Name: cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel
Uploaded: 2012-01-11T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel at JoVE.com

저자는 자신의 우수한 기술 지원 노먼 크루거 감사하고 싶습니다.

1. 제 1 부 : PuraMatrix에 hNPCs의 문화 <ol><li> laminin 무허가 0.25 %의 PuraMatrix 농도와 발판의 세대 사전에 다음과 같은 솔루션을 준비 필요 </li><li> 20 %의 자당 및 멸균 증류수에 용해 10 % 자당을 포함하는 솔루션을 포함하는 솔루션을 준비합니다. </li><li> 1.5 ML 원뿔 튜브에 증류수 120 μl와 20 %의 자당 솔루션의 해결 방법 1 혼합 120 μl하십시오. </li><li> 1.5 ML 원뿔 튜브에 20 % 자당 용액 60 μl로 PuraMatrix 솔루?...

<ol>
	<li>Zhang, S., Gelain, F., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+3D+tissue+cell+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for 3D tissue cell cultures.</a> Semin. Cancer. Biol. 15, 413-420 (2005).</li><li>Gelain, F., Horii, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+scaffolds+for+3-d+tissue+cell+cultures+and+regenerative+medicine.">Designer self-assembling peptide scaffolds for 3-d tissue cell cultures and regenerative medicine.</a> Macromol. Biosci. 7, 544-551 (2007).</li><li>Blow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+building+a+better+matrix.">Cell Culture: building a better matrix.</a> Nature. Methods. 6 (8), 619-622 (2009).</li><li>Hauser, C. A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+biological+materials.">Designer self-assembling peptide nanofiber biological materials.</a> Chem. Soc. Rev. 39, 2780-2790 (2010).</li><li>Teng, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+mediated+by+a+unique+polymer+scaffold+seeded+with+neural+stem+cells.">Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99, 3024-3029 (2002).</li><li>Silva, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+differentiation+of+neural+progenitor+cells+by+high-epitope+density+nanofibers.">Selective differentiation of neural progenitor cells by high-epitope density nanofibers.</a> Science. 303, 1352-1355 (2004).</li><li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures.">Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS. ONE. 1, e119-e119 (2006).</li><li>Taraballi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycine-spacers+influence+functional+motifs+exposure+and+self-assembling+propensity+of+functionalized+substrates+tailored+for+neural+stem+cell+cultures.">Glycine-spacers influence functional motifs exposure and self-assembling propensity of functionalized substrates tailored for neural stem cell cultures.</a> Front Neuroengineering. 3, 1-1 (2010).</li><li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane.">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 3334-3338 (1993).</li><li>Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+oligopeptide+matrices+support+mammalian+cell+attachment.">Self-complementary oligopeptide matrices support mammalian cell attachment.</a> Biomaterials. 16, 1385-1393 (1995).</li><li>Horii, A., Wang, X., Gelain, F., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+designer+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+significantly+enhance+osteoblast+proliferation,+differentiation+and+3-D+migration.">Biological designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds significantly enhance osteoblast proliferation, differentiation and 3-D migration.</a> PLoS. ONE. 2, e190-e190 (2007).</li><li>Thonhoff, J. R., Lou, D. I., Jordan, P. M., Zhao, X., Wu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compatibility+of+human+fetal+neural+stem+cells+with+hydrogel+biomaterials+in+vitro.">Compatibility of human fetal neural stem cells with hydrogel biomaterials in vitro.</a> Brain. Res. 1187, 42-51 (2008).</li><li>Ortinau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+3D-scaffold+formation+on+differentiation+and+survival+in+human+neural+progenitor+cells.">Effect of 3D-scaffold formation on differentiation and survival in human neural progenitor cells.</a> Biomed. Eng. Online. 9, 70-70 (2010).</li><li>Abu-Yousif, A. O., Rizvi, I., Evans, C. L., Celli, J. P., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PuraMatrix+Encapsulation+of+Cancer+Cells.">PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells.</a> J. Vis. Exp. (34), e1692-e1692 (2009).</li><li>Morgan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+neurons+derived+from+human+neural+progenitor+cells+by+veratridine.">Protection of neurons derived from human neural progenitor cells by veratridine.</a> Neuroreport. 20, 1225-1229 (2009).</li><li>Giese, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+and+the+effect+of+oxygen+during+proliferation+and+differentiation+of+human+neural+progenitor+cells.">Erythropoietin and the effect of oxygen during proliferation and differentiation of human neural progenitor cells.</a> BMC. Cell Biol. 11, 94-94 (2010).</li><li>Schm&#246;le, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+indolylmaleimide+acts+as+GSK-3beta+inhibitor+in+human+neural+progenitor+cells.">Novel indolylmaleimide acts as GSK-3beta inhibitor in human neural progenitor cells.</a> Bioorg. Med. Chem. 18, 6785-6795 (2010).</li><li>PuraMatrix, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+Hydrogel.">Peptide Hydrogel.</a> Guidelines for Use. Catalog No 354250, (2006).</li></ol>

