Name: preparation of myeloid derived suppressor cells (mdsc) from naive and pancreatic tumor-bearing mice using flow cytometry and automated magnetic activated cell sorting (automacs)
Uploaded: 2012-06-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Myeloid Derived Suppressor Cells MDSC from Naive and Pancreatic Tumor-bearing Mice using Flow Cytometry and Automated Magnetic Activated Cell S

我々は、USFのフローサイトメトリーコアファシリティを認める。我々は、リソースを共有するためにドクターデニス·クーパーに感謝します。また、設定とこのビデオの撮影に、その支援のためのMayaコーエン、ローラペンドルトンとダイアナラトゥールに感謝します。 NNは博士号フェローシップHRD＃0929435にNSF FG-LSAMPブリッジによってサポートされています。この仕事はTGに授与米国癌学会機関研究助成＃93-032-13/Moffittがんセンターによって資金を供給された。

開始する前に、次の解決策を準備します。 3％の染色メディア（SM）： 1Xリン酸緩衝生理食塩水で3％ウシ胎児血清（FBS）（PBS） MACSバッファー（MB）： - 1XPBSでウシ血清（BSA）から0.5％アルブミン 1。マウスから収穫脾臓<ol><li>皮下に100μlの1X PBS（; TB担癌）に懸?...

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	<li>Goni, O., Alcaide, P., Fresno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosuppression+during+acute+Trypanosoma+cruzi+infection:+involvement+of+Ly6G+(Gr1(+))CD11b(+)+immature+myeloid+suppressor+cells.">Immunosuppression during acute Trypanosoma cruzi infection: involvement of Ly6G (Gr1(+))CD11b(+) immature myeloid suppressor cells.</a> Int. Immunol. 14, 1125-1134 (2002).</li><li>Zhu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly-6C(hi)+suppressive+monocytes+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">CD11b+Ly-6C(hi) suppressive monocytes in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J. Immunol. 179, 5228-5237 (2007).</li><li>Makarenkova, V. P., Bansal, V., Matta, B. M., Perez, L. A., Ochoa, J. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+responses+of+human+regulatory+T+cells+(Treg)+and+effector+T+cells+to+rapamycin.">Differential responses of human regulatory T cells (Treg) and effector T cells to rapamycin.</a> PLoS One. 4, e5994 (2009).</li></ol>

これは、様々な動物モデルから別のリンパ組織にも適用可能であるMDSC集団を処理し、immunophentypingの詳細な方法です。特に、autoMACSの濃縮は、脾細胞4のGR-1の枯渇、脾臓細胞、リンパ節5から骨髄のサブセットの精製、CD8の骨髄好中球14の単離および精製+脾臓からT細胞を含む種々の白血球集団の分離に使用することができますとリンパ節15。かかわらず?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> COMPANY </td><td> カタログ＃ </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 1Xリン酸緩衝生理食塩水</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィックハイクローン</td><td> SH30028.02 </td><td>のCa 2 + / Mg 2 +を /フェノールレッドフリー</td></tr><tr><td>ウシ血清（BSA）からアルブミン</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> A7906 </td><td> BSAをPBSに邪魔されずに溶解させ、無菌環境</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清（FBS） </td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィックハイクローン</td><td> SV3001403HI </td><td>不活化熱、無菌環境</td></tr><tr><td>ラット抗マウスCD16/32モノクローナル抗体（FCブロック） </td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 553142 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td>抗マウスCD11bをする（Mac-1）のFITC </td><td> eBiosciences </td><td> 11から0112 </td><td>無菌の環境</td></tr><tr><td>抗マウスLy6G（GR-1）APC </td><td> eBiosciences </td><td> 17から5931 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td>抗マウスLy6G（GR-1）PE </td><td> eBiosciences </td><td> 12から5931 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td> DAPI </td><td>インビトロジェン</td><td> D1306 </td><td>希釈無菌環境</td></tr><tr><td>細胞解離ふるい</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> CD1-1KT </td><td>使用前にオートクレーブ</td></tr><tr><td> 70μmのストレーナー</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 352350 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td> 1X RBC Lysis Bufferを</td><td> eBiosciences </td><td> 00-4333-57 </td><td>無菌環境、使用前に室温に暖かい</td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 08-757-12 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td> 50ミリリットルCONiCalの管</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td> 339652 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td> 5ミリリットル12X75mmポリスチレン丸底チューブ</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 352054 </td><td> FACSチューブとして知られている。無菌環境</td></tr><tr><td> 96ウェルV底プレート</td><td>コー​​ニング</td><td> 3897 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td>トリパンブルー</td><td> Cellgro </td><td> 25から900-CI </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td> PE MicroBeadsは</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-048-801 </td><td>無菌環境</td></tr><tr><td> AutoMACS Proのセパレータ</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> AutoMACS列</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-021-101 </td><td></td></tr><tr><td>ランニングバッファーAutoMACS </td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-091-221 </td><td&gt; </td></tr></tbody></table>

preparation of myeloid derived suppressor cells (mdsc) from naive and pancreatic tumor-bearing mice using flow cytometry and automated magnetic activated cell sorting (automacs)

