Name: harvesting murine alveolar macrophages and evaluating cellular activation induced by polyanhydride nanoparticles
Uploaded: 2012-06-08T12:00:00
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著者らは、のためにアイオワ州立大学のフローサイトメトリー施設からの財政支援と博士ショーン·リグビーは、米国陸軍医学研究および資材コマンド（グラント番号W81XWH-09-1から0386までとW81XWH-10-1-0806）に感謝したいと思います彼の専門的なテクニカルサポートを提供しています。

1。肺洗浄を使用してマウスから肺胞マクロファージを（AMɸ）収穫<ol><li>このような実験着と使い捨て手袋、適切な眼の保護、適切な個人用保護具（P​​PE）を着用してください。 </li><li>収穫の開始前に完全なAMɸ（cAMɸ）培地を準備します。 Dulbelccoダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）の222.25 mLのペニシリン/ストレプトマイシン（ペン/連鎖球菌）溶液に、β-メルカプトエタノール（2 - メ?...

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	<li>Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+biomaterials.">Immunomodulatory biomaterials.</a> Int. J. Pharm. 364, 265-271 (2008).</li><li>Torres, M. P., Vogel, B. M., Narasimhan, B., Mallapragada, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+novel+polyanhydrides+with+tailored+erosion+mechanisms.">Synthesis and characterization of novel polyanhydrides with tailored erosion mechanisms.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 76, 102-110 (2006).</li><li>Lopac, S. K., Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+polymer+chemistry+and+fabrication+method+on+protein+release+and+stability+from+polyanhydride+microspheres.">Effect of polymer chemistry and fabrication method on protein release and stability from polyanhydride microspheres.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 91, 938-947 (2009).</li><li>Torres, M. P., Determan, A. S., Anderson, G. L., Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphiphilic+polyanhydrides+for+protein+stabilization+and+release.">Amphiphilic polyanhydrides for protein stabilization and release.</a> Biomaterials. 28, 108-116 (2007).</li><li>Ulery, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+a+Protective+Single-Dose+Intranasal+Nanoparticle-Based+Vaccine+Platform+for+Respiratory+Infectious+Diseases.">Design of a Protective Single-Dose Intranasal Nanoparticle-Based Vaccine Platform for Respiratory Infectious Diseases.</a> PLoS ONE. 6, e17642 (2011).</li><li>Petersen, L. K., Xue, L., Wannemuehler, M. J., Rajan, K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+simultaneous+effect+of+polymer+chemistry+and+device+geometry+on+the+in+vitro+activation+of+murine+dendritic+cells.">The simultaneous effect of polymer chemistry and device geometry on the in vitro activation of murine dendritic cells.</a> Biomaterials. 30, 5131-5142 (2009).</li><li>Petersen, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+innate+immune+responses+in+a+pathogen-mimicking+manner+by+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticle+adjuvants.">Activation of innate immune responses in a pathogen-mimicking manner by amphiphilic polyanhydride nanoparticle adjuvants.</a> Biomaterials. 