Name: measurement of cellular chemotaxis with ecis/taxis
Uploaded: 2012-04-01T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами Национальных Институтов Здоровья (ES07408 и EB00208).

1. ECIS / Такси электрода подготовка <ol><li> Золотой поверхности ECIS / такси электрод массив (состоящий из 8 камер на слайд) сначала стабилизировать предварительная обработка стерильным 10 мМ цистеина в дистиллированной воде (DH 2 O) в течение 15 мин при комнатной температуре в стерильных ус...

<ol>
	<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> J. Exp. Med. 115, 453-466 (1962).</li><li>Lauffenburger, D. A., Tranquillo, R. T., Zigmond, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration+gradients+of+chemotactic+factors+in+chemotaxis+assays.">Concentration gradients of chemotactic factors in chemotaxis assays.</a> Methods Enzymol. 162, 85-101 (1988).</li><li>Nelson, R. D., Quie, P. G., Simmons, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+under+agarose:+a+new+and+simple+method+for+measuring+chemotaxis+and+spontaneous+migration+of+human+polymorphonuclear+leukocytes+and+monocytes.">Chemotaxis under agarose: a new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous migration of human polymorphonuclear leukocytes and monocytes.</a> J. Immunol. 115, 1650-1650 (1975).</li><li>Newton-Nash, D. K., Tonellato, P., Swiersz, M., Abramoff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+chemokinetic+behavior+of+inflammatory+lung+macrophages+in+a+linear+under-agarose+assay.">Assessment of chemokinetic behavior of inflammatory lung macrophages in a linear under-agarose assay.</a> J. Leukoc. Biol. 48, 297-305 (1990).</li><li>Giaever, I., Keese, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+fibroblast+behavior+in+tissue+culture+with+an+applied+electric+field.">Monitoring fibroblast behavior in tissue culture with an applied electric field.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 3761-374 (1984).</li><li>Keese, C. G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Whole+Cell+Biosensor+bsed+on+Cell-Substrate+Interactions.">A Whole Cell Biosensor bsed on Cell-Substrate Interactions.</a> IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. 12, 500-501 (1990).</li><li>Laevsky, G., Knecht, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-linking+of+actin+filaments+by+myosin+II+is+a+major+contributor+to+cortical+integrity+and+cell+motility+in+restrictive+environments.">Cross-linking of actin filaments by myosin II is a major contributor to cortical integrity and cell motility in restrictive environments.</a> J. Cell. Sci. 116, 3761-3770 (2003).</li><li>Condeelis, J., Bresnick, A., Demma, M., Dharmawardhane, S., Eddy, R., Hall, A. L., Sauterer, R., Warren, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+amoeboid+chemotaxis:+an+evaluation+of+the+cortical+expansion.">Mechanisms of amoeboid chemotaxis: an evaluation of the cortical expansion.</a> 11, 5-6 (1990).</li><li>Hadjout, N., Laevsky, G., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+real-time+measurement+of+chemotactic+cell+motility.">Automated real-time measurement of chemotactic cell motility.</a> Biotechniques. 31, 1130-1138 (2001).</li><li>Hadjout, N., Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+real-time+measurements+of+leukocyte+chemotaxis.">Automated real-time measurements of leukocyte chemotaxis.</a> J. Immunol. Methods. 320, 70-80 (2007).</li><li>Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metallothionein+mediates+leukocyte+chemotaxis.">Metallothionein mediates leukocyte chemotaxis.</a> BMC Immunol. 6, 21-21 (2005).</li><li>Lundien, M. C., Mohammed, K. A., Nasreen, N., Tepper, R. S., Hardwick, J. A., Sanders, K. L., Van Horn, R. D., Antony, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+MCP-1+expression+in+airway+epithelial+cells:+role+of+CCR2+receptor+in+airway+epithelial+injury.">Induction of MCP-1 expression in airway epithelial cells: role of CCR2 receptor in airway epithelial injury.</a> J. Clin. Immunol. 22, 144-152 (2002).</li><li>Zudaire, E., Cuesta, N., Murty, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+aryl+hydrocarbon+receptor+repressor+is+a+putative+tumor+suppressor+gene+in+multiple+human+cancers.">The aryl hydrocarbon receptor repressor is a putative tumor suppressor gene in multiple human cancers.</a> J. Clin. Invest. 118, 640-650 (2008).</li><li>Opp, D., Wafula, B., Lim, J., Huang, E., Lo, J. C., Lo, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electric+cell-substrate+impedance+sensing+to+assess+in+vitro+cytotoxicity.">Use of electric cell-substrate impedance sensing to assess in vitro cytotoxicity.</a> Biosens. Bioelectron. 24, 2625-269 (2009).</li><li>Foxman, E. F., Kunkel, E. J., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+conflicting+chemotactic+signals.+The+role+of+memory+in+leukocyte+navigation.">Integrating conflicting chemotactic signals. The role of memory in leukocyte navigation.</a> J. Cell. Biol. 147, 577-588 (1999).</li><li>Heit, B., Tavener, S., Raharjo, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intracellular+signaling+hierarchy+determines+direction+of+migration+in+opposing+chemotactic+gradients.">An intracellular signaling hierarchy determines direction of migration in opposing chemotactic gradients.</a> J. Cell. Biol. 159, 91-102 (1999).</li></ol>

