Name: blood collection for biochemical analysis in adult zebrafish
Uploaded: 2012-05-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish at JoVE.com

FIPE / HCPA - Fundo de Incentivo en Pesquisa e Eventos Capes - <a href="http://www.capes.gov.br/">Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nivel Superior</a>

1. Protokol tekst <ol><li> Før opsamling zebrafisk blod, er det nødvendigt at forberede bedøvelse vand. Hæld ~ 200 ml akvarievand i en beholder med en 500-ml. Tilsættes ~ 200 g is chips. Temperaturen bør være omkring 4 ° C. Som isspåner smelter, vil det være nødvendigt at tilføje flere isspåner at opretholde en konstant temperatur nær 4 ° C. </li><li> Når bedøvelse vandet er klar, forberede de nødvendige materialer til opsamling af blod. Sæt en lav retention spids på en P20 pipette og lad pipette, ...

<ol>
	<li>Schneider, A. C. R., dos Santo, J. L., Porawski, M., Schaefer, P. G., Maurer, R. L., Matte, U., da Silveira, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementa&#231;&#227;o+de+um+novo+modelo+de+experimenta&#231;&#227;o+animal+Zebrafish.">Implementa&#231;&#227;o de um novo modelo de experimenta&#231;&#227;o animal Zebrafish.</a> Rev. HCPA. 29, 100-103 (2009).</li><li>Briggs, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish:+a+new+model+organism+for+integrative+physiology.">The zebrafish: a new model organism for integrative physiology.</a> Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. 282, 3-9 (2002).</li><li>Menke, A. L., Sptsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P. M., Woutersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+anatomy+and+histology+of+adult+Zebrafish.">Normal anatomy and histology of adult Zebrafish.</a> Toxicologic Pathology. 000, 1-16 (2011).</li><li>Murtha, J. M., Qi, W., Keller, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematologic+and+serum+biochemical+values+for+Zebrafish.">Hematologic and serum biochemical values for Zebrafish.</a> Comp. Med. 53, 37-41 (2003).</li><li>Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P., Craig, F. E., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+zebrafish+thrombocytes.">Identification and characterization of zebrafish thrombocytes.</a> Br. J. Haematol. 107, 731-738 (1999).</li><li>Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+blood+coagulation+in+the+zebrafish.">Analysis of blood coagulation in the zebrafish.</a> Blood Cells Mol. Dis. 25, 239-249 (1999).</li><li>Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E., Kinkel, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sugar+measurement+in+zebrafish+reveals+dynamics+of+glucose+homeostasis.">Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis.</a> Zebrafish. 7, 205-213 (2010).</li><li>Kilpatrick, E. S., Rumley, A. G., Rumley, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+haemolysis+on+blood+glucose+meter+measurement.">The effect of haemolysis on blood glucose meter measurement.</a> Diabet. Med. 12, 341-343 (1995).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (37), e1717 (2010).</li><li>Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Injection+into+Adult+Zebrafish.">Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (42), e2126 (2010).</li><li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+Injection+in+Adult+Zebrafish.">Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (34), e1645 (2009).</li></ol>

Denne artikel præsenterer en simpel teknik, der giver yderligere blod og serum analyse i zebrafisk eksperimenter. Denne teknik har potentialet til at bidrage til fremtidige zebrafisk hæmatologiske undersøgelser, der kræver blod parameterdata. Det bør også tillade større anvendelser af zebrafisk som en eksperimentel model. Denne teknik kræver ikke særlige evner eller gennemførelse af en præcis teknik. Desuden sætter sig to gange den mængde blod, der skal opsamles i forhold til an...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Lave retention tips </td><td> Applied Biosystems </td><td> 022493020 </td><td></td></tr><tr><td> Eppendorf-centrifuge 5415D </td><td> Eppendorf </td><td> Ophørt </td><td></td></tr></tbody></table>