32, 6815-6822 (2011).</li><li>Torres, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyanhydride+microparticles+enhance+dendritic+cell+antigen+presentation+and+activation.">Polyanhydride microparticles enhance dendritic cell antigen presentation and activation.</a> Acta. Biomater. 7, 2857-2864 (2011).</li><li>Kirby, A. C., Coles, M. C., Kaye, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+transport+pathogens+to+lung+draining+lymph+nodes.">Alveolar macrophages transport pathogens to lung draining lymph nodes.</a> J. Immunol. 183, 1983-1989 (2009).</li><li>Barletta, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+compartments+in+the+mouse+lung:+Distinguishing+between+marginated,+interstitial,+and+alveolar+cells+in+response+to+injury.">Leukocyte compartments in the mouse lung: Distinguishing between marginated, interstitial, and alveolar cells in response to injury.</a> J. Immunol. Methods. , (2011).</li><li>Rubins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages:+wielding+the+double-edged+sword+of+inflammation.">Alveolar macrophages: wielding the double-edged sword of inflammation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 167, 103-104 (2003).</li><li>Sun, K., Gan, Y., Metzger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Murine+Genetic+Predisposition+to+Pneumococcal+Infection+Reveals+a+Critical+Role+of+Alveolar+Macrophages+in+Maintaining+the+Sterility+of+the+Lower+Respiratory+Tract.">Analysis of Murine Genetic Predisposition to Pneumococcal Infection Reveals a Critical Role of Alveolar Macrophages in Maintaining the Sterility of the Lower Respiratory Tract.</a> Infect. Immun. 79, 1842-1847 (2011).</li><li>Morimoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+Macrophages+that+Phagocytose+Apoptotic+Neutrophils+Produce+Hepatocyte+Growth+Factor+during+Bacterial+Pneumonia+in+Mice.">Alveolar Macrophages that Phagocytose Apoptotic Neutrophils Produce Hepatocyte Growth Factor during Bacterial Pneumonia in Mice.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 24, 608-615 (2001).</li><li>Gordon, S., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+and+macrophage+heterogeneity.">Monocyte and macrophage heterogeneity.</a> Nat. Rev. Immunol. 5, 953-964 (2005).</li><li>Ulery, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres.">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li><li>Petersen, L. K., Sackett, C. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+protein+stability+in+polyanhydride+nanoparticles.">High-throughput analysis of protein stability in polyanhydride nanoparticles.</a> Acta Biomater. 6, 3873-3881 (2010).</li><li>Irvin, C. G., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+lung+function+in+the+mouse:+the+challenge+of+size.">Measuring the lung function in the mouse: the challenge of size.</a> Respir. Res. 4, 4 (2003).</li></ol>

