Name: multiphoton microscopy of cleared mouse brain expressing yfp
Uploaded: 2012-09-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP at JoVE.com

Vi vill tacka Jacob Solis för hans hjälp i videoredigering. Detta arbete har finansierats delvis av en NSF KARRIÄR Award DBI-0953902 till MJ Levene.

1. Djurens Perfusion 5 och hela Mouse Brain Clearing <ol><li> Hela längden av förfarandet kan variera beroende på hur lång tid som används per dehydratiseringssteg, men totalt hela processen kan utföras i två dagar. </li><li> Väg YFP möss och sedan djupt söva med en intraperitoneal injektion av ketamin / xylazin (100 mg / kg: 10 mg / kg). </li><li> Bekräfta en kirurgisk plan av djup anestesi innan du fortsätter till operation. Kontrollera djuret var 5 minut för att se om den reagerar på en fas...

<ol>
	<li>Parra, S. G., Chia, T. H., Zinter, J. P., Levene, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+microscopy+of+cleared+mouse+organs.">Multiphoton microscopy of cleared mouse organs.</a> J. Biomed. Opt. 15, 036017 (2010).</li><li>Vesuna, S., Torres, R., Levene, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+fluorescence,+second+harmonic+generation,+and+fluorescence+lifetime+imaging+of+whole+cleared+mouse+organs.">Multiphoton fluorescence, second harmonic generation, and fluorescence lifetime imaging of whole cleared mouse organs.</a> J. Biomed. Opt. 16, 106009 (2011).</li><li>Zucker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+insect+and+mammalian+embryo+imaging+with+confocal+microscopy:+Morphology+and+apoptosis.">Whole insect and mammalian embryo imaging with confocal microscopy: Morphology and apoptosis.</a> Cytometry. A69, 1143-1152 (2006).</li><li>Sakhalkar, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+in+bulk+tissue+specimens+using+optical+emission+tomography:+Fluorescence+preservation+during+optical+clearing.">Functional imaging in bulk tissue specimens using optical emission tomography: Fluorescence preservation during optical clearing.</a> Phys. Med. Biol. 52, 2035-2054 (2007).</li><li>Dazai, J., Spring, S., Cahill, L. S., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple-mouse+Neuroanatomical+Magnetic+Resonance+Imaging.">Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging.</a> J. Vis. Exp. (48), e2497 (2011).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed. Eng. Online. 2, (2003).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11, 36-42 (2004).</li><li>Feng, G., Mellor, R. H., Bernstein, M., Keller-Peck, C., Nguyen, Q. T., Wallace, M., Nerbonne, J. M., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Neuronal+Subsets+in+Transgenic+Mice+Expressing+Multiple+Spectral+Variants+of+GFP.">Imaging Neuronal Subsets in Transgenic Mice Expressing Multiple Spectral Variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Hama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nat. Neuro. 14, 1481-1488 (2011).</li></ol>

Medan vanliga organiska färgämnen är kompatibla med en rad olika organiska lösningsmedel och därför inte utgör en särskild utmaning för att rensa protokoll, fluorescerande proteiner är ofta mindre toleranta mot förändringar i lösningsmedel. 4 Målet för föreliggande arbete var att övervinna en allvarlig begränsning av tidigare optiska clearing protokoll där fluorescens XFPs förlorades eller allvarligt skadad. De bilder som presenteras här visar att fluorescens från YFP bevarades. Den opti...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Fosfatbuffrad saltlösning </td><td> Sigma-Aldrich, Inc. </td><td> D8537 </td><td> 500 ml, pH 7,2 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15.710 </td><td> 10 x 10 ml, 16% paraformaldehyd </td></tr><tr><td> Etylalkohol </td><td> Amerikanska Bioanalytical </td><td> AB00515-00500 </td><td> 500 ml, 200 proof </td></tr><tr><td> Etylalkohol </td><td> Pharmco Products, Inc. </td><td> 111000190 </td><td> 1 gal., 190 bevis </td></tr><tr><td> Bensylalkohol </td><td> Sigma-Aldrich, Inc. </td><td> 402.834 </td><td> 500 ml, 99 +% </td></tr><tr><td> Bensylbensoat </td><td> Sigma-Aldrich, Inc. </td><td> B6630-IL </td><td> 500 ml, ≥ 99% </td></tr><tr><td> 5X/0.5 NA mål </td><td> Nikon </td><td> AZ Plan Mjöl 5X </td><td> 15 WD </td></tr></tbody></table>

multiphoton microscopy of cleared mouse brain expressing yfp

Multiphoton mikroskopi av inneboende fluorescens och andra harmoniska generationen (SHG) av hela mus organ möjliggörs genom optiskt rensa organet före avbildning. 1,2 För organ som innehåller fluorescerande proteiner såsom GFP och YFP, optiska clearing protokoll som använder metanol uttorkning och tydlig med användande av bensylalkohol: bensylbensoat (BABB) medan oskyddad från ljus 3 inte bevarar inte den fluorescerande signalen. Protokollet presenteras här är ett nytt sätt för att utföra hela organ optisk clearing på mushjärna samtidigt som fluorescenssignalen av YFP uttryckt i nervceller. Ändra de optiska clearing-protokollet så att orgeln är uttorkad med en etanol graderad serie har visat sig minska skadorna på de fluorescerande proteiner och bevara sin fluorescerande signal för multiphoton avbildning. 4 Använda en optimerad metod för optisk clearing med etanol-baserad uttorkning och clearing av BABBmedan skyddad från ljus, visar vi högupplösta multiphoton bilder av gula fluorescerande protein (YFP) uttryck i nervceller i en mushjärna mer än 2 mm under vävnadsytan.

Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP at JoVE.com

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

Multiphoton mikroskopi av hela mus organ är möjlig genom optiskt rensa organet före avbildning, men inte alla protokoll bevara fluorescenssignalen av fluorescerande proteiner. Använda en optisk clearing metod med etanol-baserad uttorkning och bensylalkohol: bensylbensoat clearing visar vi högupplösta multiphoton bilder av hela mushjärna uttrycker YFP.

Multiphoton Mikroskopi av Rensat mushjärna uttrycker YFP

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Beredning av Mouse hjärnvävnad för Immunoelectron mikroskopi

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window

Intravital Mikroskopi av Mouse Brain Mikrocirkulationen hjälp av ett slutet Kraniell fönster

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, ...

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

Fokuserad jonstråle Fräsning och Svepelektronmikroskopi av hjärnvävnad

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

Isolera LacZ-uttryckande celler från mus Inre öronvävnader med flödescytometri

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionell hjärnavbildning med ultraljud Blod-hjärnbarriären störningar och mangan-förstärkt MRT

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Micron-skala Upplösning Optisk Tomography för hela musen hjärnor med Confocal Ljus Sheet mikroskopi

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation av Cerebellar granulneuroner<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em&gt; Att studera neuronal morfologi och migration

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Luktsystemet som en modell för att studera axonal tillväxt Mönster och morfologi<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Purification of Mouse Brain Vessels

Rening av Mouse Brain Fartyg

In the brain, most of the vascular system consists of a selective barrier, the blood-brain barrier (BBB) that regulates the exchange of molecules and ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

Peering på Brain polysomer med atomkraftsmikroskopi

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...