Name: rapid point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant efficacy in whole blood
Uploaded: 2012-10-12T12:00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood at JoVE.com

De onderzoeken werden uitgevoerd uitsluitend met steun van afdelings-en institutionele middelen. De coagulatie apparatuur (Hemochron 801) werd geleend zonder de verplichting van de fabrikant. De test cartridges werden gekocht bij hun retail kosten. De inleidende figuur in de video werd gewijzigd van Sanderink, et al.. 12 De tweede figuur in de video (heparinase spijsvertering tijdsverloop) werd overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1.

1. Heparinase Reconstitutie <ol><li> Gevriesdroogd heparinase I is commercieel verkregen (Siemens, Newark Delaware, DadeHepzyme REF B4240-10) in flesjes van 1 mg van het gezuiverde eiwit. Het eiwit wordt opgelost in 0,25 ml zoutoplossing (0,9% NaCl). </li></ol> 2. Verzameling van bloedmonsters <ol><li> Twee bloedmonsters getrokken door vacuum in natriumcitraat (0,3 ml 0.109M; 3,2%) gebufferde Vacutainer buizen (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ); de buizen zowel pre-behandeld met een bekende concentratie van enoxaparine; het bloedvolume dat getekend is 2,7 ml. Het totale gehalte is dan 3,0 ml. </li></ol> 3. Heparinase Spijsvertering <ol><li> De volledige inhoud van de heparinase injectieflacon kan worden opgezogen in een injectiespuit (ongeveer 0,2 ml, 80% van de flacon, 0,8 ug eiwit), wordt overgedragen op een Vacutainer buis 0,2 ml zoutoplossing (0,9% NaCl) toegevoegd de tweede buis, die als baseline staat voor eliminatie van de enoxaparine effect. </li><li> Beide Vacutainer buizen worden in de putjes van de thermostaat Hemochron inrichting gedurende 5 min. (De geschiktheid van een 5 min spijsvertering tijd met heparinase werd opgericht in onze eerder gepubliceerde werk. 1) </li></ol> 4. Stolling Assays <ol><li> Aan het einde van de heparinase incubatie wordt 2,0 ml bloed naar de assay cartridge. In het geval van de MAA buis is voorgevuld met 0,1 ml 250 mM CaCl2 om coagulatie te leiden. De commerciële aPTT assay cartridge (A104) is ontworpen om stolling te leiden in bloed dat is getrokken in Vacutainer buizen die natriumcitraat als anticoagulant. </li><li> De Hemochron apparaat signaleert de voltooiing van de bloedstolling en behoudt de stollingstijd in seconden. Het verschil in stollingstijden tussen heparinase behandelde monster als het basislijnmonster, gedeeld door de stolling time voor de basislijn monster, levert het percentage daling als gevolg van de eliminatie van enoxaparine. Zoals hieronder besproken, hebben sterke lineaire correlatie verkregen voor de relatie tussen percentage afname in stollingstijd en de concentratie van enoxaparine in verrijkte monsters van bloed, en de correlatie met enoxaparine gemeten concentraties van de chromgenic bepaling van anti-Xa activiteit. Anti-Xa assays van enoxaparine concentratie werden uitgevoerd met een commerciële kit voor een tweetraps chromogene assay (BIOPHEN, Aniara, Mason, OH). </li></ol>

