Name: multiphoton microscopy of cleared mouse brain expressing yfp
Uploaded: 2012-09-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP at JoVE.com

نود أن نشكر يعقوب سوليس على مساعدته في تحرير الفيديو. وقد تم تمويل هذا العمل في جزء من جائزة CAREER NSF-0953902 DBI ليفين MJ.

1. الإرواء (5) والجامع الحيوانية المقاصة مخ الفأر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن على طول الإجراء تختلف تبعا لطول الفترة الزمنية المستخدمة في الخطوة الجفاف، ولكن في المجموع يمكن أن تجرى العملية برمتها في غضون يومين. </li><li style=";text-align:right;direction...

<ol>
	<li>Parra, S. G., Chia, T. H., Zinter, J. P., Levene, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+microscopy+of+cleared+mouse+organs.">Multiphoton microscopy of cleared mouse organs.</a> J. Biomed. Opt. 15, 036017 (2010).</li><li>Vesuna, S., Torres, R., Levene, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+fluorescence,+second+harmonic+generation,+and+fluorescence+lifetime+imaging+of+whole+cleared+mouse+organs.">Multiphoton fluorescence, second harmonic generation, and fluorescence lifetime imaging of whole cleared mouse organs.</a> J. Biomed. Opt. 16, 106009 (2011).</li><li>Zucker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+insect+and+mammalian+embryo+imaging+with+confocal+microscopy:+Morphology+and+apoptosis.">Whole insect and mammalian embryo imaging with confocal microscopy: Morphology and apoptosis.</a> Cytometry. A69, 1143-1152 (2006).</li><li>Sakhalkar, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+in+bulk+tissue+specimens+using+optical+emission+tomography:+Fluorescence+preservation+during+optical+clearing.">Functional imaging in bulk tissue specimens using optical emission tomography: Fluorescence preservation during optical clearing.</a> Phys. Med. Biol. 52, 2035-2054 (2007).</li><li>Dazai, J., Spring, S., Cahill, L. S., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple-mouse+Neuroanatomical+Magnetic+Resonance+Imaging.">Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging.</a> J. Vis. Exp. (48), e2497 (2011).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed. Eng. Online. 2, (2003).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11, 36-42 (2004).</li><li>Feng, G., Mellor, R. H., Bernstein, M., Keller-Peck, C., Nguyen, Q. T., Wallace, M., Nerbonne, J. M., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Neuronal+Subsets+in+Transgenic+Mice+Expressing+Multiple+Spectral+Variants+of+GFP.">Imaging Neuronal Subsets in Transgenic Mice Expressing Multiple Spectral Variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Hama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nat. Neuro. 14, 1481-1488 (2011).</li></ol>

بينما الأصباغ العضوية القياسية متوافقة مع مجموعة من المذيبات العضوية، وبالتالي لا تشكل تحديا خاصا لتطهير البروتوكولات والبروتينات الفلورية وغالبا ما تكون أقل تسامحا من التغييرات في المذيبات .. 4 والهدف من هذا العمل هو التغلب قيدا خطيرا من البروتوكولات السابق?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> التخزين المؤقت المالحة الفوسفات </td><td> سيغما الدريخ، وشركة </td><td> D8537 </td><td> 500 مل، ودرجة الحموضة 7.2 </td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> علوم المجهر الإلكتروني </td><td> 15710 </td><td> 10 × 10 مل، 16٪ بارافورمالدهيد </td></tr><tr><td> الكحول الإيثيلي </td><td> Bioanalytical الأمريكية </td><td> AB00515-00500 </td><td> 500 مل، 200 دليلا </td></tr><tr><td> الكحول الإيثيلي </td><td> Pharmco المنتجات، وشركة </td><td> 111000190 </td><td> 1 غال.، 190 دليلا </td></tr><tr><td> البنزيل الكحول </td><td> سيغما الدريخ، وشركة </td><td> 402834 </td><td> 500 مل، 99 +٪ </td></tr><tr><td> بنزيل بنزوات </td><td> سيغما الدريخ، وشركة </td><td> B6630-IL </td><td> 500 مل، ≥ 99٪ </td></tr><tr><td> 5X/0.5 NA الهدف </td><td> نيكون </td><td> AZ الدقيق خطة 5X </td><td> 15 WD </td></tr></tbody></table>

