Name: expression and purification of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein in saccharomyces cerevisiae
Uploaded: 2012-03-10T14:00:00
Duration: 14 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Мы благодарим Фонд муковисцидоза (ФФС) для финансирования этой работы через CFTR 3D структура консорциума (грант № FORD08XX0). Мы признаем огромный вклад всех наших коллег в рамках консорциума в этой работе, в частности, в разработке CFTR генов. Мы также признаем, бесценный вклад д-ра. Джеймс Birtley (НЦНИ Демокрита, Греция), Марк Янг (Университет Кардиффа, Великобритания) и Дэвид Дрю (Imperial College, Лондон, Великобритания) на ранних стадиях работы. Мы особенно благодарны д-р Инна Urbatsch (Texas Tech. Университет, Лаббок) за критическое чтение рукописи.

<ol>
	<li>Ford, R. C., Birtley, J., Rosenberg, M. F., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CFTR+three-dimensional+structure.">CFTR three-dimensional structure.</a> Methods Mol. Biol. 741, 329-346 (2011).</li><li>Rosenberg, M. F., Kamis, A. B., Aleksandrov, L. A., Ford, R. C., Riordan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+crystallization+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator.">Purification and crystallization of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> CFTR). J. Biol. Chem. 279, 39051-39051 (2004).</li><li>Zhang, L., Aleksandrov, L. A., Riordan, J. R., Ford, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domain+location+within+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+protein+investigated+by+electron+microscopy+and+gold+labelling.">Domain location within the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein investigated by electron microscopy and gold labelling.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1808, 399-404 (2011).</li><li>Kiser, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+degradation+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Expression and degradation of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in Saccharomyces cerevisiae.</a> Arch. Biochem. Biophys. 390, 195-205 (2001).</li><li>Huang, P., Stroffekova, K., Cuppoletti, J., Mahanty, S. K., Scarborough, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+in+yeast.">Functional expression of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in yeast.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1281, 80-90 (1996).</li><li>Ahner, A., Nakatsukasa, K., Zhang, H., Frizzell, R. A., Brodsky, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+heat-shock+proteins+select+deltaF508-CFTR+for+endoplasmic+reticulum-associated+degradation.">Small heat-shock proteins select deltaF508-CFTR for endoplasmic reticulum-associated degradation.</a> Mol. Biol. Cell. 18, 806-814 (2007).</li><li>Fu, L., Sztul, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER-associated+complexes+(ERACs)+containing+aggregated+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+(CFTR)+are+degraded+by+autophagy.">ER-associated complexes (ERACs) containing aggregated cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) are degraded by autophagy.</a> Eur. J. Cell. Biol. 88, 215-226 (2009).</li><li>Sun, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derlin-1+promotes+the+efficient+degradation+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+(CFTR)+and+CFTR+folding+mutants.">Derlin-1 promotes the efficient degradation of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) and CFTR folding mutants.</a> J. Biol. Chem. 281, 36856-36863 (2006).</li><li>Zhang, Y., Michaelis, S., Brodsky, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CFTR+expression+and+ER-associated+degradation+in+yeast.">CFTR expression and ER-associated degradation in yeast.</a> Methods Mol. Med. 70, 257-2565 (2002).</li><li>Drew, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-based+optimization+scheme+for+the+overexpression+and+purification+of+eukaryotic+membrane+proteins+in+Saccharomyces+cerevisiae.">GFP-based optimization scheme for the overexpression and purification of eukaryotic membrane proteins in Saccharomyces cerevisiae.</a> Nat. Protoc. 3, 784-798 (2008).</li><li>Knight, A. W., Billinton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+the+wood+through+the+trees:+A+review+of+techniques+for+distinguishing+green+fluorescent+protein+from+endogenous+autofluorescence.">Seeing the wood through the trees: A review of techniques for distinguishing green fluorescent protein from endogenous autofluorescence.</a> Anal. Biochem. 291, 175-197 (2001).</li><li>Robinson, K. M., Lemire, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+nucleotide+sequence+of+the+Saccharomyces+cerevisiae+gene+for+the+succinate+dehydrogenase+flavoprotein+subunit.">Isolation and nucleotide sequence of the Saccharomyces cerevisiae gene for the succinate dehydrogenase flavoprotein subunit.</a> J. Biol. Chem. 267, 10101-10107 (1992).</li><li>Gnann, A., Riordan, J. R., Wolf, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+degradation+depends+on.">Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator degradation depends on.</a> the lectins Htm1p/EDEM and the Cdc48 protein complex in. 15, 4125-4135 (2004).