<ol>
	<li>Inchiosa, M. A. J. r., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+development+of+a+point-of-care+assay+of+enoxaparin+anticoagulant+activity+in+whole+blood.">Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).</li><li>Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aprotinin+prolongs+activated+and+nonactivated+whole+blood+clotting+time+and+potentiates+the+effect+of+heparin+in+vitro.">Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro.</a> Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).</li><li>Pothula, S., Inchiosa, M. A., Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effect+of+protamine+excess+on+blood+coagulation+assays.">In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays.</a> Anesth Analg. 96, SCA39 (2010).</li><li>Inchiosa, M., Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+low+plasma+levels+of+low+molecular+weight+heparin.">Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin.</a> Anesth Analg. 102, SCA10 (2010).</li><li>Gogarten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+new+antithrombotic+drugs+on+regional+anesthesia.">The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia.</a> Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).</li><li>Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+profile+of+different+low-molecular+weight+heparins+used+at+therapeutic+dose.">Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose.</a> Drug Saf. 28, 333-349 (2005).</li><li>Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dosage+of+enoxaparin+among+obese+and+renal+impairment+patients.">Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients.</a> Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).</li><li>El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+HEMOCHRON+JR.+HEMONOXTM+point+of+care+test+in+monitoring+the+anticoagulant+effect+of+enoxaparin+during+interventional+coronary+procedures.">The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).</li><li>Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+the+anticoagulant+activities+of+the+low+molecular+weight+heparin+fractions+and+fragments+with+flavobacterial+heparinase.">Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase.</a> Thromb Res. 44, 599-610 (1986).</li><li>Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Product+individuality+of+commercially+available+low-molecular-weight+heparins+and+their+generic+versions:+therapeutic+implications.">Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).</li><li>Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+anticoagulant+heparinoids+by+immunoprofiling.">Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling.</a> Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).</li><li>Sanderink, G. -. J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -. L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+the+prophylactic+dose+of+enoxaparin+once+daily+over+4+days+in+patients+with+renal+impairment.">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment.</a> Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).</li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Deze test van enoxaparine werkzaamheid kan dienen als een belangrijke optie voor de relatieve veiligheid van het uitvoeren van een invasieve procedure die een verzorger risico op bloedingen of de ontwikkeling van een hematoom is vast te stellen. Dit zou met name belangrijk wanneer een epidurale injectie wordt overwogen. De meerderheid van de richtlijnen bevelen een wachttijd van 12 uur tussen injectie van enoxaparine en inleiding van een invasieve procedure 5 Nierinsufficiëntie, obesitas en zwangerschap kunnen de dosering eisen van enoxaparine beïnvloeden 6,7 Omdat de test kan worden voltooid binnen een 10.. - min periode, kan het ook gebruikt worden in een kliniek of arts het kantoor, waar het zou informatie over de geschiktheid van antistolling bij patiënten die op een risico van ontwikkeling van veneuze trombo-embolie te bieden. Onmiddellijke aanpassing van de dosering kan worden ingesteld, als dat nodig is. De enoxaparine concentratie in plasma kan worden gemeten door een chromogene eenssay van de mate van remming van de stollingsfactor Xa. Echter, dit alleen geeft de concentratie, die niet specifiek zijn anticoagulans werkzaamheid, die op grote schaal varieert tussen de individuele patiënten. 6 tot 8 Onze studies werden uitgevoerd alleen met enoxaparine. Het kan echter worden verwacht dat de assay kan worden toegepast op elk LMWH dat wordt afgebroken door heparinase I. Deze reeds bekend is het geval voor dalteparine, nadroparine en tinzaparin zijn. 9-11 We hebben de test met betrekking tot de kenmerken van de Hemochron stollingstijd instrument. Het instrument is relatief goedkoop, ook, de wegwerp bloedafnamebuisjes, heparinase ampul, en test patronen te voltooien een analyse voor een patiënt is ongeveer 15 dollar. Zo zou men kunnen verwachten dat geschikt om anticoagulant status controleren in verschillende klinische instellingen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Hepzyme </td><td> Siemens </td><td> B4240 </td><td> heparinase I </td></tr><tr><td> &quot;MAA&quot; cartridge </td><td> Technidyne </td><td> FTK-ACT </td><td> gewijzigd door verwijdering kaolien </td></tr><tr><td> aPTT cartridge </td><td> Technidyne </td><td> A104 </td><td></td></tr></tbody></table>

rapid point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant efficacy in whole blood

