Name: analyzing cellular internalization of nanoparticles and bacteria by multi-spectral imaging flow cytometry
Uploaded: 2012-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر جائزة ONR-موري (NN00014-06-1-1176) والولايات المتحدة للبحوث الطبية للقوات المسلحة والعتاد القيادة (أرقام المنح W81XWH-09-1-0386 وW81XWH-10-1 0806-) للمالية دعم.

1. RAW الثقافة خلية 264.7 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد الخام 264.7 الخلايا من قوارير بها عندما تصل confluency عن طريق كشط لهم بلطف مع مكشطة الخلية. العد وطبق وضعها في طبق خلية ثقافة 24-جيدة في كثافة من 5 خلايا س 5 10 / جيدا في 0.5 مل كاملة Dulbecco ومتوسطة النس?...

<ol>
	<li>Ulery, B. D., Kumar, D., Ramer-Tait, A. E., Metzger, D. W., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+a+protective+single-dose+intranasal+nanoparticle-based+vaccine+platform+for+respiratory+infectious+diseases.">Design of a protective single-dose intranasal nanoparticle-based vaccine platform for respiratory infectious diseases.</a> PLoS One. 6, e17642 (2011).</li><li>Kasturi, S. P., Skountzou, I., Albrecht, R. A., Koutsonanos, D., Hua, T., Nakaya, H. I., Ravindran, R., Stewart, S., Alam, M., Kwissa, M., Villinger, F., Murthy, N., Steel, J., Jacob, J., Hogan, R. J., Garc&#237;a-Sastre, A., Compans, R., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+the+magnitude+and+persistence+of+antibody+responses+with+innate+immunity.">Programming the magnitude and persistence of antibody responses with innate immunity.</a> Nature. 470, 543-547 (2011).</li><li>Rice-Ficht, A. C., Arenas-Gamboa, A. M., Kahl-McDonagh, M. M., Ficht, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymeric+particles+in+vaccine+delivery.">Polymeric particles in vaccine delivery.</a> Curr. Opin. Microbiol. 13, 106-112 (2010).</li><li>Jain, J. P., Chitkara, D., Kumar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyanhydrides+as+localized+drug+delivery+carrier:+an+update.">Polyanhydrides as localized drug delivery carrier: an update.</a> Expert. Opin. Drug. Deliv. 5, 889-907 (2008).</li><li>Pfeifer, B. A., Burdick, J. A., Little, S. R., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ester-anhydride):poly(beta-amino+ester)+micro-+and+nanospheres:+DNA+encapsulation+and+cellular+transfection.">Poly(ester-anhydride):poly(beta-amino ester) micro- and nanospheres: DNA encapsulation and cellular transfection.</a> Int. J. Pharm. 304, 210-219 (2005).</li><li>Ahmed, F., Friend, S., George, T. C., Barteneva, N., Lieberman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numbers+matter:+quantitative+and+dynamic+analysis+of+the+formation+of+an+immunological+synapse+using+imaging+flow+cytometry.">Numbers matter: quantitative and dynamic analysis of the formation of an immunological synapse using imaging flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 347, 79-86 (2009).</li><li>Hampton, M. B., Winterbourn, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+quantifying+phagocytosis+and+bacterial+killing+by+human+neutrophils.">Methods for quantifying phagocytosis and bacterial killing by human neutrophils.</a> J. Immunol. Methods. 232, 15-22 (1999).</li><li>Rieger, A. M., Hall, B. E., Barreda, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+activation+differentially+modulates+particle+binding,+phagocytosis+and+downstream+antimicrobial+mechanisms.">Macrophage activation differentially modulates particle binding, phagocytosis and downstream antimicrobial mechanisms.</a> Dev. Comp. Immunol. 34, 1144-1159 (2010).</li><li>Murphy, K. C., Campellone, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lambda+Red-mediated+recombinogenic+engineering+of+enterohemorrhagic+and+enteropathogenic+E.+coli.">Lambda Red-mediated recombinogenic engineering of enterohemorrhagic and enteropathogenic E. coli.</a> BMC. Mol. Biol. 4, 11 (2003).</li><li>Karsi, A., Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+host+range+fluorescence+and+bioluminescence+expression+vectors+for+Gram-negative+bacteria.">Broad host range fluorescence and bioluminescence expression vectors for Gram-negative bacteria.</a> Plasmid. 57, 286-295 (2007).</li><li>Ulery, B. D., Phanse, Y., Sinha, A., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B., Bellaire, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres.">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li><li>Doherty, G. J., McMahon, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+endocytosis.">Mechanisms of endocytosis.</a> Annu. Rev. Biochem. 78, 857-902 (2009).</li><li>Vercauteren, D., Vandenbroucke, R. E., Jones, A. T., Rejman, J., Demeester, J., De Smedt, S. C., Sanders, N. N., Braeckmans, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+inhibitors+to+study+endocytic+pathways+of+gene+carriers:+optimization+and+pitfalls.">The use of inhibitors to study endocytic pathways of gene carriers: optimization and pitfalls.</a> Mol. Ther. 18, 561-569 (2010).</li><li>Di Marzio, L., Marianecci, C., Cinque, B., Nazzarri, M., Cimini, A. M., Cristiano, L., Cifone, M. G., Alhaique, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-sensitive+non-phospholipid+vesicle+and+macrophage-like+cells:+binding,+uptake+and+endocytotic+pathway.">pH-sensitive non-phospholipid vesicle and macrophage-like cells: binding, uptake and endocytotic pathway.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1778, 2749-2756 (2008).</li><li>Torres, M. P., Vogel, B. M., Narasimhan, B., Mallapragada, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+novel+polyanhydrides+with+tailored+erosion+mechanisms.">Synthesis and characterization of novel polyanhydrides with tailored erosion mechanisms.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 76, 102-110 (2006).</li></ol>