</li><li>Yoo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-conventional+trafficking+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+through+the+early+secretory+pathway.">Non-conventional trafficking of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator through the early secretory pathway.</a> J. Biol. Chem. 277, 11401-11409 (2002).</li><li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+protein+and+structural+changes+associated+with+phosphorylation+and+nucleotide+binding.">Architecture of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein and structural changes associated with phosphorylation and nucleotide binding.</a> Journal of Structural Biology. 167, 242-251 (2009).</li><li>Wellhauser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small-molecule+modulator+interacts+directly+with+deltaPhe508-CFTR+to+modify+its+ATPase+activity+and+conformational+stability.">A small-molecule modulator interacts directly with deltaPhe508-CFTR to modify its ATPase activity and conformational stability.</a> Mol. Pharmacol. 75, 1430-148 (2009).</li><li>Ramjeesingh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monomer+is+the+minimum+functional+unit+required+for+channel+and+ATPase+activity+of+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator.">A monomer is the minimum functional unit required for channel and ATPase activity of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> Biochemistry. 40, 10700-10706 (2001).</li><li>Huang, P., Liu, Q., Scarborough, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysophosphatidylglycerol:+a+novel+effective+detergent+for+solubilizing+and+purifying+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator.">Lysophosphatidylglycerol: a novel effective detergent for solubilizing and purifying the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> Anal. Biochem. 259, 89-97 (1998).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Эта статья относится к способу выражения мышиный белок CFTR в клетках дрожжей, которые должны содействовать проведению исследований на муковисцидоз. Цель состоит в том, чтобы связать эту бумагу с выходом мышиной ДНК CFTR конструкцию, которая будет доступна через кистозный фиброз Foundation ( <a href="http://www.cff.org/research/CFFT/">http://www.cff.org/research/CFFT/</a> ). Другие ортологи будут доступны позже. Трансформация клеток дрожжей с CFTR содержащие вектор прост, но очень важно для выявления колоний выражения высокого уровня CFTR. Переменный уровень экспрессии могут возникнуть в результате нескольких факторов, но число копий плазмиды в клетки, вероятно, объясняет в значительной степени вариации. Критические шаги, описанные здесь, должны позволять производство CFTR-экспрессирующих клеток дрожжей и CFTR содержащих микросомальных мембран. После преобразований, роста заготовки и лизис дрожжевых клеток были освоены, purification белка должно быть возможно, и на рисунке 3 мы дали пример чистоты, которые должны быть достигнуты в этом случае в качестве полезного ориентира. Это не наше намерение в этой рукописи предоставить подробную методику для очистки белков. Однако, есть некоторые критические вниз стадий очистки, которые являются специфическими для S.cerevisae система выражения, такие как лизис клеток и микросом очистки, и они были включены в подробности в этой рукописи. Следует отметить, однако, что кроме этих двух методов мы использовали альтернативные методы клетки дрожжей нарушения могут быть использованы, например, использование французской ячейки давления. Рекомбинантного белка имеет TEV-расщепляемого С-концевой домен, GFP позволяет белку отслеживаться после индукции (рис. 4). Дрожжи обладают собственным 70kDa белка (вероятно, сукцинатдегидрогеназы 12), флуоресцирует при тех же условиях 11, и это может стать полезной в томNAL стандартные калибровки для относительного уровня экспрессии гена CFTR в целом клеточных экстрактов или микросомах (рис. 3). Как видно из данных, приведенных на рисунке 4, что сроки уборки клетки после индукции галактозой имеет решающее значение. Урожайность падение CFTR стремительно после того, как около 16 часов индукции, так что едва заметного CFTR в клетках дрожжей после 24 часов индукции. Выход очищенного белка составляет около 1-2 мг CFTR белка на каждые 15 литров культуры ферментер. Восстановление может быть оценена как около 70% от общего CFTR-GFP белка до микросом этапе, и около 25% на восстановление очищенного белка. Характеристика С. CEREVISIAE выраженным CFTR продолжается. Как видно на рис. 4 место белка в клетке можно контролировать с помощью флуоресцентной микроскопии. Хотя большая часть флуоресценции находится на периферии клетки, как ожидалось 10, некоторые из белков показывает точечной локализации, либо, илитолько внутри плазмы мембраны, которая может быть связано с CFTR переработки через поздно Гольджи / эндосом путь 14 или, возможно, отсек вниз по течению от начинающего транспортных везикул с ER 4. Лечение PNGaseF, фермент, который deglycosylates белков, показали минимальные изменения в миграционной группы белка CFTR на SDS-PAGE, подразумевая, что она негликозилированной, или имеет минимальный гликозилирования 15. Эксперименты по фосфорилирования белка продолжаются. В некоторых моющих средств испытания до сих пор, очищенного белка отображает АТФазы (то есть подавляется CFTR-специфического ингибитора 16) по ставкам, которые аналогичны тем, которые ранее опубликованные 2,15. Измерение активности канала CFTR потребует восстановления очищенного белка, который будет означать окончательный этап очистки в моющих средств, который имеет относительно высокую критическую концентрацию мицеллообразования (ККМ) 17. Дрожжи микросомы containinг CFTR могут быть solublised с несколькими обычно используются моющие средства 18, в том числе моющие средства, такие как додецилсульфата maltoside 2, который, как правило, считается &quot;мягкой&quot;. Однако наиболее высокие CMC моющих средств оказались неэффективными для solubilsation, до сих пор, предполагая, что обмен в этих моющих средств должен быть рассмотрен на более позднем этапе в какой-либо очистки схеме.