Name: harvesting murine alveolar macrophages and evaluating cellular activation induced by polyanhydride nanoparticles
Uploaded: 2012-06-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить армии США медицинских исследований и материального Command (Грант номера W81XWH-09-1-0386 и W81XWH-10-1-0806) за финансовую поддержку и д-р Шон Ригби из Университета штата Айова фонда для проточной цитометрии его экспертной технической помощи.

1. Сбор альвеолярных макрофагов (AMɸ) с использованием мыши легких Промывание <ol><li> Использовать соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ), например, халат, одноразовые перчатки и надлежащей защиты глаз. </li><li> Подготовить всю AMɸ (cAMɸ) среды до начала сбора урожая. Добавить 2,5 мл...

<ol>
	<li>Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+biomaterials.">Immunomodulatory biomaterials.</a> Int. J. Pharm. 364, 265-271 (2008).</li><li>Torres, M. P., Vogel, B. M., Narasimhan, B., Mallapragada, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+novel+polyanhydrides+with+tailored+erosion+mechanisms.">Synthesis and characterization of novel polyanhydrides with tailored erosion mechanisms.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 76, 102-110 (2006).</li><li>Lopac, S. K., Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+polymer+chemistry+and+fabrication+method+on+protein+release+and+stability+from+polyanhydride+microspheres.">Effect of polymer chemistry and fabrication method on protein release and stability from polyanhydride microspheres.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 91, 938-947 (2009).</li><li>Torres, M. P., Determan, A. S., Anderson, G. L., Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphiphilic+polyanhydrides+for+protein+stabilization+and+release.">Amphiphilic polyanhydrides for protein stabilization and release.</a> Biomaterials. 28, 108-116 (2007).</li><li>Ulery, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+a+Protective+Single-Dose+Intranasal+Nanoparticle-Based+Vaccine+Platform+for+Respiratory+Infectious+Diseases.">Design of a Protective Single-Dose Intranasal Nanoparticle-Based Vaccine Platform for Respiratory Infectious Diseases.</a> PLoS ONE. 6, e17642 (2011).</li><li>Petersen, L. K., Xue, L., Wannemuehler, M. J., Rajan, K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+simultaneous+effect+of+polymer+chemistry+and+device+geometry+on+the+in+vitro+activation+of+murine+dendritic+cells.">The simultaneous effect of polymer chemistry and device geometry on the in vitro activation of murine dendritic cells.</a> Biomaterials. 30, 5131-5142 (2009).</li><li>Petersen, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+innate+immune+responses+in+a+pathogen-mimicking+manner+by+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticle+adjuvants.">Activation of innate immune responses in a pathogen-mimicking manner by amphiphilic polyanhydride nanoparticle adjuvants.</a> Biomaterials. 32, 6815-6822 (2011).</li><li>Torres, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyanhydride+microparticles+enhance+dendritic+cell+antigen+presentation+and+activation.">Polyanhydride microparticles enhance dendritic cell antigen presentation and activation.</a> Acta. Biomater. 7, 2857-2864 (2011).</li><li>Kirby, A. C., Coles, M. C., Kaye, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+transport+pathogens+to+lung+draining+lymph+nodes.">Alveolar macrophages transport pathogens to lung draining lymph nodes.</a> J. Immunol. 183, 1983-1989 (2009).</li><li>Barletta, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+compartments+in+the+mouse+lung:+Distinguishing+between+marginated,+interstitial,+and+alveolar+cells+in+response+to+injury.">Leukocyte compartments in the mouse lung: Distinguishing between marginated, interstitial, and alveolar cells in response to injury.</a> J. Immunol. Methods. , (2011).</li><li>Rubins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages:+wielding+the+double-edged+sword+of+inflammation.">Alveolar macrophages: wielding the double-edged sword of inflammation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 167, 103-104 (2003).</li><li>Sun, K., Gan, Y., Metzger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Murine+Genetic+Predisposition+to+Pneumococcal+Infection+Reveals+a+Critical+Role+of+Alveolar+Macrophages+in+Maintaining+the+Sterility+of+the+Lower+Respiratory+Tract.">Analysis of Murine Genetic Predisposition to Pneumococcal Infection Reveals a Critical Role of Alveolar Macrophages in Maintaining the Sterility of the Lower Respiratory Tract.</a> Infect. Immun. 79, 1842-1847 (2011).</li><li>Morimoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+Macrophages+that+Phagocytose+Apoptotic+Neutrophils+Produce+Hepatocyte+Growth+Factor+during+Bacterial+Pneumonia+in+Mice.">Alveolar Macrophages that Phagocytose Apoptotic Neutrophils Produce Hepatocyte Growth Factor during Bacterial Pneumonia in Mice.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 24, 608-615 (2001).</li><li>Gordon, S., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+and+macrophage+heterogeneity.">Monocyte and macrophage heterogeneity.</a> Nat. Rev. Immunol. 5, 953-964 (2005).</li><li>Ulery, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres.">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li><li>Petersen, L. K., Sackett, C. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+protein+stability+in+polyanhydride+nanoparticles.">High-throughput analysis of protein stability in polyanhydride nanoparticles.</a> Acta Biomater. 6, 3873-3881 (2010).</li><li>Irvin, C. G., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+lung+function+in+the+mouse:+the+challenge+of+size.">Measuring the lung function in the mouse: the challenge of size.</a> Respir. Res. 4, 4 (2003).</li></ol>