単回投与レジメン5で鼻腔内に投与した場合、無水物ナノ粒子ワクチンのプラットフォームでは有効性を示している。このワクチン·デリバリー·プラットフォームによって誘発される肺内に常駐貪食細胞集団の活性化を測定することにより、最終的に適応免疫応答を促進するために、その潜在的能力の評価を可能にします。 具体的には、肺胞洗浄液から肺胞マク?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> CAMメディア </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 15から013-CV </td><td></td></tr><tr><td>の50 mM 2 - メルカプトエタノール</td><td>シグマ</td><td> M3148-25ML </td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン万μg/ mLのソリューション</td><td> Cellgro </td><td> 30から002-CI </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>アトランタバイオ</td><td> S11150 </td><td></td></tr><tr><td> FACSバッファー </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> S671-500 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> MK7868500 </td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> P217500 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> P288-200 </td><td></td></tr><tr><td> BSA（ウシ血清アルブミン） </td><td>シグマ</td><td> A7888 </td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S2002 </td><td></td></tr><tr><td> 抗体 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ラットIgG </td><td>シグマ</td><td> I4341 </td><td></td></tr><tr><td>抗-MS CD16/32 </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 16から0161 </td><td></td></tr><tr><td>フルオレセインイソチオシアネート（FITC）結合抗-MS MHC IIハプロタイプIA /​​ IE、クローンM5/114.15.2、 </td><td> eBioscience </td><td> 11から5321 </td><td></td></tr><tr><td>アロフィコシアニンにコンジュゲート抗マウスCD86、クローンGL-1、（APC）-Cy7 </td><td> Biolegend </td><td> 105030 </td><td></td></tr><tr><td> APCへの結合抗マウスCD40、クローン1C10、 </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 17から0401 </td><td></td></tr><tr><td>ビオチン標識抗マウスCD209、クローン5H10、 </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 13から2091 </td><td></td></tr><tr><td>のAlexa Fluor®700標識抗マウスCD11bを、クローンM1/70、 </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 56から0112 </td><td></td></tr><tr><td>フィコエリスリンに結合した抗マウスF4/80、BM8クローン、（PE）-Cy7 </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 25から4801 </td><td></td></tr><tr><td> PE-テキサスレッド結合ストレプトアビジン</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 551487 </td><td></td></tr><tr><td> 他の消耗品と試薬 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> A405-20 </td><td> 70％（V / V）として使用</td></tr><tr><td>圧縮されたCO 2 </td><td> Linweld </td><td> 16000060 </td><td></td></tr><tr><td> 1 mLのシリンジ</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td>ソブリン3½ &quot;FRトムCatcatheter </td><td>ケンドール</td><td> 703021 </td><td></td></tr><tr><td>バイオセーフティキャビネット</td><td> NUAIRE </td><td>シリーズ22 </td><td></td></tr><tr><td>解剖用はさみ</td><td>フィッシャー</td><td> 138082 </td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td> Roboz </td><td> RS-8254 </td><td></td></tr><tr><td>カルシウムとマグネシウムを含まないPBS、1X </td><td> Cellgro </td><td> 21から040-CM </td><td></td></tr><tr><td>スクリューキャップ付き15 mLの遠心チューブ</td><td> VWRインターナショナル</td><td> 21008-216 </td><td></td></tr><tr><td>プレート処理された6ウェル組織培養</td><td>共演者</td><td> 3516 </td><td></td></tr><tr><td>プラスチックチューブのラック</td><td>ナルゲン</td><td> 5970 </td><td></td></tr><tr><td>セルスクレーパー24センチメートル</td><td> TPP </td><td> 99002 </td><td></td></tr><tr><td> 5mLのポリスチレン丸底チューブ</td><td>ファルコン</td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td>ピペットエイドXL </td><td>ドラモンド</td><td> 4-000-105 </td><td></td></tr><tr><td> 10、5、および2 mLピペット</td><td>フィッシャー</td><td> 13から675 </td><td></td></tr><tr><td> 200と10μLmicropipettors </td><td>ギルソンピペットマン</td><td> F123601 </td><td></td></tr><tr><td> 200と10μLピペットチップ</td><td>フィッシャー</td><td> 02から707 </td><td></td></tr><tr><td>安定BD固定剤</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 338036 </td><td></td></tr><tr><td> ISOTON II希釈</td><td> Beckman-Coulter社</td><td> 8546719 </td><td></td></tr><tr><td> ZAP-oglobin II溶菌試薬</td><td> Beckman-Coulter社</td><td> 7546138 </td><td></td></tr><tr><td>コー​​ルターカウンターポリスチレンバイアル</td><td> Beckman-Coulter社</td><td> 14310-684 </td><td></td></tr><tr><td>試験管</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> 機器 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>冷凍遠心器</td><td> Labnet </td><td> 50075040 </td><td></td></tr><tr><td>加湿インキュベーターCO 2 </td><td> Nuaire </td><td>モデルオートフロー8500 </td><td></td></tr><tr><td> FACSCantoフローサイトメーター</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 338960 </td><td></td></tr><tr><td>コー​​ルターパーティクルカウンタZ1 </td><td> Beckman-Coulter社</td><td> WS-Z1DUALPC </td><td></td></tr><tr><td>マイクロチップと超音波液体処理装置</td><td> Misonix </td><td>モデル番号S-4000 </td><td></td></tr></tbody></table>