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента / оборудование </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> FGY217 S.cerevisiae напряжения, с pep4 удаление 10 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Дрожжи азотистого основания без аминокислот </td><td> Formedium </td><td> CYN0410 </td></tr><tr><td> Заполните дополнения смеси без урацила </td><td> Formedium </td><td> DCS0169 </td></tr><tr><td> Бактериологический агар </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5306 </td></tr><tr><td> D-галактозы </td><td> Рыбак </td><td> BP656-500 </td></tr><tr><td> D-глюкозы </td><td> Рыбак </td><td> D16-500 </td></tr><tr><td> Пепстатина </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4265 </td></tr><tr><td> Leupeptin </td><td> Merck </td><td> 108975 </td></tr><tr><td> Химостатина </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C7268 </td></tr><tr><td> Phenylmethanesulfonylfluoride (PMSF) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7626 </td></tr><tr><td> Epoxysuccinyl-leucylamido-бутана (Е-64) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E3132 </td></tr><tr><td> Aminoethylbenzenesulfonyl фторид (AEBSF) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A8456 </td></tr><tr><td> Benzamidine гидрохлорид </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 434760 </td></tr><tr><td> Диметилсульфоксида (ДМСО) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> ДТТ (DTT) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 43815 </td></tr><tr><td> этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) </td><td> Рыбак </td><td> BP120500 </td></tr><tr><td> Трис-основание </td><td> Formedium </td><td> TRIS01 </td></tr><tr><td> Трис-HCl </td><td> Рыбак </td><td> P631 </td></TR&gt; <tr><td> D-сорбита </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S1876 </td></tr><tr><td> Глицерин </td><td> Рыбак </td><td> 065017 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S6191 </td></tr><tr><td> н-додецил-β-D-maltopyranoside </td><td> Affymetrix </td><td> D310S </td></tr><tr><td> Bromophenol синий </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 114391 </td></tr><tr><td> PageRuler Plus prestained стандартам белка </td><td> Fermentas </td><td> SM1811 </td></tr><tr><td> NUSEP трис-глицин 4-20% гель градиента </td><td> NUSEP </td><td> NB10-420 </td></tr><tr><td> Мгновенный Синий Кумасси пятна </td><td> Novexin </td><td> ISB1L </td></tr><tr><td> Стеклянные бусы, кислота промывается </td><td> Сигма </td><td> G8772 </td></tr><tr><td> 50 мл стерильные пробирки Сокол </td><td> Sarstedt </td><td> 62.547.254 </td></tr><tr><td> 2 млСтерильные завинчивающейся флаконах </td><td> Sarstedt </td><td> 72.694.005 </td></tr><tr><td> 250 мл стерильной колбы Эрленмейера тупик </td><td> BD Biosciences </td><td> 355119 </td></tr><tr><td> 2l стерильные колбы Эрленмейера тупик </td><td> BD Biosciences </td><td> 355131 </td></tr><tr><td> 2 мл труб микроцентрифужную </td><td> Sarstedt </td><td> 72,695 </td></tr><tr><td> 0,2 мкм шприц фильтр </td><td> Портняжная мышца </td><td> FC121 </td></tr><tr><td> ультрацентрифуге труб </td><td> Beckman Coulter </td><td> 355618 </td></tr><tr><td> пробирок </td><td> Beckman Coulter </td><td> 357000 </td></tr><tr><td> 1л горшки центрифуги </td><td> Beckman Coulter </td><td> 969329 </td></tr><tr><td> Орбитальное вращение инкубатор с контролем температуры </td><td> New Brunswick Scientific </td><td></td></tr><tr><td> Deltavision RT восстановление микроскоп </td><td> Прикладная Видение </td><td></td></tr><tr><td> Настольная центрифуга </td><td> HERMLE </td><td> Z300 </td></tr><tr><td> Настольная микроцентрифужную </td><td> Рыбак </td><td> 13-100-511 </td></tr><tr><td> Вортекс </td><td> Звезда Labs </td><td></td></tr><tr><td> Тайфун трио сканер </td><td> GE Healthcare </td><td> 63-0055-87 </td></tr><tr><td> LAS3000 системы визуализации </td><td> Fuji </td><td></td></tr><tr><td> 20л судно ферментер и блок управления </td><td> Applikon </td><td></td></tr><tr><td> Постоянные клеточные системы разрушителя </td><td> Постоянные системы </td><td></td></tr><tr><td> Beadbeater клетки разрушителя </td><td> BioSpec </td><td> 1107900 </td></tr><tr><td> Мини-beadbeater-16 </td><td> BioSpec </td><td> 607 </td></tr><tr><td> JA-17 ротоГ </td><td> Beckman Coulter </td><td> 369691 </td></tr><tr><td> Optima L-100 ультрацентрифуге </td><td> Beckman Coulter </td><td> 392050 </td></tr><tr><td> 50.2Ti ротора </td><td> Beckman Coulter </td><td> <a href="https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/page/itemDetails?itemNumber=337901" target="_blank">337901</a> </td></tr></tbody></table>