3D - 공사장 공중 발판의 사용은 세포 배양 상황에 가까이 생체내 상황에서 다른 세포 유형의 개발을 연구하는 기회를 제공합니다. 그러나, 예를 들어의 연결을 차별하거나 한 세포 유형의 예 부량에 대한 신뢰할 수있는 데이터를 얻을 몇 가지 장애물을 극복하기 위해이 기능 연구의 분석에 관한. 여기 발판 PuraMatrix 및 FACS 또는 기능 assays 같은 도구에 쉽게 액세스를 제?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> PuraMatrix 펩타이드의 히드로겔 </td><td> Bioscience BD </td><td> 354,250 </td><td></td></tr><tr><td> 마우스 laminin I </td><td> Cultrex </td><td> 400-2009090 </td><td></td></tr><tr><td> 자당 </td><td> 시그마 </td><td> S9378 - 1KG </td><td></td></tr><tr><td> 정상 염소 혈청 </td><td> Dako </td><td> X0907 </td><td></td></tr><tr><td> 트리톤 X 100 </td><td> 로스 </td><td> 3051.3 </td><td></td></tr><tr><td> PBS Dulbecco </td><td> Biochrom AG </td><td> L 1825 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170-088 </td><td> 행크스 &#39;균형 소금 솔루션 1X </td></tr><tr><td&gt; βIII - tubulin 항체 </td><td> 산타 크루즈 </td><td> SC - 51670 </td><td> 단클론 마우스, 1:500 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 488 </td><td> Invitrogen </td><td> 11,029 </td><td> 염소 α 마우스, 1:1000 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 568 </td><td> Invitrogen </td><td> 11,031 </td><td> 염소 α 마우스, 1:1000 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 647 </td><td> Invitrogen </td><td> 21,235 </td><td> 염소 α 마우스, 1:1000 </td></tr><tr><td> Mowiol 4-88 시약 </td><td> Calbiochem </td><td> 475,904 </td><td></td></tr><tr><td> Dabco </td><td> 올드 리치 </td><td> D2 ,780 - 2 </td><td> 1,4 - Diazabicyclo [2.2.2] 옥탄 98% </td></tr><tr><td> 셀 스트레이너 </td><td> BD Biosciences </td><td> 352,350 </td><td> 70 μm의 기공 크기 </td></tr><tr><td> 사포닌 </td><td> 머크 </td><td> 7695 </td><td></td></tr><tr><td> 트립신/ EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> GIBCO </td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td> Benzonase 250 U / μl </td><td> 머크 </td><td> 1.01654.0001 </td><td></td></tr><tr><td> 트립신 억제제 </td><td> 시그마 </td><td> T6522 (500 MG) </td><td></td></tr><tr><td> 20% HSA </td><td> Octapharma </td><td> 인간 알부민 Kabi 20% </td><td></td></tr></tbody></table>

cultivation of human neural progenitor cells in a 3-dimensional self-assembling peptide hydrogel

