Name: high-throughput protein expression generator using a microfluidic platform
Uploaded: 2012-08-23T12:00:00
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Ce travail a été soutenu par Marie Curie international prime de réintégration.

1. Fabrication de périphériques <ol><li> Acheté DTPA-D SU-8 moisissure et la moisissure contrôle SPR220-7 découlent de la Fonderie Stanford Microfluidique ( <a href="http://www.stanford.edu/group/foundry" target="_blank">www.stanford.edu / group / fonderie</a> ). </li><li> Exposer les moules en silicone à chlorotriméthylsilane (TMCS) la vapeur pendant 10 min pour favoriser la libération élastomère après les étapes de cuisson 9. </li><li> Préparer un mélange à base d&#39;élastomère de silico...

<ol>
	<li>Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+column:+Microfluidic+high-throughput+screening.">Integration column: Microfluidic high-throughput screening.</a> Integrative biology quantitative biosciences from nano to macro. 1, 19-29 (2009).</li><li>Hong, J. W., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+nanoliter+systems.">Integrated nanoliter systems.</a> Nature. 21, 1179-1183 (2003).</li><li>Unger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Monolithic+Microfabricated+Valves+and+Pumps+by+Multilayer+Soft+Lithography.">A Monolithic Microfabricated Valves and Pumps by Multilayer Soft Lithography.</a> Science. 288, 113-116 (2000).</li><li>Gerber, D., Maerkl, S. J., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+microfluidic+approach+to+generating+protein-interaction+networks.">An in vitro microfluidic approach to generating protein-interaction networks.</a> Nature. 6, 71-74 (2009).</li><li>Einav, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+hepatitis+C+target+and+its+pharmacological+inhibitors+by+microfluidic+affinity+analysis.">Discovery of a hepatitis C target and its pharmacological inhibitors by microfluidic affinity analysis.</a> Nature. 26, 1019-1027 (2008).</li><li>Fordyce, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+identification+and+biophysical+characterization+of+transcription-factor+binding+sites+with+microfluidic+affinity+analysis.">De novo identification and biophysical characterization of transcription-factor binding sites with microfluidic affinity analysis.</a> Nature Biotechnology. 28, 962-967 (2010).</li><li>Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+analysis+of+protein+activities+using+proteome+chips.">Global analysis of protein activities using proteome chips.</a> Science (New York, N.Y.). 293, 2101-2105 (2001).</li><li>Ramachandran, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembling+protein+microarrays.">Self-assembling protein microarrays.</a> Science (New York, N.Y.). 305, 86-90 (2004).</li><li>Zhong, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+processor+for+gene+expression+profiling+of+single+human+embryonic+stem+cells.">A microfluidic processor for gene expression profiling of single human embryonic stem cells.</a> Lab on a chip. 8, 68-74 (2008).</li><li>Kusnezow, W., Hoheisel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid+supports+for+microarray+immunoassays.">Solid supports for microarray immunoassays.</a> Journal of molecular recognition JMR. 16, 165-176 (2003).</li><li>Lundin, M., Monne, M., Widell, A., Von Heijne, G., Persson, M. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topology+of+the+membrane-associated+hepatitis+C+virus+protein+NS4B.">Topology of the membrane-associated hepatitis C virus protein NS4B.</a> Journal of virology. 77, 5428 (2003).</li></ol>

