Name: multiphoton microscopy of cleared mouse brain expressing yfp
Uploaded: 2012-09-23T14:00:00
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हम याकूब Solis वीडियो संपादन में उसकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम के हिस्से में एक NSF कैरियर एम.जे. Levene पुरस्कार DBI-0953902 द्वारा वित्त पोषित किया गया था.

1. 5 पशु परफ्यूज़न और पूरे माउस मस्तिष्क क्लियरिंग <ol><li> प्रक्रिया की पूरी लंबाई समय की लंबाई निर्जलीकरण कदम के प्रति इस्तेमाल पर निर्भर करते हुए भिन्न हो सकता है, लेकिन पूरी प्रक्रिया में कुल दो दिन?...

<ol>
	<li>Parra, S. G., Chia, T. H., Zinter, J. P., Levene, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+microscopy+of+cleared+mouse+organs.">Multiphoton microscopy of cleared mouse organs.</a> J. Biomed. Opt. 15, 036017 (2010).</li><li>Vesuna, S., Torres, R., Levene, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+fluorescence,+second+harmonic+generation,+and+fluorescence+lifetime+imaging+of+whole+cleared+mouse+organs.">Multiphoton fluorescence, second harmonic generation, and fluorescence lifetime imaging of whole cleared mouse organs.</a> J. Biomed. Opt. 16, 106009 (2011).</li><li>Zucker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+insect+and+mammalian+embryo+imaging+with+confocal+microscopy:+Morphology+and+apoptosis.">Whole insect and mammalian embryo imaging with confocal microscopy: Morphology and apoptosis.</a> Cytometry. A69, 1143-1152 (2006).</li><li>Sakhalkar, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+in+bulk+tissue+specimens+using+optical+emission+tomography:+Fluorescence+preservation+during+optical+clearing.">Functional imaging in bulk tissue specimens using optical emission tomography: Fluorescence preservation during optical clearing.</a> Phys. Med. Biol. 52, 2035-2054 (2007).</li><li>Dazai, J., Spring, S., Cahill, L. S., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple-mouse+Neuroanatomical+Magnetic+Resonance+Imaging.">Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging.</a> J. Vis. Exp. (48), e2497 (2011).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed. Eng. Online. 2, (2003).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11, 36-42 (2004).</li><li>Feng, G., Mellor, R. H., Bernstein, M., Keller-Peck, C., Nguyen, Q. T., Wallace, M., Nerbonne, J. M., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Neuronal+Subsets+in+Transgenic+Mice+Expressing+Multiple+Spectral+Variants+of+GFP.">Imaging Neuronal Subsets in Transgenic Mice Expressing Multiple Spectral Variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Hama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nat. Neuro. 14, 1481-1488 (2011).</li></ol>

जबकि मानक कार्बनिक रंजक कार्बनिक सॉल्वैंट्स की एक सीमा के साथ संगत कर रहे हैं, और इसलिए प्रोटोकॉल समाशोधन के लिए एक विशेष चुनौती पैदा नहीं करते, फ्लोरोसेंट प्रोटीन अक्सर परिवर्तन की कम सहिष्णु विलायक...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> कैटलॉग संख्या </td><td> टिप्पणियां </td></tr><tr><td> फास्फेट Saline Buffered </td><td> सिग्मा Aldrich, इंक </td><td> D8537 </td><td> 500 मिलीलीटर, 7.2 पीएच </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विज्ञान </td><td> 15710 </td><td> 10 x 10 मिलीग्राम, 16% paraformaldehyde </td></tr><tr><td> एथिल अल्कोगल </td><td> Bioanalytical अमेरिकी </td><td> AB00515 - +००,५०० </td><td> 500 मिलीग्राम, 200 सबूत </td></tr><tr><td> एथिल अल्कोगल </td><td> Pharmco उत्पाद इंक, </td><td> 111000190 </td><td> 1 लड़की, 190 सबूत </td></tr><tr><td> लोबान शराब </td><td> सिग्मा Aldrich, इंक </td><td> 402834 </td><td> 500 मिलीलीटर, 99% + </td></tr><tr><td> लोबान Benzoate </td><td> सिग्मा Aldrich, इंक </td><td> B6630 - आईएल </td><td> 500 मिलीलीटर, ≥ 99% </td></tr><tr><td> 5X/0.5 NA का उद्देश्य </td><td> Nikon </td><td> AZ योजना 5X आटा </td><td> 15 WD </td></tr></tbody></table>

