Name: measurement of cellular chemotaxis with ecis/taxis
Uploaded: 2012-04-01T11:00:00
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この作品は、国立衛生研究所（ES07408とEB00208）からの補助金によって支えられている。

1。 ECIS /タクシー電極の調製<ol><li> ECIS /タクシー電極アレイ（スライドあたり8室から成る）の金表面は、最初の無菌条件下で室温で15分間脱イオン水（のdH 2 O）中の滅菌10mMのシステインによる前処理によって安定化されています。 </li><li>各電極室からシステイン溶液を吸引し、無菌のdH 2 Oで3回リンスし、完全培地250μlの（RPMI1640、10％FBS、25mMのHEPES緩衝液）に置き換えます...

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	<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> J. Exp. Med. 115, 453-466 (1962).</li><li>Lauffenburger, D. A., Tranquillo, R. T., Zigmond, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration+gradients+of+chemotactic+factors+in+chemotaxis+assays.">Concentration gradients of chemotactic factors in chemotaxis assays.</a> Methods Enzymol. 162, 85-101 (1988).</li><li>Nelson, R. D., Quie, P. G., Simmons, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+under+agarose:+a+new+and+simple+method+for+measuring+chemotaxis+and+spontaneous+migration+of+human+polymorphonuclear+leukocytes+and+monocytes.">Chemotaxis under agarose: a new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous migration of human polymorphonuclear leukocytes and monocytes.</a> J. Immunol. 115, 1650-1650 (1975).</li><li>Newton-Nash, D. K., Tonellato, P., Swiersz, M., Abramoff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+chemokinetic+behavior+of+inflammatory+lung+macrophages+in+a+linear+under-agarose+assay.">Assessment of chemokinetic behavior of inflammatory lung macrophages in a linear under-agarose assay.</a> J. Leukoc. Biol. 48, 297-305 (1990).</li><li>Giaever, I., Keese, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+fibroblast+behavior+in+tissue+culture+with+an+applied+electric+field.">Monitoring fibroblast behavior in tissue culture with an applied electric field.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 3761-374 (1984).</li><li>Keese, C. G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Whole+Cell+Biosensor+bsed+on+Cell-Substrate+Interactions.">A Whole Cell Biosensor bsed on Cell-Substrate Interactions.</a> IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. 12, 500-501 (1990).</li><li>Laevsky, G., Knecht, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-linking+of+actin+filaments+by+myosin+II+is+a+major+contributor+to+cortical+integrity+and+cell+motility+in+restrictive+environments.">Cross-linking of actin filaments by myosin II is a major contributor to cortical integrity and cell motility in restrictive environments.</a> J. Cell. Sci. 116, 3761-3770 (2003).</li><li>Condeelis, J., Bresnick, A., Demma, M., Dharmawardhane, S., Eddy, R., Hall, A. L., Sauterer, R., Warren, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+amoeboid+chemotaxis:+an+evaluation+of+the+cortical+expansion.">Mechanisms of amoeboid chemotaxis: an evaluation of the cortical expansion.</a> 11, 5-6 (1990).</li><li>Hadjout, N., Laevsky, G., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+real-time+measurement+of+chemotactic+cell+motility.">Automated real-time measurement of chemotactic cell motility.</a> Biotechniques. 31, 1130-1138 (2001).</li><li>Hadjout, N., Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+real-time+measurements+of+leukocyte+chemotaxis.">Automated real-time measurements of leukocyte chemotaxis.</a> J. Immunol. Methods. 320, 70-80 (2007).</li><li>Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metallothionein+mediates+leukocyte+chemotaxis.">Metallothionein mediates leukocyte chemotaxis.</a> BMC Immunol. 6, 21-21 (2005).</li><li>Lundien, M. C., Mohammed, K. A., Nasreen, N., Tepper, R. S., Hardwick, J. A., Sanders, K. L., Van Horn, R. D., Antony, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+MCP-1+expression+in+airway+epithelial+cells:+role+of+CCR2+receptor+in+airway+epithelial+injury.">Induction of MCP-1 expression in airway epithelial cells: role of CCR2 receptor in airway epithelial injury.</a> J. Clin. Immunol. 22, 144-152 (2002).</li><li>Zudaire, E., Cuesta, N., Murty, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+aryl+hydrocarbon+receptor+repressor+is+a+putative+tumor+suppressor+gene+in+multiple+human+cancers.">The aryl hydrocarbon receptor repressor is a putative tumor suppressor gene in multiple human cancers.</a> J. Clin. Invest. 118, 640-650 (2008).</li><li>Opp, D., Wafula, B., Lim, J., Huang, E., Lo, J. C., Lo, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electric+cell-substrate+impedance+sensing+to+assess+in+vitro+cytotoxicity.">Use of electric cell-substrate impedance sensing to assess in vitro cytotoxicity.</a> Biosens. Bioelectron. 24, 2625-269 (2009).</li><li>Foxman, E. F., Kunkel, E. J., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+conflicting+chemotactic+signals.+The+role+of+memory+in+leukocyte+navigation.">Integrating conflicting chemotactic signals. The role of memory in leukocyte navigation.</a> J. Cell. Biol. 147, 577-588 (1999).</li><li>Heit, B., Tavener, S., Raharjo, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intracellular+signaling+hierarchy+determines+direction+of+migration+in+opposing+chemotactic+gradients.">An intracellular signaling hierarchy determines direction of migration in opposing chemotactic gradients.</a> J. Cell. Biol. 159, 91-102 (1999).</li></ol>