harvesting murine alveolar macrophages and evaluating cellular activation induced by polyanhydride nanoparticles

生分解性ナノ粒子は、呼吸器感染症に対する新規経鼻ワクチンの設計と実装のための汎用プラットフォームとして浮上している。具体的には、無水物は、脂肪族セバシン酸（SA）、芳香族1,6 -ビス（p-カルボキシフェノキシ）ヘキサン（CPH）、または両親媒性1,8 -ビス（p-カルボキシフェノキシ）-3,6 -ジオキサオクタンから成るナノ粒子（CPTEG）はin vivoで 3,4,5 で一意のバルクと表面浸食速度論1,2を表示し、徐々に機能的な生体分子（例えば、タンパク質抗原、免疫グロブリンなど）を解放するために悪用される可能性があります。これらは、それらのワクチン·デリバリー·プラットフォーム6,7,8のための優れた選択肢となり、本質的なアジュバント活性を有する、ナノ粒子。 鼻腔粘膜のワクチン接種後に自然免疫の活性化を支配するメカニズムを解明するために、1つは、抗原Pの分子や細胞の応答を評価する必要があります免疫応答を開始するための責任憤り細胞（APC）。樹状細胞は肺胞マクロファージは（AMɸ）肺実質9,10,11で一世を風靡しながら、気道を行うに見られる主なAPCのです。 AMɸ微生物病原体や細胞破片12,13の肺をクリアに非常に効率的です。さらに、この細胞型は、適応免疫応答9の開始に重要な最初のステップである所属リンパ節への微生物抗原の輸送に重要な役割を果たしています。 AMɸまた、生得的なパターン認識とスカベンジャー受容体、分泌炎症誘発性メディエーター、及び主要なナイーブT細胞12,14の上昇を表現しています。 AMɸ（例えば、80％以上）の比較的純粋な人口は容易に実験室での研究のために肺洗浄を介して取得することができます。 AMɸ免疫有能な動物から採取した居住者はencounteれマクロファージの代表的な表現型を提供するin vivoでの rは粒子ベースのワクチン。ここで、我々は、マウスからの収穫と文化AMɸに使用されるプロトコルを記述し、in vitroでの無水物ナノ粒子を用いた治療後にマクロファージの活性化の表現型を調べます。

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Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

ここで、我々は、肺に先天性免疫細胞を常駐し、無水物ナノ粒子との共培養に応答して活性化を検討しているマウスの肺胞マクロファージを採取するためのプロトコルについて説明します。

マウス肺胞マクロファージを採取し、無水物ナノ粒子により誘導される細胞活性化を評価する

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

マルチスペクトルイメージングフローサイトメトリーによるナノ粒子と細菌の細胞内在化を分析する

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

無水物ナノ粒子のハイスループット糖鎖の合成と機能化

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

ナノ粒子トラッキング分析とハイスループットフローサイトメトリーによる高分子遺伝子デリバリーナノ粒子の評価

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

PLGA Nanoparticles Formed by Single- or Double-emulsion with Vitamin E-TPGS

Poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) is a biocompatible member of the aliphatic polyester family of biodegradable polymers. PLGA has long been a popular ...

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

マトリックス修飾により誘導される細胞接着及び脱接着におけるリアルタイムの変化を測定するために、細胞 - 基質インピーダンスと生細胞イメージングを使用して、

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii

Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii

微生物学的に誘導された方解石沈殿がによって媒介されます<em&gt;スポロサルシナパステウリイ</em

The particular bacterium under investigation here (S. pasteurii) is unique in its ability, under the right conditions, to induce the hydrolysis of urea ...

Identification of Metal Oxide Nanoparticles in Histological Samples by Enhanced Darkfield Microscopy and Hyperspectral Mapping

強化された暗視野顕微鏡とハイパースペクトルマッピングにより組織学的試料中の金属酸化物ナノ粒子の同定

Nanomaterials are increasingly prevalent throughout industry, manufacturing, and biomedical research. The need for tools and techniques that aid in the ...

Production of Metal Nanoparticles by Pulsed Laser-ablation in Liquids: A Tool for Studying the Antibacterial Properties of Nanoparticles

液体中のパルスレーザアブレーションによる金属ナノ粒子の生成：ナノ粒子の抗菌特性を調べるためのツール

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

化学の活用方法を使用して E 型肝炎ウイルスのナノ粒子の表面化学

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

化学のエピジェネティックな修飾剤の細胞機械装置をリダイレクトすることによって遺伝子の転写を抑制

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...