expression and purification of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein in saccharomyces cerevisiae

Муковисцидоз трансмембранного регулятора проводимости (CFTR) является хлорид канала, что, когда мутировал, может привести к муковисцидозом в humans.There Поэтому значительный интерес в этом белке, но усилия, чтобы изучить его структуру и деятельность были затруднены трудности выражения и очистка достаточного количества белка 1-3. Как и во многих «трудных» эукариотических мембранных белков, экспрессия в быстрорастущий организм является желательным, но сложно, и в дрожжей S. CEREVISIAE, до сих пор низкие суммы были получены и быстрой деградации рекомбинантного белка наблюдается 4-9. Белки участвуют в обработке рекомбинантный CFTR у дрожжей были описаны 6-9. В этом докладе мы описываем методологию для выражения CFTR в дрожжах и очистки в значительных количествах. В протоколе описывается, как ранее проблемы протеолиза могут быть преодолены, и как выражение уровняCFTR может быть значительно улучшена путем изменения условий роста клеток и контроля индукции условий, в частности срок до клетки урожая. Reagants, связанных с этим протоколом (мышиные CFTR-экспрессирующих клеток дрожжей или дрожжевого плазмид) будет распространяться через американского Муковисцидоз Фонда, который является спонсором исследований. Статьи о дизайне и синтез CFTR конструкцию, занятых в этом отчет будет опубликован отдельно (Urbatsch И.,. Тибодо, П. и др., не опубликовано). В этой статье мы расскажем нашим методом, начиная с преобразованием дрожжевых клеток с CFTR построить - содержащие дрожжи плазмиды (рис. 1). Конструкция имеет зеленый флуоресцентный белок (GFP), слитый с последовательностью гена CFTR на С-конце и следует система, разработанная Дрю и соавт. (2008) 10. GFP позволяет выражения и очистки CFTR, которым необходимо следовать относительно легко. Юпитер визуализировать protocол заканчивается после подготовки микросом из дрожжевых клеток, хотя мы и включают несколько предложений для очистки белка из микросом. Читатели, возможно, хотели бы добавить свои изменения в микросом процедуры очистки, в зависимости от окончательного эксперимента будет осуществляться с белком и местным оборудованием к ним. Дрожжей выразил CFTR белка может быть частично очищают с использованием ионов металлов аффинной хроматографии, используя внутренние теги очистки polyhistidine. После гель-хроматографии дает белок, который оказывается&gt; 90% чистоты, если судить по SDS-PAGE и Кумасси окрашивания геля.

Watch this Scientific Journal Video about Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Попытки выразить муковисцидоз трансмембранного регулятора проводимости (CFTR) в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em&gt; Было, до сих пор, дали сравнительно небольшое количество белка. Этот протокол и связанные с реагентами распространяемых через кистозный фиброз Фонд должен позволить подготовки миллиграмм количество этого «трудных» мембранным белком эукариот.

Выражение и очистка муковисцидоза трансмембранного регулятора проводимости белка в Saccharomyces CEREVISIAE

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Препарирование Saccharomyces CEREVISIAE Сумки

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Количественные Phosphoproteomics в жирные кислоты Вынужденное Saccharomyces CEREVISIAE</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Очистка М. magneticum Штамм AMB-1 Magnetosome белка, связанного MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray анализа для Saccharomyces CEREVISIAE</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

Флуоресценция Пробирной микроскопии для мониторинга Mitophagy в Дрожжи Saccharomyces CEREVISIAE

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Визуализации и анализа молекул мРНК с помощью флуоресцентной<em&gt; В Ситу</em&gt; Гибридизация в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

В сочетании Анализы для мониторинга рефолдинг Белок в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Очистка муковисцидоза трансмембранного регулятора проводимости белка выражается в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Быстрая идентификация химических генетических взаимодействий в<em&gt; Saccharomyces Cerevisiae</em

Determining the mode of action of bioactive chemicals is of interest to a broad range of academic, pharmaceutical, and industrial scientists. ...