multiphoton microscopy of cleared mouse brain expressing yfp

पूरे माउस अंगों की आंतरिक प्रतिदीप्ति और 2 हार्मोनिक पीढ़ी (एसएचजी) के multiphoton माइक्रोस्कोपी ऑप्टिकली इमेजिंग पहले अंग समाशोधन द्वारा संभव बनाया है. 1,2 हालांकि, अंगों कि GFP और YFP में फ्लोरोसेंट प्रोटीन होते, ऑप्टिकल समाशोधन प्रोटोकॉल है कि मेथनॉल का उपयोग के लिए निर्जलीकरण और स्पष्ट benzyl शराब का उपयोग: benzyl benzoate (Babb) जबकि 3 प्रकाश से असुरक्षित फ्लोरोसेंट संकेत संरक्षित नहीं है. यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक उपन्यास में जिस तरह प्रदर्शन करने के लिए माउस मस्तिष्क पर पूरे अंग ऑप्टिकल समाशोधन जबकि YFP न्यूरॉन्स में व्यक्त की प्रतिदीप्ति संकेत के संरक्षण है. ऑप्टिकल समाशोधन ऐसी है कि अंग निर्जलित एक इथेनॉल वर्गीकृत श्रृंखला का उपयोग फ्लोरोसेंट प्रोटीन को नुकसान को कम करने के लिए और उनके multiphoton इमेजिंग के लिए फ्लोरोसेंट संकेत बनाए रखने के लिए पाया गया है प्रोटोकॉल बदलकर 4 इथेनॉल आधारित निर्जलीकरण के साथ ऑप्टिकल समाशोधन के एक अनुकूलित पद्धति का उपयोग करके और Babb द्वारा समाशोधनजबकि प्रकाश से परिरक्षित, हम ऊतक सतह के नीचे एक माउस 2 मिमी से अधिक मस्तिष्क के न्यूरॉन्स में पीले फ्लोरोसेंट प्रोटीन अभिव्यक्ति (YFP) के उच्च संकल्प multiphoton छवियों को दिखाने के.

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Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

पूरे माउस अंगों के Multiphoton माइक्रोस्कोपी ऑप्टिकली इमेजिंग से पहले अंग समाशोधन द्वारा संभव है, लेकिन नहीं सभी प्रोटोकॉल फ्लोरोसेंट प्रोटीन के फ्लोरोसेंट संकेत बनाए रखने. इथेनॉल आधारित निर्जलीकरण और benzyl शराब के साथ एक ऑप्टिकल समाशोधन विधि का प्रयोग: बेंजाइल बेंजोएट समाशोधन, हम पूरे माउस मस्तिष्क YFP व्यक्त की उच्च संकल्प multiphoton छवियों को दिखाने के.

मंजूरी माउस YFP व्यक्त मस्तिष्क के multiphoton माइक्रोस्कोपी

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

माउस मस्तिष्क के ऊतकों के Immunoelectron माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window

माउस ब्रेन microcirculation के intravital माइक्रोस्कोपी एक बंद कपालीय विंडो का उपयोग

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, ...

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

ध्यान केंद्रित आयन बीम मिलिंग और मस्तिष्क के ऊतकों के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

अलग LacZ व्यक्त माउस इनर कान प्रवाह cytometry का उपयोग ऊतकों से कक्ष

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

कार्यात्मक न्यूरोइमेजिंग अल्ट्रासोनिक रक्त मस्तिष्क बाधा विघटन और मैंगनीज बढ़ाकर एमआरआई का उपयोग

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Confocal लाइट शीट माइक्रोस्कोपी के साथ पूरे माउस दिमाग की माइक्रोन पैमाने संकल्प ऑप्टिकल टोमोग्राफी

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स की आनुवंशिक हेरफेर<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; में Vivo</em&gt; Neuronal आकृति विज्ञान और प्रवास का अध्ययन करने के लिए

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

एक मॉडल के रूप घ्राण प्रणाली axonal विकास पैटर्न और आकृति विज्ञान का अध्ययन करने के लिए<em&gt; Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Purification of Mouse Brain Vessels

माउस ब्रेन वेसल्स की शुद्धि

In the brain, most of the vascular system consists of a selective barrier, the blood-brain barrier (BBB) that regulates the exchange of molecules and ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी के साथ मस्तिष्क polysomes पर peering

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...