffold+formation+on+differentiation+and+survival+in+human+neural+progenitor+cells.">Effect of 3D-scaffold formation on differentiation and survival in human neural progenitor cells.</a> Biomed. Eng. Online. 9, 70-70 (2010).</li><li>Abu-Yousif, A. O., Rizvi, I., Evans, C. L., Celli, J. P., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PuraMatrix+Encapsulation+of+Cancer+Cells.">PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells.</a> J. Vis. Exp. (34), e1692-e1692 (2009).</li><li>Morgan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+neurons+derived+from+human+neural+progenitor+cells+by+veratridine.">Protection of neurons derived from human neural progenitor cells by veratridine.</a> Neuroreport. 20, 1225-1229 (2009).</li><li>Giese, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+and+the+effect+of+oxygen+during+proliferation+and+differentiation+of+human+neural+progenitor+cells.">Erythropoietin and the effect of oxygen during proliferation and differentiation of human neural progenitor cells.</a> BMC. Cell Biol. 11, 94-94 (2010).</li><li>Schm&#246;le, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+indolylmaleimide+acts+as+GSK-3beta+inhibitor+in+human+neural+progenitor+cells.">Novel indolylmaleimide acts as GSK-3beta inhibitor in human neural progenitor cells.</a> Bioorg. Med. Chem. 18, 6785-6795 (2010).</li><li>PuraMatrix, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+Hydrogel.">Peptide Hydrogel.</a> Guidelines for Use. Catalog No 354250, (2006).</li></ol>

3D -足場の使用は、 生体状況に近い細胞培養の状況で異なる細胞型の開発を研究する機会を提供しています。しかし、例えば、神経分化または1が細胞型の例：定量化のための信頼性の高いデータを得るためにいくつかの障害を克服しなければならない機能的研究の分析に関する。 ここでは、足場PuraMatrixとFACSまたは機能アッセイなどのツールへの容易なア?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> PuraMatrixペプチドハイドロゲル</td><td>バイオサイエンスBD </td><td> 354250 </td><td></td></tr><tr><td>マウスラミニンI </td><td> Cultrex </td><td> 400-2009090 </td><td></td></tr><tr><td>スクロース</td><td>シグマ</td><td> S9378 - 1KG </td><td></td></tr><tr><td>正常ヤギ血清</td><td> Dako社製</td><td> X0907 </td><td></td></tr><tr><td>トリトンX 100 </td><td>ロート</td><td> 3051.3 </td><td></td></tr><tr><td> PBSダルベッコ</td><td> Biochrom AG </td><td> L 1825 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> GIBCO </td><td> 14170-088 </td><td>ハンクス平衡塩類溶液1X </td></tr><tr><td&gt;βIII-チューブリン抗体</td><td>サンタクルス</td><td> SC - 51670 </td><td>モノクローナルマウス、、1:500 </td></tr><tr><td>のAlexa Fluor ® 488 </td><td>インビトロジェン</td><td> 11029 </td><td>ヤギαマウス、1:1000 </td></tr><tr><td>のAlexa Fluor ® 568 </td><td>インビトロジェン</td><td> 11031 </td><td>ヤギαマウス、1:1000 </td></tr><tr><td>のAlexa Fluor ® 647 </td><td>インビトロジェン</td><td> 21235 </td><td>ヤギαマウス、1:1000 </td></tr><tr><td> Mowiol 4から88試薬</td><td>カルビオケム</td><td> 475904 </td><td></td></tr><tr><td> DABCO </td><td>アルドリッチ</td><td> D2 ,780 - 2 </td><td> 1,4 - ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン98パーセント</td></tr><tr><td>セルストレーナー</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 352350 </td><td> 70μmの細孔径</td></tr><tr><td>サポニン</td><td>メルク</td><td> 7695 </td><td></td></tr><tr><td>トリプシン/ EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td>ベンゾナーゼ250 U /μlの</td><td>メルク</td><td> 1.01654.0001 </td><td></td></tr><tr><td>トリプシン阻害剤</td><td>シグマ</td><td> T6522（500mg）を</td><td></td></tr><tr><td> 20％のHSA </td><td>オクタ</td><td>ヒトアルブミンカビ20パーセント</td><td></td></tr></tbody></table>

cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel

成長、増殖、最終的に神経分化の3次元（3D）足場の影響は、神経疾患や神経変性疾患におけるセルベースおよび標準化された治療のための新しい方法を見つけるために非常に興味深いです。 3次元構造は、2Dの文化よりも生体状況のためにはるかに近い環境を提供することが期待されています。再生医療の文脈では、神経幹細胞および前駆細胞を用いた生体材料の足場の組み合わせは、治療ツールとして大きな可能性を秘めています。三次元環境をエミュレートする1月5日培養のシステムは、ステムの異なる種類の増殖と分化に影響を及ぼすことが示されていると前駆細胞。ここで、3D - microenviromentの形成と官能化が埋め込 ​​まれた細胞の生存と運命を決定することが重要である。6-8ここでは、PuraMatrix 9,10（RADA16、PM）、ペプチドベースのハイドロゲル足場を、使用うまく説明すると、異なる種類の細胞上で3次元環境の影響を研究するために使用されている。7,11-14 PuraMatrixは簡単にカスタマイズし、ナノファイバーの合成加工は、その高い信頼性の3次元培養システムを、提供することができますさらに外国人のフリーになります。 最近では、足場の形成にPM -濃度の影響を検討してきた。本研究では13 PMの使用濃度は、原子間力顕微鏡によって実証された3次元構造の形成に直接影響を持っていた。 hNPCsの生存と分化のその後の分析では、埋め込まれた細胞の運命でPMの使用濃度の影響を明らかにした。しかし、免疫蛍光技術の保有いくつかのハードルによる生存や神経分化の解析。信頼性の高いデータを得るために、一例の相対的な数を取得するには、マトリックス内のセルの合計数を決定する必要があります。 βIII-チューブリンでマークされた神経細胞。この前提条件が試料のz -スタックを取ることができる蛍光顕微鏡のような共焦点顕微鏡または同等の技術によってすべての3次元の足場を分析する手法。さらに、この種の分析は非常に時間がかかります。 ここでは、フローサイトメトリーにより、後で分析などのために3D -足場から細胞を解放する方法を示しています。このプロトコルではReNcell VM細胞株のヒト神経前駆細胞は、（hNPCs）（ミリポア米国）ラミニン（PML）を添加したPuraMatrix（PM）またはPuraMatrixから成る3次元足場で培養して分化させた。私たちの手で0.25％のPM -濃度はセル13の栽培に最適である、しかし濃度が他の細胞タイプに適応される可能性があります。12リリースの細胞は、例えば免疫組織化学的研究に使用し、その後フローサイトメトリーによって分析することができます。分析とMOが高速化データの信頼性を向上、より広い基盤に基づい、得られたデータの残りを上に再。

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Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel

ここでは、文化、人間の神経前駆細胞への自己組織化3次元足場の使用を説明します。我々は、フローサイトメトリーで、その後、例えば、分析する足場から細胞を解放するためにプロトコルを提示する。このプロトコルは、詳細な機構的な研究を行うために他の細胞型に適応される可能性があります。

3次元自己組織化ペプチドハイドロゲル中のヒト神経前駆細胞の栽培

The  influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally  neuronal differentiation is of great interest in order to find new ...

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