Новые характеристики ECIS / Такси анализа включают ее возможность автоматизировать сбор данных в реальном времени, как клетки реагируют на хемоаттрактантный. В то время как наиболее употребительных применения этой технологии заключается в измерении клеточных реакций на отдельные град...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> ECIS Zθ </td><td> Прикладной биофизики </td><td></td><td> <a href="http://www.biophysics.com/prodducts_Ecisz0.php">http://www.biophysics.com/prodducts_Ecisz0.php</a> </td></tr><tr><td> ECIS электрода массив </td><td> Прикладной биофизики </td><td> 8W Хемотаксис </td><td> <a href="http://www.biophysics.com/cultureware.php">http://www.biophysics.com/cultureware.php</a> </td></tr><tr><td> Seakem GTG агарозном </td><td> BioWhittaker молекулярной </td><td> 50070 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI1640 </td><td> CellGro </td><td> 10-040 </td><td></td></tr><tr><td> Hyclone фетальной телячьей сыворотки </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH300703 </td><td></td></tr><tr><td> Пеnicillin / стрептомицином </td><td> MP Biomedicals </td><td> 1670049 </td><td> Пенициллин 5000 МЕ / мл; стрептомицин 5 мг / мл </td></tr><tr><td> HEPES буфера </td><td> MP Biomedicals </td><td> 1688449 </td><td> 1М раствор, клеточная культура класса </td></tr><tr><td> Нержавеющей стали 14 калибра Канюля (2), 4 дюйма </td><td> Генеральный питания лаборатории </td><td> 5-8365-1 </td><td> Блант точки </td></tr></tbody></table>

