Name: harvesting murine alveolar macrophages and evaluating cellular activation induced by polyanhydride nanoparticles
Uploaded: 2012-06-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות צבא ארה&quot;ב למחקר רפואי ואמצעי פיקוד (במדבר גרנט W81XWH-09-1-0386 ו W81XWH-10-1-0806) עבור תמיכה כספית ד&quot;ר שון ריגבי מ מתקן מדינת איווה אוניברסיטת cytometry זרימה עבור מומחה סיוע טכני שלו.

1. קציר המקרופאגים מכתשיים (AMɸ) של העכבר באמצעות שטיפה ריאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתאים ללבוש ציוד מגן אישי (PPE) כגון חלוק מעבדה, כפפות חד פעמיות, והגנה עין נכונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מלאה AMɸ (cAMɸ) בינוני לפני תחילת הבציר. הוסף 2.5 מ&quo...

<ol>
	<li>Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+biomaterials.">Immunomodulatory biomaterials.</a> Int. J. Pharm. 364, 265-271 (2008).</li><li>Torres, M. P., Vogel, B. M., Narasimhan, B., Mallapragada, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+novel+polyanhydrides+with+tailored+erosion+mechanisms.">Synthesis and characterization of novel polyanhydrides with tailored erosion mechanisms.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 76, 102-110 (2006).</li><li>Lopac, S. K., Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+polymer+chemistry+and+fabrication+method+on+protein+release+and+stability+from+polyanhydride+microspheres.">Effect of polymer chemistry and fabrication method on protein release and stability from polyanhydride microspheres.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 91, 938-947 (2009).</li><li>Torres, M. P., Determan, A. S., Anderson, G. L., Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphiphilic+polyanhydrides+for+protein+stabilization+and+release.">Amphiphilic polyanhydrides for protein stabilization and release.</a> Biomaterials. 28, 108-116 (2007).</li><li>Ulery, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+a+Protective+Single-Dose+Intranasal+Nanoparticle-Based+Vaccine+Platform+for+Respiratory+Infectious+Diseases.">Design of a Protective Single-Dose Intranasal Nanoparticle-Based Vaccine Platform for Respiratory Infectious Diseases.</a> PLoS ONE. 6, e17642 (2011).</li><li>Petersen, L. K., Xue, L., Wannemuehler, M. J., Rajan, K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+simultaneous+effect+of+polymer+chemistry+and+device+geometry+on+the+in+vitro+activation+of+murine+dendritic+cells.">The simultaneous effect of polymer chemistry and device geometry on the in vitro activation of murine dendritic cells.</a> Biomaterials. 30, 5131-5142 (2009).</li><li>Petersen, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+innate+immune+responses+in+a+pathogen-mimicking+manner+by+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticle+adjuvants.">Activation of innate immune responses in a pathogen-mimicking manner by amphiphilic polyanhydride nanoparticle adjuvants.</a> Biomaterials. 32, 6815-6822 (2011).</li><li>Torres, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyanhydride+microparticles+enhance+dendritic+cell+antigen+presentation+and+activation.">Polyanhydride microparticles enhance dendritic cell antigen presentation and activation.</a> Acta. Biomater. 7, 2857-2864 (2011).</li><li>Kirby, A. C., Coles, M. C., Kaye, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+transport+pathogens+to+lung+draining+lymph+nodes.">Alveolar macrophages transport pathogens to lung draining lymph nodes.</a> J. Immunol. 183, 1983-1989 (2009).</li><li>Barletta, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+compartments+in+the+mouse+lung:+Distinguishing+between+marginated,+interstitial,+and+alveolar+cells+in+response+to+injury.">Leukocyte compartments in the mouse lung: Distinguishing between marginated, interstitial, and alveolar cells in response to injury.</a> J. Immunol. Methods. , (2011).</li><li>Rubins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages:+wielding+the+double-edged+sword+of+inflammation.">Alveolar macrophages: wielding the double-edged sword of inflammation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 167, 103-104 (2003).</li><li>Sun, K., Gan, Y., Metzger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Murine+Genetic+Predisposition+to+Pneumococcal+Infection+Reveals+a+Critical+Role+of+Alveolar+Macrophages+in+Maintaining+the+Sterility+of+the+Lower+Respiratory+Tract.">Analysis of Murine Genetic Predisposition to Pneumococcal Infection Reveals a Critical Role of Alveolar Macrophages in Maintaining the Sterility of the Lower Respiratory Tract.</a> Infect. Immun. 79, 1842-1847 (2011).</li><li>Morimoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+Macrophages+that+Phagocytose+Apoptotic+Neutrophils+Produce+Hepatocyte+Growth+Factor+during+Bacterial+Pneumonia+in+Mice.">Alveolar Macrophages that Phagocytose Apoptotic Neutrophils Produce Hepatocyte Growth Factor during Bacterial Pneumonia in Mice.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 24, 608-615 (2001).</li><li>Gordon, S., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+and+macrophage+heterogeneity.">Monocyte and macrophage heterogeneity.</a> Nat. Rev. Immunol. 5, 953-964 (2005).</li><li>Ulery, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres.">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li><li>Petersen, L. K., Sackett, C. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+protein+stability+in+polyanhydride+nanoparticles.">High-throughput analysis of protein stability in polyanhydride nanoparticles.</a> Acta Biomater. 6, 3873-3881 (2010).</li><li>Irvin, C. G., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+lung+function+in+the+mouse:+the+challenge+of+size.">Measuring the lung function in the mouse: the challenge of size.</a> Respir. Res. 4, 4 (2003).</li></ol>

