Name: rapid point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant efficacy in whole blood
Uploaded: 2012-10-12T12:00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood at JoVE.com

החקירות בוצעו אך ורק עם תמיכה ממשאבים מחלקתיים ומוסדיים. מנגנון הקרישה (Hemochron 801) הושאל ללא התחייבות מהיצרן. מחסניות assay נרכשו בעלויות הקמעונאי שלהם. הדמות המקדימה בוידאו שונה מSanderink, et al. 12 הדמות השנייה בסרטון (כמובן זמן עיכול heparinase) שוחזרה באישור Inchiosa et al. 1

1. כינון Heparinase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> heparinase Lyophilized אני מתקבל באופן מסחרי (סימנס, ניוארק דלוור, DadeHepzyme REF B4240-10) בבקבוקונים המכילים 1 מיקרוגרם של החלבון המטוהר. החלבון הוא מומס ב0.25 מ&quot;ל של תמיסת מלח (0.9% NaCl). </li></ol> 2. איסוף דגימות דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שתי דגימות דם נמשכות על ידי ואקום לציטרט הנתרן (0.3 מ&quot;ל 0.109M; 3.2%) נאגרה Vacutainer צינורות (קיטון דיקינסון-; פרנקלין לייקס, ניו ג&#39;רזי); הצינורות שניהם מראש מחוזקים איתי ריכוז ידוע של enoxaparin; נפח הדם כי הוא נמשך הוא 2.7 מ&quot;ל. התוכן הכולל הוא אז 3.0 מ&quot;ל. </li></ol> 3. עיכול Heparinase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל תכולתו של בקבוקון heparinase שעלול להישאף לתוך מזרק (כ -0.2 מ&quot;ל, 80% מהבקבוקון; 0.8 מיקרוגרם של חלבון), עוברת לצינור Vacutainer אחד; 0.2 מ&quot;ל של תמיסת מלח (0.9% NaCl) הוא הוסיף המבחנה השנייה, המשמשת כבאזלמדינת ine לפני נטרול השפעת enoxaparin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני צינורות Vacutainer ממוקמים בבארות thermostated של מנגנון Hemochron לתקופה של 5 דקות. (הלימות זמן עיכול 5 דקות עם heparinase הוקמו בעבודה שלנו שפורסמה בעבר. 1) </li></ol> 4. מבחני קרישה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף דגירת heparinase, מיליליטר 2.0 של דם מועבר למחסנית assay. במקרה של צינור מאא, זה מראש מולא עם 0.1 מ&quot;ל של 250 המ&quot;מ CaCl 2 ליזום קרישה. המסחרית aPTT assay המחסנית (A104) נועדה ליזום קרישה בדם כולו שנמשכה לתוך צינורות Vacutainer המכילים ציטרט הנתרן כנוגד קרישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנגנון Hemochron מסמן את ההשלמה של קרישת דם ומשמר את זמני קרישה בשניות. ההבדלים בזמני קרישה בין מדגם heparinase טופל ומדגם המחקר, מחולקים בti הקרישהלהמדגם המחקר, מניב ירידת האחוזים כתוצאה מחיסול של enoxaparin. כפי שנראה להלן, מתאמים ליניארי חזקים הושגו על הקשר בין ירידה באחוז זמן קרישה והריכוז של enoxaparin בדגימות ממוסמרות של דם מלא, כמו גם למתאם עם ריכוזים מדודים של enoxaparin ידי assay chromgenic של אנטי Xa פעילות. מבחנים אנטי Xa של ריכוז enoxaparin נערכו עם ערכה מסחרית לבדיקת chromogenic שני שלבים (BIOPHEN; Aniara, מייסון, אוהיו). </li></ol>