Polyanhydride платформы наночастиц вакцины показали эффективность при интраназально в одной дозе 5 схем. Измерение активации фагоцитарной житель популяции клеток в легких, индуцированных этой платформы доставки вакцины позволяет оценить его потенциальные возможности, в конечном сче...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> CAM СМИ </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> CellGro </td><td> 15-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> 50 мМ 2-меркаптоэтанол </td><td> Сигма </td><td> M3148-25МЛ </td><td></td></tr><tr><td> Пенициллина / стрептомицина 10 000 мкг / мл </td><td> CellGro </td><td> 30-002-ДИ </td><td></td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки </td><td> Атланты биологические </td><td> S11150 </td><td></td></tr><tr><td> FACS буфера </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Хлористый натрий </td><td> Fisher Scientific </td><td> S671-500 </td><td></td></tr><tr><td> Фосфат натрия </td><td> Fisher Scientific </td><td> MK7868500 </td><td></td></tr><tr><td> Хлористый калий </td><td> Fisher Scientific </td><td> P217500 </td><td></td></tr><tr><td> Фосфат калия </td><td> Fisher Scientific </td><td> P288-200 </td><td></td></tr><tr><td> BSA (бычий сывороточный альбумин) </td><td> Сигма </td><td> A7888 </td><td></td></tr><tr><td> Азида натрия </td><td> Сигма </td><td> S2002 </td><td></td></tr><tr><td> Антитела </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Крысы IgG </td><td> Сигма </td><td> I4341 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-жа CD16/32 </td><td> eBioscience </td><td> 16-0161 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-жа MHC II гаплотип IA / IE, клон M5/114.15.2, сопряженных с флуоресцеин изотиоцианат (FITC) </td><td> eBioscience </td><td> 11-5321 </td><td></td></tr><tr><td> Анти-CD86 мыши, клон GL-1, сопряженного с аллофикоцианин (APC) Cy7 </td><td> Biolegend </td><td> 105030 </td><td></td></tr><tr><td> Анти-CD40 мыши, клон 1C10, сопряженных с APC </td><td> eBioscience </td><td> 17-0401 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-CD209 мыши, клон 5H10, сопряженных с биотином </td><td> eBioscience </td><td> 13-2091 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-мышь CD11b, клон M1/70, сопряженных с Alexa Fluor 700 </td><td> eBioscience </td><td> 56-0112 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-мышь F4/80, клон BM8, сопряженных с фикоэритрин (PE) Cy7 </td><td> eBioscience </td><td> 25-4801 </td><td></td></tr><tr><td> PE-Техас красный сопряженных стрептавидином </td><td> BD Biosciences </td><td> 551487 </td><td></td></tr><tr><td> Другие материалы и реагенты </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Fisher