multiphoton microscopy of cleared mouse brain expressing yfp

يتم توليد المجهر Multiphoton الجوهرية التوافقي مضان والثانية (SHG) من أجهزة الماوس كله ممكن عن طريق مسح ضوئيا الجهاز قبل التصوير. 1،2 ومع ذلك، لأجهزة التي تحتوي على البروتينات الفلورية مثل GFP وYFP، وبروتوكولات تبادل المعلومات البصرية التي تستخدم الميثانول الجفاف واضحة باستخدام كحول البنزيل: بنزيل بنزوات (BABB)، في حين دون وقاية من 3 ضوء لا تحتفظ إشارة الفلورسنت. بروتوكول المعروضة هنا هي طريقة الرواية التي لأداء الجهاز كله المقاصة الضوئية على مخ الفأر مع الحفاظ على إشارة مضان من الخلايا العصبية التي أعرب عنها في YFP. تغيير بروتوكول تبادل المعلومات البصرية مثل أن الجهاز يعاني من الجفاف باستخدام الإيثانول سلسلة متدرجة وقد وجد للحد من الأضرار التي لحقت البروتينات الفلورية والحفاظ على إشارة الفلورسنت للتصوير multiphoton. 4 استخدام أسلوب الأمثل من المقاصة البصرية مع الايثانول القائمة على الجفاف و تطهير من BABBبينما محمية من الضوء، وتبين لنا صور عالية الدقة multiphoton من الفلورسنت الأصفر التعبير (YFP) البروتين في الخلايا العصبية لدماغ فأرة أكثر من 2 ملم تحت سطح الأنسجة.

Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP at JoVE.com

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

المجهر Multiphoton من أجهزة الماوس كله هو ممكن عن طريق مسح ضوئيا الجهاز قبل التصوير، ولكن ليس كل البروتوكولات الحفاظ على إشارة الفلورسنت من البروتينات الفلورية. باستخدام أسلوب المقاصة البصرية مع الايثانول القائمة على الجفاف وكحول البنزيل: بنزيل بنزوات المقاصة، وتبين لنا صور عالية الدقة multiphoton من مخ الفأر كله معربا عن YFP.

Multiphoton المجهر من مخ الفأر مسح تعرب عن YFP

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

إعداد أنسجة المخ فأرة للالميكروسكوب Immunoelectron

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window

Intravital المجهري للماوس دوران الأوعية الدقيقة الدماغ باستخدام نافذة مغلقة القحف

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, ...

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

ركزت شعاع ايون طحن والمجهر الإلكتروني لأنسجة الدماغ

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

عزل LacZ - معربا عن خلايا من أنسجة الأذن الداخلية باستخدام الماوس التدفق الخلوي

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

تصوير الأعصاب وظيفية عن طريق الموجات فوق الصوتية تعطيل حاجز الدم في الدماغ والتصوير بالرنين المغناطيسي المنغنيز معززة لل

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

ميكرون على نطاق بصري القرار المقطعي من أدمغة فئران كاملة مع متحد البؤر المجهري الخفيفة ورقة

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

التلاعب الجيني للمخيخي الحبيبة الخلايا العصبية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; لدراسة مورفولوجيا الخلايا العصبية والهجرة

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

النظام الشمي كنموذج لدراسة أنماط نمو محور عصبي ومورفولوجيا<em&gt; في فيفو</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Purification of Mouse Brain Vessels

تنقية ماوس سفن الدماغ

In the brain, most of the vascular system consists of a selective barrier, the blood-brain barrier (BBB) that regulates the exchange of molecules and ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

يطل في الدماغ Polysomes مع مجهر القوة الذرية

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...