وقد أظهرت الدراسات التي يمكن أن تستخدم جزيئات قابلة للتحلل على أساس بولي حامض اللبنيك، شارك في الجليكوليك ((PLGA) أو polyanhydrides لتقديم المستضدات مغلفة أو المخدرات إلى الخلايا المستهدفة. استيعاب هذه الجسيمات متناهية الصغر من الخلايا البلعمية من المهم بالنسبة لفعاليتها، م...

<table border="1">
	 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RAW 264.7 cell line</td>
 <td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
 <td>TIB-71</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
 <td>Cellgro</td>
 <td>10-013-CV</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fetal bovine serum</td>
 <td>Atlanta Biologicals</td>
 <td>S 11150</td>
 <td>Premium Grade</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glutamax</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>35050-061</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HEPES</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15630-080</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>24-well plate</td>
 <td>TPP</td>
 <td>92024</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cell culture Flasks</td>
 <td>TPP</td>
 <td>90151</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cell scraper</td>
 <td>TPP</td>
 <td>99002</td>
 <td>24 cm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Salmonella entericaserovar Typhimurium</td>
 <td>ATCC</td>
 <td>14028</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BTX ECM630 Electro Cell Manipulator</td>
 <td>BTX Harvard Apparatus</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MOPS</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>BP308</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
 <td>Cellgro</td>
 <td>21-040-CV</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ultrasonic liquid processor</td>
 <td>Misonix</td>
 <td>S-4000</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytochalasin-D</td>
 <td>Sigma-Aldrich,</td>
 <td>C8273</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Formaldehyde</td>
 <td>Polysciences</td>
 <td>04018</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Wash buffer</td>
 <td>2% heat inactivated FBS, 0.1% sodium azide in PBS.</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Perm/wash buffer</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>554714</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clear-view snap cap microtubes</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>T4816</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alexa Fluor phalloidin 660</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>A22285</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ImageStreamX</td>
 <td>Amnis Corporation</td>
 <td>100200</td>
 <td>Options: 658nm laser, autosampler</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium azide</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>S 227I-500</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

analyzing cellular internalization of nanoparticles and bacteria by multi-spectral imaging flow cytometry