Scientific </td><td> A405-20 </td><td> Используется как 70% (объем / объем) </td></tr><tr><td> Сжатого CO 2 </td><td> Linweld </td><td> 16000060 </td><td></td></tr><tr><td> 1 мл шприцев </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> Суверенный 3 ½ &quot;отец Том Catcatheter </td><td> Кендалл </td><td> 703021 </td><td></td></tr><tr><td> Механизм кабинета </td><td> NUAIRE </td><td> Серии 22 </td><td></td></tr><tr><td> Вскрытие Ножницы </td><td> Рыбак </td><td> 138082 </td><td></td></tr><tr><td> Щипцы </td><td> Roboz </td><td> RS-8254 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, 1X без кальция и магния </td><td> CellGro </td><td> 21-040-СМ </td><td></td></tr><tr><td> 15 мл пробирки с завинчивающейся крышкой </td><td> VWR International </td><td> 21008-216 </td><td></td></tr><tr><td> Шесть и тканевой культуры обработанных плит </td><td> Costar </td><td> 3516 </td><td></td></tr><tr><td> Пластиковые трубы стойки </td><td> Nalgene </td><td> 5970 </td><td></td></tr><tr><td> Сотовые Скребок 24 см </td><td> ТЭС </td><td> 99002 </td><td></td></tr><tr><td> 5 мл полистирола с круглым дном трубы </td><td> Сокол </td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> Внесите помощи XL </td><td> Драммонд </td><td> 4-000-105 </td><td></td></tr><tr><td> 10, 5 и 2 мл Пипетки </td><td> Рыбак </td><td> 13-675 </td><td></td></tr><tr><td> 200 и 10 мкл micropipettors </td><td> Gilson Pipetman </td><td> F123601 </td><td></td></tr><tr><td> 200 и 10 мкл наконечники </td><td> Рыбак </td><td> 02-707 </td><td></td></tr><tr><td> BD стабилизацииФиксирующий </td><td> BD Biosciences </td><td> 338036 </td><td></td></tr><tr><td> ISOTON II Разбавитель </td><td> Beckman Coulter- </td><td> 8546719 </td><td></td></tr><tr><td> Зап-Оглобин II Литические реагентов </td><td> Beckman Coulter- </td><td> 7546138 </td><td></td></tr><tr><td> Coulter Counter Флаконы полистирола </td><td> Beckman Coulter- </td><td> 14310-684 </td><td></td></tr><tr><td> Пробирки </td><td> BD Biosciences </td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> Оборудование </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Рефрижераторные центрифуги </td><td> LabNet </td><td> 50075040 </td><td></td></tr><tr><td> Увлажненном инкубаторе CO 2 </td><td> Nuaire </td><td> Модель Autoflow 8500 </td><td></td></tr><tr><td> FACSCanto Проточный цитометр </td><td> BD Biosciences </td><td> 338960 </td><td></td></tr><tr><td> Счетчик частиц Coulter Z1 </td><td> Beckman Coulter- </td><td> WS-Z1DUALPC </td><td></td></tr><tr><td> Sonicator жидких Оборудование для переработки с микроострийных </td><td> Misonix </td><td> Модель № S-4000 </td><td></td></tr></tbody></table>