Er is behoefte aan een klinische test om de mate waarin een patiënt bloed effectief wordt geanticoaguleerd de laag moleculair gewicht heparine (LMWH), enoxaparine bepalen. Er zijn ook dringend klinische situaties waarin het belangrijk als deze snel kunnen worden bepaald. Deze test is ontworpen om dit te bereiken. We alleen getest menselijke bloedmonsters die werden gespiked met bekende concentraties enoxaparine. Het essentiële kenmerk van de onderhavige assay is het kwantificeren van de werkzaamheid van enoxaparine in bloed van een patiënt monster degraderen inactiviteit compleet met heparinase. Twee bloedmonsters werden bij Vacutainer buizen (Becton-Dickenson, Franklin Lakes, NJ) die zijn verrijkt met enoxaparine; een monster werd geknipt met heparinase gedurende 5 min bij 37 ° C en het andere monster van de patiënt weergegeven basislijn anticoagulanteerd status. Het percentage kortere stollingstijd in de heparinase-behandelde monster, in vergelijking met de baseline staat, leverde de anticoagulerende bijdrage van enoxaparine. We gebruikten de draagbare batterijen Hemochron 801 Inrichting voor het meten van stollingstijden (International Corp Technidyne, Edison, NJ). De inrichting heeft 2 thermostaat (37 ° C) assay waterputten. We de assays uitgevoerd in twee soorten assay cartridges die bij de fabrikant van het instrument. Een cartridge werd gemodificeerd om de gevoeligheid te verhogen. We verwijderden het kaolien de FTK-ACT cartridge door uitgebreid spoelen met gedestilleerd water, waardoor alleen het glas van de buis, en misschien de detectie magneet als activatoren. We noemden dit ons minimaal geactiveerd assay (MAA). Het gebruik van een minimaal geactiveerde assay is bestudeerd door ons en anderen. 2-4 De tweede patroon dat werd onderzocht was geactiveerde partiële tromboplastinetijd (aPTT) assay (A104). Dit werd gebruikt als geleverd door de fabrikant. De thermostaat putten van het instrument were zowel voor de heparinase spijsvertering en stollingstesten. De test kan worden uitgevoerd binnen 10 minuten. De MAA test ingrijpende wijzigingen in de stollingstijd toonde na heparinase vertering van enoxaparine over een typisch klinisch concentratiebereik. Bij 0,2 anti-Xa IE enoxaparine per ml bloed monster, heparinase spijsvertering veroorzaakt een daling van gemiddeld 9,8% (20,4 sec) in stollingstijd; bij 1,0 IE per ml enoxaparine was er een daling van 41,4% (148,8 sec). Dit rapport presenteert alleen de experimentele toepassing van de test; zijn waarde in een klinische setting moet nog worden vastgesteld.

Figuur 1 toont de resultaten voor het verband tussen het percentage afname in klontertijd na verwijdering van enoxaparine met heparinase voor een reeks spiked concentraties enoxaparine (0,2, 0,4 en 1,0 anti-Xa IE per ml). Resultaten worden gepresenteerd voor zowel de MAA en aPTT assay cartridges. De gemeten concentraties enoxaparine van chromogene assay van anti-Xa-activiteit zijn ook opgenomen in de abscis van elk perceel. Figuur 2 toont grafieken van dezelfde gegevens als percentage afname in klontertijd vs chromogene mate van anti-Xa activiteit. Sterke lineaire correlatie met hoge statistische significantie werd voor alle vier relaties. <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Point-of care bepalingen van enoxaparine contribution om stolling tijden van spiked volbloed gebaseerd op het percentage verandering (verkorting) van de stollingstijd na incubatie met heparinase. De spiked enoxaparine concentraties toegevoegd aan bloed en de gemeten anti-Xa plasmaconcentraties (gemiddelde ± SE, tussen haakjes) worden in de abscis van elke grafiek. Alle procentuele veranderingen in stollingstijden worden gepresenteerd als gemiddelden en SE, en het gemiddelde verkorting van de stollingstijd in seconden. Gegevens van dezelfde patiënt zijn verbonden door stippellijnen. De gegevens voor de vier patiënten geïdentificeerd met sterretjes in plot A (MAA resultaten) zijn dezelfde als in de vier patiënten B plot (aPTT assays). Alle resultaten vormen afzonderlijke analyses. De Pearson correlatiecoëfficiënten waren r = 0,869 (p = 1,9 x 10 -5) en r = 0,916 (p = 2,8 x 10 -5) voor de relaties met de MAA en aPTTassay, respectievelijk. Overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1. . Figuur 2 De resultaten voor de procentuele verandering in stollingstijden in de point-of-care assays getoond in figuren 1A en B als functie van de plasma anti-factor Xa concentraties A, MAA resultaten;. B, aPTT assays. Alle resultaten zijn uit een stollingstijd assays en enkelvoudige metingen van anti-factor Xa concentraties. De Pearson correlatiecoëfficiënten waren r = 0,910 (p = 2,5 x 10 -6) en r = 0,922 (p = 2,0 x 10 -5) voor de relaties met de MAA en aPTT-test, respectievelijk overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1.