measurement of cellular chemotaxis with ecis/taxis

Сотовые движения в ответ на внешние раздражители имеет фундаментальное значение для многих клеточных процессах, включая заживления ран, воспалений и ответ на инфекцию. Общий метод измерения хемотаксис является Бойден анализа камеру, в которой клетки и хемоаттрактантный разделены пористой мембраной. Как клетки мигрируют через мембрану в сторону хемоаттрактантный, они придерживаются в нижней части оболочки, или осенью в основных средствах массовой информации, и впоследствии окрашиваются и визуально считается 1. В этом методе клетки подвергаются воздействию крутой и переходные хемоаттрактантный градиент, который считается бедным представление градиента в тканях 2. Другой анализ системы, под-агарозы хемотаксис анализ, 3, 4 меры клетки движение по твердой подложке в тонкую водную пленку, образует под слоем агарозы. Градиент, который развивается в агарозном мелкий и считается приложениеropriate представление естественного градиента. Хемотаксис может быть оценена микроскопических изображений расстояния. Оба анализа Бойден камеру и под-агарозы анализа, как правило, настроены как конечная точка анализа. Автоматизированная ECIS / Такси система сочетает в себе под-агарозы подход с электрическим Cell-подложка сопротивление зондированию (ECIS), 5, 6. В данном анализе целевой электроды расположены в каждом из 8 камер. Большое контр-электрод проходит через каждого из 8 камер (рис. 2). Каждая камера заполнена агарозой и два небольших скважин разреза в агарозном по обе стороны от целевого электрода. Одна скважина заполняется клеточной популяции тест, а другой держит источников диффундирующих хемоаттрактантный (рис. 3). Ток проходит через системы может быть использован для определения изменения сопротивления, которое происходит в клетках проходит над объектом электрода. Клетки на целевой электродыE повышают устойчивость системы 6. Кроме того, быстрые изменения сопротивления представляют собой изменения во взаимодействии клеток с поверхности электрода и свидетельствуют о текущих клеточные изменения формы. ECIS / Такси система измерения движения популяции клеток в реальном времени, в течение длительного периода времени, но также достаточно чувствительны, чтобы обнаружить прибытие из одной клетки в цель электрода. Dictyostelium discoidium, как известно, мигрируют в присутствии фолиевой кислоты градиент 7, 8 и хемотаксиса ответ может быть точно измерена по ECIS / такси 9. Хемотаксис лейкоцитов в ответ на SDF1α и хемотаксис антагонистов также были измерены с ECIS / 10 Такси 11. Пример лейкоцитарной реакции на SDF1α показано на рисунке 1.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis at JoVE.com

Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis

ECIS / Такси система автоматизирована, в режиме реального времени анализ, который измеряет сотовой хемотаксис. В данном анализе клетки перемещаются под слоем агарозы, чтобы прийти к целевой электрода. Сотовые движения измеряется начала сопротивления переменного тока 0.

Измерения клеточных Хемотаксис с ECIS / Такси

Cellular movement in response to external stimuli is fundamental to many cellular processes including wound healing, inflammation and the response to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Studies of Bacterial Chemotaxis Using Microfluidics - Interview

Исследования Бактериальные Хемотаксис Использование Microfluidics - Интервью

A Microfluidic Device with Groove Patterns for Studying Cellular Behavior

Микрожидкостных устройств с Groove Шаблоны для изучения Сотовая Поведение

We describe a microfluidic device with microgrooved patterns for studying cellular behavior.  This microfluidic platform consists of a top fluidic channel ...

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Создание Patch-пипетки и Sharp Электроды с программируемой Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

Идентификация белковых комплексов с количественной протеомики в CEREVISIAE С.

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy

Изображений экзоцитоза в клетки сетчатки Биполярный с Микроскопия TIRF

Total internal reflectance fluorescence (TIRF) microscopy is a technique that allows the study of events happening at the cell membrane, by selective ...

Measurement Of Neuromagnetic Brain Function In Pre-school Children With Custom Sized MEG

Измерение Neuromagnetic функции мозга в Дети дошкольного возраста с настраиваемыми Sized MEG

Magnetoencephalography is a technique that detects magnetic fields associated with cortical activity [1]. The electrophysiological activity of the brain ...

A Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable Concentration Gradients

Микрожидкостных Устройство для Количественная Бактериальные Хемотаксис в стабильных градиента концентрации

Chemotaxis allows bacteria to approach sources of attractant chemicals or to avoid sources of repellent chemicals. Bacteria constantly monitor the ...

Imaging G-protein Coupled Receptor (GPCR)-mediated Signaling Events that Control Chemotaxis of Dictyostelium Discoideum

Imaging G-protein Coupled Receptor GPCR-mediated Signaling Events that Control Chemotaxis of Dictyostelium Discoideum

Изображений G-белком рецептор (GPCR)-опосредованной сигнализации События, управления хемотаксис Dictyostelium Discoideum</em

Many eukaryotic cells can detect gradients of chemical signals in their environments and migrate accordingly 1.  This guided cell migration is referred as ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Измерение продолжительности жизни в<em&gt; Дрозофилы</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. Элеганс Анализ хемотаксиса

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...