ظهرت نظم الجسيمات النانوية وأدوات قيمة في مجال تقديم اللقاحات من خلال قدرتها على تحقيق كفاءة البضائع، بما في ذلك البروتينات، إلى الخلايا مستضد تقديم 1-5. تدخيل النانوية (NP) بواسطة الخلايا مستضد تقديم هو خطوة حاسمة في توليد استجابة فعالة المناعي للمستضد مغلفة. لتحديد كيف يمكن للتغييرات في صياغة جسيمات متناهية الصغر وظيفة الأثر، وسعينا لتطوير إنتاجية عالية، بروتوكول تجريبي الكمية التي كانت متوافقة مع الكشف عن الجسيمات النانوية المنضوية فضلا عن البكتيريا. حتى الآن، وكانت اثنين من التقنيات مستقلة، المجهري والتدفق الخلوي، والأساليب المستخدمة في دراسة البلعمة النانوية. طبيعة إنتاجية عالية من التدفق الخلوي يولد بيانات إحصائية قوية. ولكن نظرا لدقة منخفضة، فإنه فشل لتحديد بدقة المنضوية مقابل النانوية متجهة الخلية. المجهري يولد صورا مع القرار المكانية العالية؛ حowever، وهو مضيعة للوقت وينطوي على أحجام عينة صغيرة 6-8. متعددة الأطياف التدفق الخلوي التصوير (MIFC) هي التكنولوجيا الجديدة التي تتضمن جوانب من كلا المجهري والتدفق الخلوي الذي ينفذ متعددة الألوان الطيفية مجال التصوير مضان ومشرق في نفس الوقت من خلال مجموعة أساسية الصفحي. هذه القدرة يقدم تحليلا دقيقا لشدة إشارة الفلورسنت والعلاقات المكانية بين مختلف الهياكل والميزات الخلوية بسرعة عالية. هنا، نحن تصف طريقة استخدام MIFC لتوصيف السكان الخلية التي قد استوعبت النانوية polyanhydride أو السالمونيلا التيفية الفأرية الملهبة للضرب مصلي. وصفنا أيضا إعداد تعليق جسيمات متناهية الصغر، ووضع العلامات الخلية، واقتناء على نظام X ImageStream وتحليل البيانات باستخدام تطبيق الأفكار. علينا أن نبرهن أيضا تطبيق تقنية التي يمكن استخدامها للتمييز بين ع تدخيلathways للجسيمات الدقيقة والبكتيريا باستخدام مثبط حركة الخلايا-D كما المانع من الأكتين بوساطة البلعمة.

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry at JoVE.com

Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

في هذه المقالة، نحن وصف طريقة استخدام متعددة الأطياف التدفق الخلوي التصوير لقياس استيعاب النانوية polyanhydride أو البكتيريا بواسطة الخلايا 264.7 الخام.

تحليل التطبع الخلوي من الجزيئات الدقيقة والبكتيريا التي متعددة الأطياف التصوير التدفق الخلوي

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

الخلوي تنشيط حصاد الضامة السنخية الفئران وتقييم المستحث بواسطة النانوية Polyanhydride

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

الفيروسية النانوية ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير ورم

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

تقييم توصيل الجينات البوليمرية الجسيمات النانوية من تحليل تتبع جسيمات متناهية الصغر وعالية الإنتاجية قياس التدفق الخلوي

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Wide-field Fluorescent Microscopy and Fluorescent Imaging Flow Cytometry on a Cell-phone

واسعة المجال المجهري نيون نيون قياس التدفق الخلوي والتصوير على الهاتف الخلوي

Fluorescent microscopy and flow cytometry are widely used tools in biomedical research and clinical diagnosis. However these devices are in general ...

Localization and Relative Quantification of Carbon Nanotubes in Cells with Multispectral Imaging Flow Cytometry

توطين والكمي النسبية من أنابيب الكربون النانوية في الخلايا مع متعددة الأطياف التصوير التدفق الخلوي

Carbon-based nanomaterials, like carbon nanotubes (CNTs), belong to this type of nanoparticles which are very difficult to discriminate from carbon-rich ...

Sensitive Detection of Proteopathic Seeding Activity with FRET Flow Cytometry

كشف حساسية Proteopathic البذر آخر مع الحنق التدفق الخلوي

Increasing evidence supports transcellular propagation of toxic protein aggregates, or proteopathic seeds, as a mechanism for the initiation and ...

Microwave-driven Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles for Fast Detection of Atherosclerosis

توليف يحركها الميكروويف من أكسيد الحديد النانوية لكشف سريع من تصلب الشرايين

A fast and reproducible microwave-driven protocol has been developed for the synthesis of neridronate-functionalized nanoparticles. Starting from the ...

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells (RGCs) by Flow Cytometry

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells RGCs by Flow Cytometry

عزل الخلايا العقدة الشبكية الفئران الأولية (رغس) عن طريق التدفق الخلوي

Neurodegenerative diseases often have a devastating impact on those affected. Retinal ganglion cell (RGC) loss is implicated in an array of diseases, ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

الروغان السطحية من جسيمات نانوية فيروس التهاب الكبد الوبائي ه استخدام أساليب تصريف المواد الكيميائية

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

Ovarian Cancer Detection Using Photoacoustic Flow Cytometry

الكشف عن سرطان المبيض باستخدام الضوئية تدفق الصوتية الخلوية

Many studies suggest that the enumeration of circulating tumor cells (CTCs) may show promise as a prognostic tool for ovarian cancer. Current strategies ...