Nanoparticle Polyanhydride פלטפורמות החיסונים הראו יעילות כאשר מנוהל intranasally ב משטרי מינון יחיד 5. מדידת ההפעלה של אוכלוסיות תאים מקומיים phagocytic של הריאות הנגרמת על ידי אספקת פלטפורמה זו מאפשרת חיסון הערכת היכולת הפוטנציאלית שלה בסופו של דבר לקדם את המערכת החיסונית אדפטיבי?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> CAM מדיה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 15-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> 50 מ&quot;מ 2-mercaptoethanol </td><td> סיגמא </td><td> M3148-25ML </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין 10,000 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​פתרון </td><td> Cellgro </td><td> 30-002-CI </td><td></td></tr><tr><td> בסרום שור עוברית </td><td> אטלנטה ביולוגיות </td><td> S11150 </td><td></td></tr><tr><td> מאגר FACS </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> נתרן כלורי </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> S671-500 </td><td></td></tr><tr><td> סודיום פוספט </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> MK7868500 </td><td></td></tr><tr><td> אשלגן כלורי </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> P217500 </td><td></td></tr><tr><td> אשלגן זרחתי </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> P288-200 </td><td></td></tr><tr><td> BSA (שור אלבומין סרום) </td><td> סיגמא </td><td> A7888 </td><td></td></tr><tr><td> אזיד הנתרן </td><td> סיגמא </td><td> S2002 </td><td></td></tr><tr><td> נוגדנים </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> עכברוש IgG </td><td> סיגמא </td><td> I4341 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-MS CD16/32 </td><td> eBioscience </td><td> 16-0161 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-MS MHC II haplotype IA / IE, שיבוט M5/114.15.2, מצומדות כדי isothiocyanate fluorescein (FITC) </td><td> eBioscience </td><td> 11-5321 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-CD86 העכבר, שיבוט GL-1, מצומדות כדי allophycocyanin (APC), Cy7 </td><td> Biolegend </td><td> 105030 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-CD40 העכבר, שיבוט 1C10, מצומדות כדי APC </td><td> eBioscience </td><td> 17-0401 </td><td></td></tr><tr><td> אנטי עכבר CD209, שיבוט 5H10, מצומדות כדי ביוטין </td><td> eBioscience </td><td> 13-2091 </td><td></td></tr><tr><td> נגד העכבר CD11b, שיבוט M1/70, מצומדות כדי Alexa פלואוריד 700 </td><td> eBioscience </td><td> 56-0112 </td><td></td></tr><tr><td> נגד העכבר F4/80, שיבוט BM8, מצומדות כדי phycoerythrin (PE)-Cy7 </td><td> eBioscience </td><td> 25-4801 </td><td></td></tr><tr><td> PE-טקסס אדום מצומדות streptavidin </td><td> BD Biosciences </td><td> 551487 </td><td></td></tr><tr><td> מתכלים אחרים