<ol>
	<li>Inchiosa, M. A. J. r., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+development+of+a+point-of-care+assay+of+enoxaparin+anticoagulant+activity+in+whole+blood.">Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).</li><li>Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aprotinin+prolongs+activated+and+nonactivated+whole+blood+clotting+time+and+potentiates+the+effect+of+heparin+in+vitro.">Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro.</a> Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).</li><li>Pothula, S., Inchiosa, M. A., Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effect+of+protamine+excess+on+blood+coagulation+assays.">In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays.</a> Anesth Analg. 96, SCA39 (2010).</li><li>Inchiosa, M., Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+low+plasma+levels+of+low+molecular+weight+heparin.">Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin.</a> Anesth Analg. 102, SCA10 (2010).</li><li>Gogarten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+new+antithrombotic+drugs+on+regional+anesthesia.">The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia.</a> Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).</li><li>Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+profile+of+different+low-molecular+weight+heparins+used+at+therapeutic+dose.">Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose.</a> Drug Saf. 28, 333-349 (2005).</li><li>Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dosage+of+enoxaparin+among+obese+and+renal+impairment+patients.">Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients.</a> Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).</li><li>El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+HEMOCHRON+JR.+HEMONOXTM+point+of+care+test+in+monitoring+the+anticoagulant+effect+of+enoxaparin+during+interventional+coronary+procedures.">The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).</li><li>Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+the+anticoagulant+activities+of+the+low+molecular+weight+heparin+fractions+and+fragments+with+flavobacterial+heparinase.">Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase.</a> Thromb Res. 44, 599-610 (1986).</li><li>Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Product+individuality+of+commercially+available+low-molecular-weight+heparins+and+their+generic+versions:+therapeutic+implications.">Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).</li><li>Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+anticoagulant+heparinoids+by+immunoprofiling.">Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling.</a> Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).</li><li>Sanderink, G. -. J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -. L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+the+prophylactic+dose+of+enoxaparin+once+daily+over+4+days+in+patients+with+renal+impairment.">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment.</a> Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).</li></ol>

המחברים אין לי מה לחשוף.

בדיקה זו של יעילות enoxaparin עשויה לשמש כאפשרות חשובה לקבוע את הבטיחות היחסית של ביצוע הליך פולשני שיש סיכון נלווה לדימום או לפיתוח של שטף דם. זה יהיה חשוב במיוחד כאשר זריקת אפידורל נשקלת. רוב ההנחיות ממליצות לתקופת מתנה של 12 שעות בין הזריקה של enoxaparin וייזום הליך פולשני ליקוי 5 כליות, השמנת יתר והריון עלול להשפיע על דרישות המינון של enoxaparin 6,7 מאז ניתן להשלים את מהלך הבדיקה בתוך 10.. - תקופת דקות, זה יכול לשמש גם במרפאה או במשרדו של הרופא, שבו יהיה לספק מידע על הלימות קרישה בחולים הנמצאים בסיכון להתפתחות של thromboembolism ורידים. התאמת מינון מיידית ניתן הנהיגה, לפי צורך. ריכוז enoxaparin בפלזמה ניתן למדוד chromogenicssay של מידת עיכוב של גורם הקרישה, Xa. עם זאת, זה רק מניב ריכוזו, ולאו דווקא יעילות קרישתו, שמשתנית מאוד בין חולים בודדים. 6-8 המחקרים שלנו בוצעו רק עם enoxaparin. עם זאת, ניתן לצפות שהבדיקה יכולה להיות מיושמת על כל LMWH שהוא מושפל על ידי heparinase הראשון זה כבר ידוע להיות המקרה לdalteparin, nadroparin וtinzaparin. 9-11 עצבנו את assay ביחס לתכונות של מכשיר זמן קרישת Hemochron. המכשיר הוא זול יחסית; גם, צינורות דם חד פעמיים גבייה, אמפולה heparinase ומכלה assay כדי להשלים ניתוח למטופל אחד הוא כ 15 דולרים בארה&quot;ב. לכן, זה יהיה צפוי להיות מתאים כדי לפקח על מצב קרישה במסגרות קליניות שונות.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Hepzyme </td><td> סימנס </td><td> B4240 </td><td> אני heparinase </td></tr><tr><td> מחסנית &quot;מאא&quot; </td><td> Technidyne </td><td> FTK-ACT </td><td> שונה על ידי הסרת קאולין </td></tr><tr><td> aPTT מחסנית </td><td> Technidyne </td><td> A104 </td><td></td></tr></tbody></table>

rapid point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant efficacy in whole blood