ECIS /タクシーアッセイの小説の特性は、細胞が走化性因子に応答するようにリアルタイムデータの収集を自動化する能力が含まれています。この技術の最もありふれたアプリケーションは、個々の走化性勾配に、または走化性のアゴニストおよびアンタゴニストの混合物から成る勾配に対する細胞応答を測定することですが、留学生センター/タクシーのアプローチはまたで非常に有用であ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> ECISZθ </td><td>応用物理学</td><td></td><td> <a href="http://www.biophysics.com/prodducts_Ecisz0.php">http://www.biophysics.com/prodducts_Ecisz0.php</a> </td></tr><tr><td> ECIS電極アレイ</td><td>応用物理学</td><td> 8W走</td><td> <a href="http://www.biophysics.com/cultureware.php">http://www.biophysics.com/cultureware.php</a> </td></tr><tr><td> Seakem GTGアガロース</td><td> BioWhittaker分子のアプリケーション</td><td> 50070 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI1640 </td><td> Cellgro </td><td> 10から040 </td><td></td></tr><tr><td>ハイクローンウシ胎児血清</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td> SH300703 </td><td></td></tr><tr><td> PEnicillin /ストレプトマイシン</td><td> MPのバイオメディカル</td><td> 1670049 </td><td>ペニシリン5,000 IU / mlで、ストレプトマイシン5 mg / mlの</td></tr><tr><td> HEPESバッファー</td><td> MPのバイオメディカル</td><td> 1688449 </td><td> 1M溶液、細胞培養グレード</td></tr><tr><td> 14ゲージステンレス製カニューレ（2）4インチ</td><td>一般的なラボサプライ</td><td> 5-8365-1 </td><td>ブラントポイント</td></tr></tbody></table>

measurement of cellular chemotaxis with ecis/taxis

外部刺激に応答して細胞の動きは、創傷治癒、炎症や感染症への対応を含む多くの細胞プロセスの基本である。走化性を測定するための一般的な方法は、細胞と化学誘引物質が多孔質膜で区切られたボイデンチャンバーアッセイである。細胞が走化性因子に向かって膜を介して移行するように、彼らは、膜の底面に付着し、または基礎となるメディアに分類され、その後、染色し、視覚的に1カウントされます。この方法では、細胞組織2で見つけた勾配の貧しい表現であると考えられている急と一時的な走化性勾配にさらされている。 別のアッセイ系、下のアガロース走化性アッセイ、3、アガロース層を形成し、薄い水性膜の固体基板全体の4小節の細胞運動。アガロースに発症勾配が浅く、アプリであると考えられている自然勾配を発生するの表現をropriate。走化性は、走行距離の顕微鏡イメージングにより評価することができる。 Boydenチャンバーアッセイと下のアガロースアッセイの両方は、通常、エンドポイントアッセイとして設定されています。 自動化された留学生センター/タクシーシステムは、電気細胞-基質インピーダンスセンシング（ECIS）5、6アンダーアガロースのアプローチを組み合わせたものです。このアッセイでは、ターゲット電極は、8室の各々に配置されています。大対向電極は、8室（ 図2）のそれぞれを介して実行されます。各チャンバは、アガロースを充填し、二つの小さな井戸は、ターゲット電極の両側にアガロースにカットされています。他の拡散誘引物質の発生源（ 図3）を保持しながら、一つはよく、試験細胞集団で満たされている。システムを通過する電流は、細胞がターゲット電極を通過として発生する抵抗値の変化を決定するために使用することができます。ターゲット上の細胞はelectrod電子システム6の抵抗を増加させる。さらに、抵抗の急激な変動は、電極表面と細胞の相互作用の変化を表しており、継続的な細胞の形状変化を示すものである。 ECIS /タクシーシステムは、長期間にわたって、リアルタイムで細胞集団の動きを測定するだけでなく、ターゲット電極で単一のセルの到着を検出するのに十分な感度であることができます。 細胞性粘菌discoidiumは、葉酸勾配7、8の存在下で移行することが知られており、その走化性応答が正確に留学生センター/タクシー9によって測定することができます。白血球走化性は、SDF1αへと走化性拮抗薬への応答にも留学生センター/タクシー10、11で測定されています。 SDF1αへの白血球の応答の例を図1に示されています。

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Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis

ECIS /タクシーシステムは、細胞走化性を測定する自動化された、リアルタイムのアッセイである。このアッセイにおいて、細胞は、ターゲット電極に到達するためにアガロースの層の下に移動します。携帯電話の動きはAC電流0〜抵抗の発症によって測定されます。

ECIS /タクシーと細胞走化性の測定

Cellular movement in response to external stimuli is fundamental to many cellular processes including wound healing, inflammation and the response to ...

Research

JoVE Journal

Biology

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