ריאגנטים </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> אתנול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> A405-20 </td><td> משמש% 70 (V / V) </td></tr><tr><td> דחוס CO 2 </td><td> Linweld </td><td> 16000060 </td><td></td></tr><tr><td> 1 מ&quot;ל מזרק </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> ריבונית ½ 3 &quot;Catcatheter האב טום </td><td> קנדל </td><td> 703021 </td><td></td></tr><tr><td> בטיחות ביולוגית הממשלה </td><td> NUAIRE </td><td> סדרה 22 </td><td></td></tr><tr><td> דיסקציה מספריים </td><td> דיג </td><td> 138082 </td><td></td></tr><tr><td> מצבטים </td><td> Roboz </td><td> RS-8254 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, 1X ללא סידן ומגנזיום </td><td> Cellgro </td><td> 21-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> 15 צנטריפוגות צינורות מ&quot;ל עם שווי בורג </td><td> VWR הבינלאומי </td><td> 21008-216 </td><td></td></tr><tr><td> ששת גם בתרבית רקמה המטופלים צלחות </td><td> שחקן המשנה </td><td> 3516 </td><td></td></tr><tr><td> תחתית Racks פלסטיק </td><td> Nalgene </td><td> 5970 </td><td></td></tr><tr><td> מגרד תא 24 ס&quot;מ </td><td> TPP </td><td> 99002 </td><td></td></tr><tr><td> 5 מ&quot;ל פוליסטירן מסביב התחתונה Tube </td><td> בז </td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> Pipet, סיוע XL </td><td> דראמונד </td><td> 4-000-105 </td><td></td></tr><tr><td> 10, 5, ו - 2 מ&quot;ל טפטפות </td><td> דיג </td><td> 13-675 </td><td></td></tr><tr><td> 200 ו 10 micropipettors μL </td><td> Gilson Pipetman </td><td> F123601 </td><td></td></tr><tr><td> 200 ו 10 פיפטה טיפים μL </td><td> דיג </td><td> 02-707 </td><td></td></tr><tr><td> BD ייצובמיצב </td><td> BD Biosciences </td><td> 338036 </td><td></td></tr><tr><td> Isoton II diluent </td><td> Beckman Coulter- </td><td> 8546719 </td><td></td></tr><tr><td> זאפ ב-oglobin מגיב ממוסס </td><td> Beckman Coulter- </td><td> 7546138 </td><td></td></tr><tr><td> קולטר בקבוקוני פלסטיק פוליסטירן מונה </td><td> Beckman Coulter- </td><td> 14310-684 </td><td></td></tr><tr><td> מבחנות </td><td> BD Biosciences </td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> ציוד </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> בקירור צנטריפוגה </td><td> Labnet </td><td> 50075040 </td><td></td></tr><tr><td> החממה Humidified CO 2 </td><td> Nuaire </td><td> דגם Autoflow 8500 </td><td></td></tr><tr><td> FACSCanto תזרים Cytometer </td><td> BD Biosciences </td><td> 338960 </td><td></td></tr><tr><td> קולטר החלקיקים מונה Z1 </td><td> Beckman Coulter- </td><td> WS-Z1DUALPC </td><td></td></tr><tr><td> נוזלי Sonicator ציוד לעיבוד עם Microtip </td><td> Misonix </td><td> מס &#39;דגם S-4000 </td><td></td></tr></tbody></table>