성장, 증식 그리고 마지막의 연결을 차별화에 대한 3 차원 (3D) 공사장 공중 발판의 영향은 신경 장애 또는 neurodegenerative 질병에서 세포 기반 및 표준 치료에 대한 새로운 방법을 찾기 위해 큰 관심입니다. 3D 구조는 2D 문화보다 생체내 상황에 더 가까워지는 환경을 제공 것으로 예상된다. 재생 의료의 맥락에서 신경 줄기 및 전구 세포로 biomaterial의 공사장 공중 발판의 조합 치료 도구로 큰 약속을 보유하고 있습니다. 3 차원 환경을 에뮬레이션 1-5 문화 시스템과 줄기의 다양한 유형의 증식과 분화에 영향을 표시되었습니다 전구 세포. 여기에, 3D - microenviroment의 형성과 functionalisation가 포함된 세포의 생존과 운명을 결정하는 것이 중요합니다. 6-8 여기 PuraMatrix 9,10 (RADA16, PM), 펩타이드 기반 히드로겔 발판을 사용잘 설명하고 다른 세포 유형에 3D - 환경의 영향을 연구하는 데 사용되는. 7,11-14 PuraMatrix 쉽게 사용자 정의와 나노 섬유의 합성 제조 어느 높은 신뢰성의 3D 문화 시스템을 제공 수 또한 외부의 자유입니다. 최근 우리는 발판의 형성에 대한 PM - 농도의 영향을 연구했습니다. 본 연구에서는 13 PM의 사용 농도는 원자 힘 현미경에 의해 입증되었다 3D 구조의 형성에 직접적인 영향을 미쳤다. hNPCs의 생존과 분화의 후속 분석은 내장 세포의 운명에 대한 PM의 사용 농도의 영향을 밝혔다. 그러나, immunofluorescence 기법의 posses 어떤 장애물에 의해 생존의 연결이나 분화의 분석. 신뢰할 수있는 데이터를 얻으려면 하나는 예의 상대 번호를 얻기 위해 매트릭스 내에서 세포의 총 수를 결정한다. βIII - tubulin에 의한 표시의 연결을 세포. 이 전제 조건이 표본의 Z - 스택을 취할 수 형광 현미경과 같은 공촛점 현미경 또는 유사한 기술의 모든 3 차원에있는 공사장 공중 발판을 분석하는 기술. 또한 이러한 종류의 분석은 매우 시간이 소요됩니다. 여기 유동세포계측법하여 나중에 분석 예에 대한 3D - 공사장 공중 발판에서 세포를 릴리스하는 방법을 보여줍니다. 이 프로토콜에서는 ReNcell VM 셀 라인의 인간 신경 전구 세포 (hNPCs) (Millipore 미국)가 교양되었으며 laminin (PML)과 보충 PuraMatrix (PM) 또는 PuraMatrix 구성 3D - 공사장 공중 발판으로 차별. 우리 손에 0.25 %의 PM - 농도 그러나 농도가 다른 세포 유형에 맞게 수 있습니다. 12이 출시 세포 유동세포계측법 예를 들면 immunocytochemical 연구에 사용되며 이후 분석할 수, 세포 13 재배를위한 최적했습니다. 분석 및 MO,이 속도데이터의 신뢰성을 향상보다 기본에, 얻은 데이터 휴식을 통해 다시.

Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel at JoVE.com

Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel

여기서 우리는 자기 조립 3 차원 비계 문화에 인간 신경 전구 세포의 사용을 설명합니다. 우리는 유동세포계측법에 의해 연속적 예 분석하는 공사장 공중 발판에서 세포를 릴리스하는 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 상세한 mechanistically 연구를 수행하는 다른 세포 유형에 맞게 수 있습니다.

3 차원 자기 조립 펩티드 히드로겔에서 인간 신경 전구 세포의 배양

The  influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally  neuronal differentiation is of great interest in order to find new ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System

Proteolytically 분해 3 차원 시스템에서 난소 대과의 캡슐화 및 문화에 대한 방법

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that secretes sex hormones and supports oocyte maturation. In vitro  follicle techniques provide ...

연구

생체공학

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Organotypic 콜라겐 I 분석 : 3 차원 컨텍스트에서 셀 행동을 평가하기 위해 가단 플랫폼

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

Adaptation of a Haptic Robot in a 3T fMRI

3T의 fMRI에 Haptic 로봇의 적응

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) provides excellent functional brain imaging via the BOLD signal 1 with advantages including non-ionizing ...

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

2D 및 3D 환경에서 신경 전구 세포의 전기장 제어 감독 마이 그 레이션

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

3 차원 세포 배양을위한 자기보고 발판

Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

Synthesis of an Intein-mediated Artificial Protein Hydrogel

테인 매개 인공 단백질 히드로 겔의 합성

We present the synthesis of a highly stable protein hydrogel mediated by a split-intein-catalyzed protein trans-splicing reaction. The building blocks of ...

Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

단일 사용 공압 생물 반응기 시스템을 사용하여 포유 동물 세포의 배양

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized ...

Improved 3D Hydrogel Cultures of Primary Glial Cells for In Vitro Modelling of Neuroinflammation

Improved 3D Hydrogel Cultures of Primary Glial Cells for In Vitro Modelling of Neuroinflammation

생체 외에서 Neuroinflammation의 모델링에 대 한 기본 Glial 세포의 3 차원 하이드로 겔 문화 개선

In the central nervous system, numerous acute injuries and neurodegenerative disorders, as well as implanted devices or biomaterials engineered to enhance ...

Culturing Mammalian Cells in Three-dimensional Peptide Scaffolds

3 차원 펩 티 드 건설 기계에 포유류 세포 배양

A useful technique for culturing cells in a self-assembling nanofiber three-dimensional (3D) scaffold is described. This culture system recreates an ...

Hyaluronic-Acid Based Hydrogels for 3-Dimensional Culture of Patient-Derived Glioblastoma Cells

히 알루 론 산 기반 Hydrogels 세포종 환자에서 파생 된 셀의 3 차원 문화에 대 한

Glioblastoma (GBM) is the most common, yet most lethal, central nervous system cancer. In recent years, many studies have focused on how the extracellular ...