Dans cet article, nous présentons une méthode de génération de puces à protéines à haut débit en utilisant une plate-forme microfluidique. La génération tableau sont basées sur le microréseau d&#39;impression de matrices d&#39;ADN et l&#39;expression de protéines in vitro de l&#39;ADN dans le dispositif microfluidique. Notre nouvelle plate-forme microfluidique présente plusieurs avantages importants par rapport aux méthodes actuellement utilisées, qui en fon...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactif / équipement </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> PDMS-Sylgard 184 </td><td> Dow Corning USA </td><td> ESSEX-DC </td></tr><tr><td> Chlorotriméthylsilane (TMCS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C72854 </td></tr><tr><td> Substrats de verre enduits époxy </td><td> Associés CEL USA </td><td> VEPO-25C </td></tr><tr><td> Poly éthylène glycol (PEG) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 81260 </td></tr><tr><td> D-tréhalose dihydraté </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9531 </td></tr><tr><td> Biotinylé-BSA </td><td> Percer </td><td> PIR-29130 </td></tr><tr><td> Neutravidine </td><td> Percer </td><td> 31050 </td></tr><tr><td> penta-His-biotine </td><td> Qiagen </td&gt; <td> 34440 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> <a href="http://www.bioind.com/htmls/article.aspx?c0=741&amp;bsp=13384" target="_blank">Industries biologiques</a> </td><td> 03-025-1B </td></tr><tr><td> TNT-T7 </td><td> Promega </td><td> L5540 </td></tr><tr><td> C-myc Cy3 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td></td></tr><tr><td> Boîtier de commande </td><td> Stanford Microfluidique Foundry </td><td></td></tr><tr><td> Moule </td><td> Stanford Microfluidique Foundry </td><td></td></tr><tr><td> Pin </td><td> New England Petit Tubes Corporation </td><td></td></tr><tr><td> Tygon tube microbore </td><td> Tygon </td><td> S-54-HL </td></tr><tr><td> Puces à ADN </td><td> Bio Robotique </td><td> MicroGrid 610 </td></tr><tr><td> Broches en silicone </td><td> Parallèlement Synthèse </td><td> SMT-S75 </td></tr></tbody></table>

high-throughput protein expression generator using a microfluidic platform

Domaines en croissance rapide, tels que la biologie des systèmes, exigent l&#39;élaboration et la mise en œuvre de nouvelles technologies, permettant des mesures à haut débit et haute-fidélité de grands systèmes. Microfluidique promet d&#39;accomplir beaucoup de ces exigences, comme la réalisation d&#39;expériences de criblage à haut débit sur ​​puce, englobant des dosages biochimiques, biophysiques et basée sur des cellules 1. Depuis les premiers jours de dispositifs microfluidiques, ce domaine a considérablement évolué, conduisant à l&#39;élaboration de microfluidique intégration à grande échelle 2,3. Cette technologie permet l&#39;intégration de milliers de vannes micromécaniques sur un seul appareil avec une empreinte d&#39;affranchissement entreprises (figure 1). Nous avons développé une plate-forme microfluidique à haut débit pour générer l&#39;expression in vitro de puces à protéines (figure 2) nommés PING (Générateur de réseau d&#39;interactions protéiques). Ces tableaux peuvent servir de modèle pour de nombreuses expériencescomme protéine-protéine 4, protéine-ARN 5 ou protéine-ADN 6 interactions. Le dispositif se composent de milliers de chambres de réaction, qui sont programmés individuellement à l&#39;aide de puces à ADN a. Alignement de ces puces microfluidiques imprimés à dispositifs programmes chaque chambre avec un seul point d&#39;éliminer la contamination potentielle ou réactivité croisée ailleurs, générant des puces utilisant des techniques de puces à ADN standards de repérage est également très modulaire, permettant le rangement de protéines de l&#39;ADN 7, 8, petites molécules, et même des suspensions colloïdales. L&#39;impact potentiel de la microfluidique sur les sciences biologiques est significative. Un certain nombre d&#39;essais basés sur la microfluidique ont déjà fourni des informations nouvelles sur la structure et la fonction des systèmes biologiques, et le domaine de la microfluidique continueront d&#39;influer sur la biologie.

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High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Nous présentons une approche microfluidique pour l&#39;expression de puces à protéines. Le dispositif se compose de milliers de chambres de réaction contrôlées par des micro-mécaniques vannes. Le dispositif microfluidique est couplé à une bibliothèque de gènes microréseau imprimé. Ces gènes sont ensuite transcrits et traduits sur puce, résultant en un réseau de protéines prêt à l&#39;emploi expérimental.

À haut débit Générateur expression des protéines utilisant une plate-forme microfluidique

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