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood at JoVE.com

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Demonstratie van een snelle kwantitatieve analyse van de remming van bloedstolling door de laag moleculair gewicht heparine, enoxaparine. De bijdrage van enoxaparine wordt beoordeeld door het verwijderen van de invloed door digestie met heparinase. Een vollediger beschrijving van de assay wordt beschreven in onze gepubliceerde papier.<sup&gt; 1</sup&gt; De test moet nog klinische bevestiging.

Snelle Point-of-Care test van Enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Medicine

Unit 1

Cardiovascular Drugs: Anticoagulants and Antianginal Agents

SCIENTISTS IN ACTION

Rapid Fractionation and Isolation of Whole Blood Components in Samples Obtained from a Community-based Setting

Snelle Fractionering en isolatie van volbloed componenten in monsters verkregen van een communautair gevestigde instelling

Collection and processing of whole blood samples in a non-clinical setting offers a unique opportunity to evaluate community-dwelling individuals both ...

Assessment of the Anticoagulant and Anti-inflammatory Properties of Endothelial Cells Using 3D Cell Culture and Non-anticoagulated Whole Blood

Beoordeling van de anticoagulatie en anti-inflammatoire eigenschappen van endotheliale cellen met behulp van 3D-celkweek en niet-vertonen volbloed

In vivo, endothelial cells are crucial for the natural anticoagulation of circulating blood. Consequently, endothelial cell activation leads to blood ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Endotoxine activiteit test voor de detectie van volbloed Endotoxemie bij ernstig zieke patiënten

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Evaluation of a Point-of-Care Testing Analyzer for Measuring Peripheral Blood Leukocytes

Evaluatie van een Point-of-Care Testing Analyzer voor het meten van perifere bloed leukocyten

White blood cell (WBC) is an important indicator of inflammation in the body, and it can help distinguish between bacterial and viral infections. At ...

Point-Of-Care Ultrasound Screening for Proximal Lower Extremity Deep Venous Thrombosis

Point-Of-Care echografie screening voor proximale onderste extremiteit diepe veneuze trombose

Acute lower extremity deep venous thrombosis (DVT) is a serious vascular disorder that requires accurate and early diagnosis to prevent life-threatening ...

Point-of-Care Lung Ultrasound in Adults: Image Acquisition

Point-of-Care longechografie bij volwassenen: beeldacquisitie

Consultative ultrasound performed by radiologists has traditionally not been used for imaging the lungs, as the lungs&#39; air-filled nature normally ...

Point-of-Care Ultrasound: A Review of Ultrasound Parameters for Predicting Difficult Airways

Point-of-Care echografie: een overzicht van ultrasone parameters voor het voorspellen van moeilijke luchtwegen

Airway management remains a crucial part of perioperative care. The conventional approach to assessing potentially difficult airways emphasizes the LEMON ...

Accelerating Tuberculosis Determination Using the Micro-CFU Method

Micro-Colony Forming Unit Assay for Efficacy Evaluation of Vaccines Against Tuberculosis

Optimizing CFU Determination for Efficient Assessment of TB Vaccine Efficacy and Antigen Presentation Analysis (Video) | JoVE

Microkolonievormende eenheidstest voor evaluatie van de werkzaamheid van vaccins tegen tuberculose

Tuberculosis (TB), the leading cause of death worldwide by an infectious agent, killed 1.6 million people in 2022, only being surpassed by COVID-19 during ...

Imaging the Abdominal Aorta with Point-of-Care Ultrasound

An Approach to Point-Of-Care Ultrasound Evaluation of the Abdominal Aorta

Author Spotlight: Using Point-of-Care Ultrasound for Comprehensive Evaluation of the Abdominal Aorta

Een benadering van point-of-care echografie van de abdominale aorta

Disorders of the abdominal aorta, including aneurysms and dissection, have potentially high rates of morbidity and mortality. While computed tomography ...

Gastric Ultrasound Technique for Mitigating Peri-Procedural Aspiration Risk

Gastric Point of Care Ultrasound in Adults: Image Acquisition and Interpretation

Point-of-Care Ultrasound for Gastric Content Assessment and Risk Stratification in Perioperative Care (Video) | JoVE

Echografie van het maagpunt bij volwassenen: beeldacquisitie en -interpretatie

Over the past two decades, diagnostic point-of-care ultrasound (POCUS) has emerged as a rapid and non-invasive bedside tool for addressing clinical ...