harvesting murine alveolar macrophages and evaluating cellular activation induced by polyanhydride nanoparticles

Биоразлагаемые наночастицы появились как универсальная платформа для разработки и внедрения новых интраназальной вакцины против дыхательных инфекционных заболеваний. В частности, polyanhydride наночастиц состоит из алифатических себациновой кислота (SA), ароматических 1,6-бис (р-carboxyphenoxy) гексана (CPH), или амфифильных 1,8-бис (р-carboxyphenoxy) -3,6-dioxaoctane (CPTEG) представлены уникальные оптом и кинетики эрозии поверхности 1,2 и может быть использована для медленно отпустить функциональной биомолекулы (например, белковых антигенов, иммуноглобулинов и др.) в естественных условиях 3,4,5. Эти наночастицы обладают также внутренней активности адъювантной, что делает их отличным выбором для платформы вакцинации 6,7,8. Для выяснения механизмов, регулирующих активации врожденного иммунитета после вакцинации интраназально слизистой оболочки, необходимо оценить молекулярные и клеточные реакции антиген робижаясь клеток (БТР) отвечает за разработку иммунных реакций. Дендритные клетки являются основными БТР обнаружены при проведении дыхательных путей, а альвеолярные макрофаги (AMɸ) преобладают в легочной паренхимы 9,10,11. AMɸ очень эффективны в очистке легких патогенных микроорганизмов и клеточных обломков 12,13. Кроме того, этот тип клеток играет важную роль в транспортной микробных антигенов дренаж лимфатических узлов, что является важным первым шагом в начале адаптивного иммунного ответа 9. AMɸ также выражают повышенный уровень врожденных распознавания образов и мусорщик рецепторов, выделяют провоспалительных медиаторов, и премьер-наивные Т-клетки 12,14. Относительно чистой населения AMɸ (например, более 80%) могут быть легко получены с помощью легких промывание для изучения в лабораторных условиях. Резидент AMɸ собраны из иммунокомпетентных животные обеспечивают представитель фенотип макрофагов, которые будут encounteг частиц основе вакцины в естественных условиях. Здесь мы опишем протоколов, используемых для сбора и культуры AMɸ от мышей и исследовать фенотип активации макрофагов после лечения polyanhydride наночастиц в пробирке.

Watch this Scientific Journal Video about Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles at JoVE.com

Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

Здесь мы опишем протоколов для уборки мышиные альвеолярные макрофаги, которые проживают врожденные иммунные клетки в легких, а также изучение их активации в ответ на совместное культуры polyanhydride наночастиц.

Сбор мышей альвеолярных макрофагов и оценка активации клеток индуцированные Polyanhydride наночастиц

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

Анализируя сотовой Интернализация наночастиц и бактерий нескольких спектральных изображений проточной цитометрии

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

Высокая пропускная способность синтеза углеводов и Функционализация Polyanhydride наночастиц

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Оценка Полимерные доставки генов наночастиц наночастиц Анализ отслеживания и высокой пропускной проточной цитометрии

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

PLGA Nanoparticles Formed by Single- or Double-emulsion with Vitamin E-TPGS

ПМГК Наночастицы, образованные одним или двумя-эмульсии с витамином E-TPGS

Poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) is a biocompatible member of the aliphatic polyester family of biodegradable polymers. PLGA has long been a popular ...

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

Использование Cell-субстрата сопротивление и живых изображений сотовый измерить в реальном времени изменения в клеточной адгезии и Де адгезии, индуцированной Matrix модификации

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii

Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii

Микробиологически Индуцированные кальцит Осадки опосредованная по<em&gt; Sporosarcina pasteurii</em

The particular bacterium under investigation here (S. pasteurii) is unique in its ability, under the right conditions, to induce the hydrolysis of urea ...

Identification of Metal Oxide Nanoparticles in Histological Samples by Enhanced Darkfield Microscopy and Hyperspectral Mapping

Идентификация Metal Oxide наночастиц в гистологических образцов Enhanced Темнопольный микроскопии и Гиперспектрального карт

Nanomaterials are increasingly prevalent throughout industry, manufacturing, and biomedical research. The need for tools and techniques that aid in the ...

Production of Metal Nanoparticles by Pulsed Laser-ablation in Liquids: A Tool for Studying the Antibacterial Properties of Nanoparticles

Получение металлических наночастиц импульсной лазерной абляцией в жидкостях: инструмент для изучения антибактериальных свойств наночастиц

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

Поверхности функционализации наночастиц вирус гепатита Е, используя методы химической спряжение

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

Репрессии транскрипции гена, перенаправив клеточными с химической эпигеномные модификаторы

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...