blood collection for biochemical analysis in adult zebrafish

Zebrafisken er blevet anvendt som en dyremodel til undersøgelse af adskillige humane sygdomme. Det kan tjene som en vigtig præklinisk platform for studier af molekylære begivenheder og terapeutiske strategier samt til evaluering af fysiologiske mekanismer nogle patologier 1. Der er relativt få publikationer i forbindelse med voksne zebrafisk fysiologi af organer og systemer 2, hvilket kan føre forskerne til at udlede, at de grundlæggende teknikker er nødvendige for at tillade udforskning af zebrafisk systemer mangler 3. Hæmatologiske biokemiske værdier af zebrafisk blev først rapporteret i 2003 af Murtha og kolleger 4, der ansat en blodtapning teknik, første gang beskrevet af Jagadeeswaran og hans kolleger i 1999. Kort fortalt blev blod opsamlet via en mikropipettespids gennem en tværgående incision, ca 0,3 cm i længde i området af den dorsale aorta 5. På grund af de små involverede dimensioner, detteer en høj-præcisions teknik, der kræver en højt kvalificeret læge. Den samme teknik blev brugt af den samme gruppe i en anden publikation i samme år 6. I 2010 vurderede Eames og kolleger hele blodsukkerniveauet i zebrafisk 7. De fik adgang til blodet ved at udføre decapitations med en saks og derefter indsætte en hepariniseret mikrokapillær samling rør i brystfinner artikulation. De nævner problemer med hæmolyse, der blev løst med en passende opbevaringstemperatur baseret på arbejdet Kilpatrick et al. 8. Når man forsøger at anvende Jagadeeswaran Teknikken i vores laboratorium har vi fundet, at det var vanskeligt at snittet i nøjagtigt det rette sted, som ikke at tillade en væsentlig mængde blod tabt før opsamling kunne påbegyndes. For nylig Gupta et al. 9 beskrevet, hvordan at dissekere voksne zebrafisk organer Kinkle et al. 10 beskrevet hvordan man udfører intraperitonEAL injektioner og Pugach et al. 11. beskrev, hvordan du udfører retro-orbital injektioner. Er dog mere arbejde for at mere fuldt ud at udforske grundlæggende teknikker til forskning i zebrafisk. Den lille størrelse af zebrafisk en udfordring for forskere at bruge det som en eksperimentel model. Endvidere, givet på grund af små skala, er det vigtigt, at simple teknikker er udviklet til at forskere at undersøge fordelene ved zebrafisk model.

Watch this Scientific Journal Video about Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish at JoVE.com

Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

Dette dokument viser en teknik til opsamling af blod fra den dorsale aorta af zebrafiskesperm. Det giver også instruktioner til opnåelse af serum til anvendelse i biokemiske analyser, såsom tests til bestemmelse af cholesterol-og triglyceridniveauer.

Blodprøvetagningssystem for Biokemisk Analyse i Voksen Zebrafisk

The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Zebrafish Brain Ventricle Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Elektroporation af Morpholinos i den voksne zebrafisk Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo elektroporation af Morpholinos i Regenerating Adult zebrafisk Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging Voksen Zebrafisk

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

An Assay for Lateral Line Regeneration in Adult Zebrafish

En analyse for sidelinje Regeneration i Voksen Zebrafisk

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line ...

Analysis of Nephron Composition and Function in the Adult Zebrafish Kidney

Analyse af Nephron opbygning og funktion i Voksen Zebrafisk Kidney

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...

Repeated Blood Collection for Blood Tests in Adult Zebrafish

Gentagen Blodprøvetagning for blodprøver Voksen Zebrafisk

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Immunofluorescens Analyse af endogene og eksogene Centromer-kinetochore Proteiner

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

In Vivo Surface Electrocardiography for Adult Zebrafish

In vivo overflade elektro Kardiografi til voksne Zebrafish

The electrocardiogram waveforms of adult zebrafish and those of humans are remarkably similar. These electrocardiogram similarities enhance the value of ...