MDSCは、寄生虫感染、炎症、外傷後ストレス、移植片対宿主病、糖尿病や癌1から7を含む病理学的条件下でリンパ系器官に蓄積される未熟なマクロファージ、樹状細胞および顆粒球の不均一な集団である。マウスでは、MDSCエクスプレスMAC-1（CD11bを）とGR-1（Ly6GとLy6C）の表面抗原7。 MDSCはよくそれらが大幅に拡大し、7月10日ナイーブな対応に比べて抗腫瘍免疫応答を抑制されている各種担癌宿主内で研究されていることに注意することは重要です。しかし、病態に応じて、抑制11,12の別個のメカニズムやターゲットとMDSCの異なる亜集団が存在する。したがって、実行可能なMDSC集団を分離するための効果的な方法は、in vitroおよび in vivo で抑制のそれぞれ異なる分子メカニズムの解明において重要である。 最近、Ghansahグループは、マウスの膵臓癌モデルでMDSCの拡大を報告しています。私たちの担癌MDSCは、恒常性の損失を表示し、ナイーブなMDSC 13に比べて抑制機能を増加させた。 MDSC割合はナイーブ対担癌マウスのリンパ系のコンパートメントで有意に少なくなります。これは、しばしばこれらのMDSCの正確な比較分析を妨げている主要な警告です。したがって、前の蛍光活性化セルソーティング（FACS）にナイーブマウスからのGr-1 +白血球を豊かにすると、純度、生存率を高め、大幅にソート時間が短縮されます。これらはソートクイックFACSのために豊富にありますしかし、担癌マウスからのGr-1 +白血球の濃縮はオプションです。したがって、このプロトコルでは、我々はMDSCをイムノタイムリーにMDSCをソートするためのナイーブマウスの脾臓からのGr-1 +白血球を濃縮する非常に効率的な方法を説明します。免疫C57BL / 6マウスは、マウスPanc02 CEを接種するナイーブなマウスは、1XPBSを受け取るのに対し、皮下LLS。約30日後に接種、脾臓細胞解離ふるいを使用して単一細胞懸濁液に収穫し、処理されます。脾細胞は、その後赤血球（RBC）を溶解し、これらの白血球のアリコートを、フローサイトメトリーを用いた免疫表現型MDSC割合にMac-1とGR-1に対する蛍光標識抗体を用いて染色されています。平行実験で、ナイーブマウスからの全白血球は蛍光標識のGr-1抗体、PE-MicroBeadsでインキュベートし、積極的に自動化された磁気活性化細胞選別（autoMACS）プロ区切り記号を使用して、選択した状態で染色されています。次に、GR-1 +白血球のアリコートを、フローサイトメトリーを用いてMDSC割合の増加を識別するためにMac-1抗体で染色されています。今、これらのGR1 +濃縮白血球は 、in vivo および in vitro での比較分析（ナイーブ対担癌）で使用するMDSCのソートFACSの準備ができている</em&gt;のアッセイ。

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Preparation of Myeloid Derived Suppressor Cells MDSC from Naive and Pancreatic Tumor-bearing Mice using Flow Cytometry and Automated Magnetic Activated Cell Sorting AutoMACS

これは、ミエロイド系のサプレッサー細胞（MDSC）をイムノおよびGr-1を豊かにし、迅速かつ包括的な方法です<sup&gt; +</supマウスの脾臓から&gt;白血球。このメソッドは、実行可能なGR-1に濃縮するために選別フローサイトメトリーとAutoMACSセルを使用しています<sup&gt; +</sup使用するためにMDSCのソート、FACSの前に&gt;白血球<emin vivoでの&gt;</em&gt;と<em&gt; in vitroで</em&gt;アッセイ。

フローサイトメトリーおよび自動化された磁気活性化細胞選別（AutoMACS）を使用して、ナイーブ膵腫瘍を有するマウスからミエロイド系のサプレッサー細胞（MDSC）の調製

MDSC are a heterogeneous population of immature macrophages, dendritic cells and granulocytes that accumulate in lymphoid organs in pathological ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Myeloid Derived Suppressor Cells (MDSC) from Naive and Pancreatic Tumor-bearing Mice using Flow Cytometry and Automated Magnetic Activated Cell Sorting (AutoMACS)

Magnetic Resonance Derived Myocardial Strain Assessment Using Feature Tracking

特徴追跡を用いた磁気共鳴が派生心筋ストレインの評価

Purpose: An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

ソート幹細胞アッセイおよびフローの原発性脳腫瘍組織の処理

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

単離、特徴付けと二つの異なる方法を使用して永久歯に由来するヒト歯髄幹細胞の分化の比較

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

CD133の患者由来の細胞培養および分離<sup&gt; +</supメラノーマから&gt;推定されるがん幹細胞

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

ハイスループットフローサイトメトリー細胞ベースのアッセイN-メチル-D-アスパラギン酸受容体またはヒト血清中のドーパ​​ミン-2受容体に対する抗体を検出する

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

臨床および前臨床研究用途のための半自動循環腫瘍細胞（CTC）アッセイの適応

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

ナノボディ及び抗体ベースの検証<em&gt;インビボ</em使用してマウスにおける&gt;腫瘍異種移植NIRFイメージング実験<em&gt;エクスビボ</em&gt;フローサイトメトリーおよび顕微鏡

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

マルチパラメータ蛍光活性化細胞選別によるヒトリンパ内皮細胞の単離

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

新しい治療戦略を開発するための膵臓癌幹細胞特性を研究

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Molecular Probe Optimization to Determine Cell Mortality in a Photosynthetic Organism (Microcystis aeruginosa) Using Flow Cytometry

Molecular Probe Optimization to Determine Cell Mortality in a Photosynthetic Organism Microcystis aeruginosa Using Flow Cytometry

光合成生物における細胞死を決定するための分子プローブの最適化（<em&gt;アオコ緑膿菌</em&gt;）フローサイトメトリーを使用して

Microbial subpopulations in field and laboratory studies have been shown to display high heterogeneity in morphological and physiological parameters. ...