harvesting murine alveolar macrophages and evaluating cellular activation induced by polyanhydride nanoparticles

חלקיקים מתכלה צמחו כפלטפורמה צדדי על התכנון והיישום של אפי חיסונים חדשים כנגד מחלות זיהומיות בדרכי הנשימה. באופן ספציפי, polyanhydride חלקיקים מורכב חומצה sebacic aliphatic (SA), ארומטי 1,6-bis (p-carboxyphenoxy) הקסאן (CPH), או amphiphilic 1,8-bis (p-carboxyphenoxy) -3,6-dioxaoctane (CPTEG) להציג בתפזורת ייחודי סחף קרקע קינטיקה 1,2 וניתן לנצל לשחרר באיטיות ביומולקולות תפקודית (למשל, אנטיגנים, נוגדנים חלבון וכד &#39;) in vivo 3,4,5. אלו חלקיקים גם בעלי פעילות משלים מהותי, מה שהופך אותם בחירה מצוינת עבור פלטפורמת אספקת החיסון 6,7,8. על מנת להבהיר את המנגנונים השולטים ההפעלה של חסינות מולדת בעקבות החיסון הרירית אפי, יש להעריך את התגובות מולקולרית תאית של p אנטיגןתאים כועס (נגמ&quot;שים) אחראית ליזום התגובה החיסונית. התאים הדנדריטים הם נגמ&quot;שים העיקריים שנמצאו בניהול דרכי הנשימה, בעוד מקרופאגים מכתשיים (AMɸ) שולטים parenchyma ריאות 9,10,11. AMɸ הם היעילה ביותר בניקוי הריאות של פתוגנים חיידקים ופסולת תא 12,13. בנוסף, זה סוג תא יש תפקיד חשוב בהובלה של אנטיגנים של חיידקים אל קשרי הלימפה וניקוז, וזה צעד ראשון חשוב בייזום של תגובה חיסונית אדפטיבית 9. AMɸ גם מביעים רמות גבוהות של זיהוי תבניות מולדות קולטנים זבל, מפרישים Pro דלקת מתווכים, וראש ותאי T נאיבי 12,14. האוכלוסייה טהורה יחסית של AMɸ (למשל, יותר מ 80%) יכול בקלות להיות מושגת באמצעות שטיפה ריאות למחקר במעבדה. תושב שנקטפו AMɸ מבעלי חיים המוסמכות החיסונית לספק הפנוטיפ מייצג של מקרופאגים אשר encounter חיסון החלקיקים מבוסס in vivo. במסמך זה אנו מתארים את הפרוטוקולים המשמשים הקציר ותרבות AMɸ מעכברים ולבדוק את הפנוטיפ הפעלה של מקרופאגים לאחר הטיפול עם חלקיקים polyanhydride במבחנה.

Watch this Scientific Journal Video about Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles at JoVE.com

Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

במסמך זה אנו מתארים פרוטוקולים קצירת מקרופאגים מכתשיים Murine, אשר תושבי תאים חיסוניים מולדים בריאה, ובדיקת ההפעלה שלהם כתגובה לתרבות בשיתוף עם חלקיקים polyanhydride.

הפעלת נייד קציר המקרופאגים מכתשיים Murine והערכת בהשפעת חלקיקים Polyanhydride

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

ניתוח הפנמה נייד של חלקיקים וחיידקים על ידי Cytometry Multi-Flow דימות ספקטרלי

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

תפוקה גבוהה סינתזה של פחמימות functionalization של חלקיקים Polyanhydride

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

הערכת משלוח גן פולימרית חלקיקים על ידי Nanoparticle מעקב ניתוח וזרימת cytometry תפוקה גבוהה

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

PLGA Nanoparticles Formed by Single- or Double-emulsion with Vitamin E-TPGS

Poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) is a biocompatible member of the aliphatic polyester family of biodegradable polymers. PLGA has long been a popular ...

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

שימוש בעכבת Cell-מצע והדמיה של תא חי כדי למדוד שינויים בזמן אמת בסלולרית הידבקות ודה-הידבקות הנגרמים על ידי מטריקס שינוי

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii

Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii

מיקרוביולוגי מושרה קלציט רטיבות בתיווך<em&gt; Sporosarcina pasteurii</em

The particular bacterium under investigation here (S. pasteurii) is unique in its ability, under the right conditions, to induce the hydrolysis of urea ...

Identification of Metal Oxide Nanoparticles in Histological Samples by Enhanced Darkfield Microscopy and Hyperspectral Mapping

זיהוי של Metal Oxide חלקיקים בדגימות היסטולוגית על ידי מיפוי darkfield מיקרוסקופית והיפרספקטרליות משופרים

Nanomaterials are increasingly prevalent throughout industry, manufacturing, and biomedical research. The need for tools and techniques that aid in the ...

Production of Metal Nanoparticles by Pulsed Laser-ablation in Liquids: A Tool for Studying the Antibacterial Properties of Nanoparticles

ייצור של חלקיקי מתכת על ידי פעימה לייזר ablation בנוזלים: כלי לחקר מאפיינים אנטיבקטריאליים של חלקיקים

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

Functionalization פני השטח של חלקיקי וירוס הפטיטיס E בשיטות כימיות ההטיה

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

הדחקת שעתוק גנים על ידי ניתוב מחדש מכונות הסלולר עם המגבילים Epigenetic כימי

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...