יש צורך בבדיקה קלינית כדי לקבוע את המידה שבה הדם של מטופל anticoagulated ביעילות על ידי---הפרין הנמוך משקל המולקולרי (LMWH), enoxaparin. ישנם גם מצבים קליניים דחופים שבו יהיו חשוב אם זה יכול להיקבע במהירות. הבדיקה הנוכחית נועדה להשיג את זה. אנו assayed דגימות דם אדם שתובלו בריכוזים ידועים של enoxaparin בלבד. המאפיין המהותי של assay הנוכחי הוא כימות של היעילות של enoxaparin בדגימת הדם של מטופל באמצעות השפלתו להשלים עם חוסר הפעילות heparinase. שתי דגימות דם נשאב לתוך Vacutainer צינורות (קיטון-דיקנסון; פרנקלין לייקס, ניו ג&#39;רזי) שתובלו בenoxaparin; מדגם אחד היה מתעכל עם heparinase למשך 5 דקות על 37 מעלות צלזיוס, המדגם האחר ייצג מעמד anticoagulated הבסיסי של החולה. קיצור האחוזים מזמן קרישה במדגם heparinase טופל, לעומת במדינת aseline, הניבה תרומת הקרישה של enoxaparin. אנחנו השתמשנו במכשיר הנייד, הסוללה המופעל Hemochron 801 למדידות של זמני קרישה (הבינלאומי Technidyne קורפ, אדיסון, ניו ג&#39;רזי). המנגנון יש 2 (37 ° C) בארות צינור assay מבוקרים תרמוסטטית. ערכנו את המבחנים בשני סוגים של מחסניות assay שזמינים מהיצרן של המכשיר. מחסנית אחת שונה כדי להגביר את הרגישות שלו. הוצאנו את קאולין מFTK-ACT המחסנית על ידי שטיפה נרחבת עם מים מזוקקים, ומשאיר רק את משטח הזכוכית של הצינור, ואולי מגנט זיהוי, כמפעילים. קראנו assay זה הופעל מינימאלי (מאא). השימוש בבדיקה הופעלה מינימאלי נחקר על ידינו ואחרים. 2-4 המחסנית השנייה שלמדה הייתה assay (A104) זמן thromboplastin חלקי פעיל (aPTT). זה היה בשימוש כפי שסופק מהיצרן. בארות thermostated של המכשיר werדואר משמש הוא לעיכול heparinase ומבחני קרישה. הבדיקה יכולה להסתיים בתוך 10 דקות. Assay מאא הראה שינויים חזקים בזמן קרישה לאחר עיכול heparinase של enoxaparin מעל טווח ריכוז קליני טיפוסי. ב0.2 אנטי Xa IU של enoxaparin למ&quot;ל של דגימת דם, עיכול heparinase נגרם ירידה ממוצעת של 9.8% (20.4 שניות) בזמן קרישה; ב1.0 IU למ&quot;ל של enoxaparin הייתה ירידת 41.4% (148.8 שניות). דוח זה מציג רק את היישום הניסיוני של assay; הערך שלו בסביבה קלינית עדיין צריך לקום.

איור 1 מציג את התוצאות ליחסים בין הירידה באחוז זמן קרישה בעקבות חיסול enoxaparin עם heparinase לסדרת ריכוזים ממוסמרים של enoxaparin (0.2, 0.4 ו -1.0 אנטי Xa IU למ&quot;ל). תוצאות מוצגות לשניהם מאא ומחסניות assay aPTT. הריכוזים המדודים של enoxaparin מassay chromogenic של פעילות אנטי Xa כלולים גם בabscissa של כל חלקה. איור 2 מציג את החלקות של אותם הנתונים כירידה באחוז זמן קרישה לעומת מדד chromogenic של פעילות אנטי Xa. מתאמים חזקים ליניארי, עם משמעויות סטטיסטיות גבוהות, נמצאו לכל הארבע מערכות היחסים. <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig1.jpg" alt="איור 1" /> האיור 1. נקודה של קביעות טיפוח של enoxaparin contr<html> ibution לזמני קרישה של דם כל קוצים המבוססים על אחוז השינוי (קיצור) זמן קרישה לאחר דגירה עם heparinase. ריכוזי enoxaparin הממוסמרים הוסיפו לכל דם והריכוזים אנטי Xa הפלזמה נמדדו (ממוצע ± SE, בסוגריים) ממוקמים בabscissa של כל גרף. כל שיעורי השינוי בזמני קרישה מוצגים כאמצעי וSE, יחד עם קיצור זמן הממוצע קרישה בשניות. נתונים מאותו המטופל מחוברים על ידי קווים מקווקווים. הנתונים לארבעת החולים שזוהו עם כוכביות בעלילה (תוצאות מאא) זהים לארבעה החולים בחלקה ב &#39;(מבחני aPTT). כל התוצאות מייצגים קביעות יחידות. מקדמי מתאם פירסון r = 0.869 (p = 1.9 x 10 -5) וr = 0.916 (p = 2.8 x 10 -5) למערכות היחסים עם מאא וaPTTassay, בהתאמה. לשכפל באישור Inchiosa et al. 1 יפ-together.within עמודים = &quot;תמיד&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig2.jpg" alt="איור 2" /> . איור 2 התוצאות לשיעורי השינוי בזמני קרישה במבחני שלב של הטיפול מוצגים באיורי 1 א &amp; B הם זממו נגד ריכוזי Xa נגד גורם פלזמה, תוצאות מאא;. B, aPTT מבחנים. כל התוצאות ממבחנים בודדים קרישת זמנים וקביעות יחידות של ריכוזי Xa נגד גורם. מקדמי מתאם פירסון r = 0.910 (p = 2.5 x 10 -6) וr = 0.922 (p = 2.0 x 10 -5) למערכות היחסים עם מאא וassay aPTT, לשכפל בהתאמה באישור Inchiosa et al. 1

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood at JoVE.com

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

הפגנה של assay כמותית מהיר של עיכוב קרישת דם על ידי-הפרין נמוך משקל המולקולרי, enoxaparin. התרומה של enoxaparin מוערכת על ידי הסרת ההשפעה שלו דרך מערכת עיכול עם heparinase. תיאור מלא יותר של assay הוא מפורט במאמר שפורסם.<sup&gt; 1</sup&gt; Assay עדיין דורש אישור קליני.

Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Medicine

Unit 1

Cardiovascular Drugs: Anticoagulants and Antianginal Agents

SCIENTISTS IN ACTION

Rapid Fractionation and Isolation of Whole Blood Components in Samples Obtained from a Community-based Setting

פלזמה מהירה ובידוד של מרכיבי דם שלמים בדגימות שהתקבלה מהגדרה מבוססת-קהילה

Collection and processing of whole blood samples in a non-clinical setting offers a unique opportunity to evaluate community-dwelling individuals both ...

Assessment of the Anticoagulant and Anti-inflammatory Properties of Endothelial Cells Using 3D Cell Culture and Non-anticoagulated Whole Blood

הערכה של מאפייני תאי אנדותל באמצעות תרבית תאים 3D ושאינם-anticoagulated דם קרישה ואנטי דלקתיות

In vivo, endothelial cells are crucial for the natural anticoagulation of circulating blood. Consequently, endothelial cell activation leads to blood ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

שיטת פעילות אנדוטוקסין לאיתור דם כולו אנדוטוקמיה בחולים חולי אנוש

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Evaluation of a Point-of-Care Testing Analyzer for Measuring Peripheral Blood Leukocytes

הערכה של מנתח בדיקת נקודת טיפול למדידת לויקוציטים בדם היקפי

White blood cell (WBC) is an important indicator of inflammation in the body, and it can help distinguish between bacterial and viral infections. At ...

Point-Of-Care Ultrasound Screening for Proximal Lower Extremity Deep Venous Thrombosis

בדיקת אולטרסאונד נקודתית לפקקת ורידים עמוקה בגפיים התחתונות הפרוקסימליות

Acute lower extremity deep venous thrombosis (DVT) is a serious vascular disorder that requires accurate and early diagnosis to prevent life-threatening ...

Point-of-Care Lung Ultrasound in Adults: Image Acquisition

אולטרסאונד ריאות נקודת טיפול במבוגרים: רכישת תמונה

Consultative ultrasound performed by radiologists has traditionally not been used for imaging the lungs, as the lungs&#39; air-filled nature normally ...

Point-of-Care Ultrasound: A Review of Ultrasound Parameters for Predicting Difficult Airways

אולטרסאונד נקודתי: סקירת פרמטרים של אולטרסאונד לחיזוי דרכי נשימה קשות

Airway management remains a crucial part of perioperative care. The conventional approach to assessing potentially difficult airways emphasizes the LEMON ...

Accelerating Tuberculosis Determination Using the Micro-CFU Method

Micro-Colony Forming Unit Assay for Efficacy Evaluation of Vaccines Against Tuberculosis

Optimizing CFU Determination for Efficient Assessment of TB Vaccine Efficacy and Antigen Presentation Analysis (Video) | JoVE

בדיקת יחידה להקמת מושבות מיקרו להערכת יעילות חיסונים נגד שחפת

Tuberculosis (TB), the leading cause of death worldwide by an infectious agent, killed 1.6 million people in 2022, only being surpassed by COVID-19 during ...

Imaging the Abdominal Aorta with Point-of-Care Ultrasound

An Approach to Point-Of-Care Ultrasound Evaluation of the Abdominal Aorta

Author Spotlight: Using Point-of-Care Ultrasound for Comprehensive Evaluation of the Abdominal Aorta

גישה להערכת אולטרסאונד נקודתי של אבי העורקים הבטני

Disorders of the abdominal aorta, including aneurysms and dissection, have potentially high rates of morbidity and mortality. While computed tomography ...

Gastric Ultrasound Technique for Mitigating Peri-Procedural Aspiration Risk

Gastric Point of Care Ultrasound in Adults: Image Acquisition and Interpretation

Point-of-Care Ultrasound for Gastric Content Assessment and Risk Stratification in Perioperative Care (Video) | JoVE

אולטרסאונד של נקודת טיפול קיבה במבוגרים: רכישת תמונה ופענוח

Over the past two decades, diagnostic point-of-care ultrasound (POCUS) has emerged as a rapid and non-invasive bedside tool for addressing clinical ...