Name: analyzing cellular internalization of nanoparticles and bacteria by multi-spectral imaging flow cytometry
Uploaded: 2012-06-08T13:00:00
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लेखकों के लिए वित्तीय ONR - मूरी (NN00014-06-1-1176) पुरस्कार और अमेरिकी सेना चिकित्सा अनुसंधान और materiel कमान (अनुदान नंबर W81XWH-09-1-०३८६ और W81XWH-10-1-0806) शुक्रिया अदा करना चाहूँगा समर्थन.

1. रॉ 264.7 सेल संस्कृति <ol><li> हार्वेस्ट उनके बोतल से रॉ 264.7 कोशिकाओं जब वे उन्हें एक सेल खुरचनी के साथ धीरे scraping द्वारा confluency तक पहुँचने. 10% गर्मी - निष्क्रिय भ्रूण गोजातीय (FBS) सीरम, 2 मिमी Glutamax,, और 5 x 10 5 कोशिकाओं की ए...

<ol>
	<li>Ulery, B. D., Kumar, D., Ramer-Tait, A. E., Metzger, D. W., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+a+protective+single-dose+intranasal+nanoparticle-based+vaccine+platform+for+respiratory+infectious+diseases.">Design of a protective single-dose intranasal nanoparticle-based vaccine platform for respiratory infectious diseases.</a> PLoS One. 6, e17642 (2011).</li><li>Kasturi, S. P., Skountzou, I., Albrecht, R. A., Koutsonanos, D., Hua, T., Nakaya, H. I., Ravindran, R., Stewart, S., Alam, M., Kwissa, M., Villinger, F., Murthy, N., Steel, J., Jacob, J., Hogan, R. J., Garc&#237;a-Sastre, A., Compans, R., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+the+magnitude+and+persistence+of+antibody+responses+with+innate+immunity.">Programming the magnitude and persistence of antibody responses with innate immunity.</a> Nature. 470, 543-547 (2011).</li><li>Rice-Ficht, A. C., Arenas-Gamboa, A. M., Kahl-McDonagh, M. M., Ficht, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymeric+particles+in+vaccine+delivery.">Polymeric particles in vaccine delivery.</a> Curr. Opin. Microbiol. 13, 106-112 (2010).</li><li>Jain, J. P., Chitkara, D., Kumar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyanhydrides+as+localized+drug+delivery+carrier:+an+update.">Polyanhydrides as localized drug delivery carrier: an update.</a> Expert. Opin. Drug. Deliv. 5, 889-907 (2008).</li><li>Pfeifer, B. A., Burdick, J. A., Little, S. R., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ester-anhydride):poly(beta-amino+ester)+micro-+and+nanospheres:+DNA+encapsulation+and+cellular+transfection.">Poly(ester-anhydride):poly(beta-amino ester) micro- and nanospheres: DNA encapsulation and cellular transfection.</a> Int. J. Pharm. 304, 210-219 (2005).</li><li>Ahmed, F., Friend, S., George, T. C., Barteneva, N., Lieberman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numbers+matter:+quantitative+and+dynamic+analysis+of+the+formation+of+an+immunological+synapse+using+imaging+flow+cytometry.">Numbers matter: quantitative and dynamic analysis of the formation of an immunological synapse using imaging flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 347, 79-86 (2009).</li><li>Hampton, M. B., Winterbourn, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+quantifying+phagocytosis+and+bacterial+killing+by+human+neutrophils.">Methods for quantifying phagocytosis and bacterial killing by human neutrophils.</a> J. Immunol. Methods. 232, 15-22 (1999).</li><li>Rieger, A. M., Hall, B. E., Barreda, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+activation+differentially+modulates+particle+binding,+phagocytosis+and+downstream+antimicrobial+mechanisms.">Macrophage activation differentially modulates particle binding, phagocytosis and downstream antimicrobial mechanisms.</a> Dev. Comp. Immunol. 34, 1144-1159 (2010).</li><li>Murphy, K. C., Campellone, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lambda+Red-mediated+recombinogenic+engineering+of+enterohemorrhagic+and+enteropathogenic+E.+coli.">Lambda Red-mediated recombinogenic engineering of enterohemorrhagic and enteropathogenic E. coli.</a> BMC. Mol. Biol. 4, 11 (2003).</li><li>Karsi, A., Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+host+range+fluorescence+and+bioluminescence+expression+vectors+for+Gram-negative+bacteria.">Broad host range fluorescence and bioluminescence expression vectors for Gram-negative bacteria.</a> Plasmid. 57, 286-295 (2007).</li><li>Ulery, B. D., Phanse, Y., Sinha, A., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B., Bellaire, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres.">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li><li>Doherty, G. J., McMahon, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+endocytosis.">Mechanisms of endocytosis.</a> Annu. Rev. Biochem. 78, 857-902 (2009).</li><li>Vercauteren, D., Vandenbroucke, R. E., Jones, A. T., Rejman, J., Demeester, J., De Smedt, S. C., Sanders, N. N., Braeckmans, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+inhibitors+to+study+endocytic+pathways+of+gene+carriers:+optimization+and+pitfalls.">The use of inhibitors to study endocytic pathways of gene carriers: optimization and pitfalls.</a> Mol. Ther. 18, 561-569 (2010).</li><li>Di Marzio, L., Marianecci, C., Cinque, B., Nazzarri, M., Cimini, A. M., Cristiano, L., Cifone, M. G., Alhaique, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-sensitive+non-phospholipid+vesicle+and+macrophage-like+cells:+binding,+uptake+and+endocytotic+pathway.">pH-sensitive non-phospholipid vesicle and macrophage-like cells: binding, uptake and endocytotic pathway.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1778, 2749-2756 (2008).</li><li>Torres, M. P., Vogel, B. M., Narasimhan, B., Mallapragada, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+novel+polyanhydrides+with+tailored+erosion+mechanisms.">Synthesis and characterization of novel polyanhydrides with tailored erosion mechanisms.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 76, 102-110 (2006).</li></ol>

अध्ययनों से पता चला है कि biodegradable नैनोकणों पाली (लैक्टिक - सह - glycolic (PLGA) एसिड या polyanhydrides के आधार पर लक्ष्य कोशिकाओं को समझाया प्रतिजनों या दवाओं को वितरित किया जा सकता है इन नैनोकणों phagocytic कोशिकाओं द्वारा तेज उनक?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> रॉ 264.7 सेल लाइन </td><td> अमेरिकी प्रकार संस्कृति संग्रह (ATCC) </td><td> TIB - 71 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) </td><td> Cellgro </td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> भ्रूण गोजातीय सीरम </td><td> अटलांटा बायोलॉजिकल </td><td> 11,150 एस </td><td> प्रीमियम ग्रेड </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Gibco </td><td> 35050-061 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Gibco </td><td> 15630-080 </td><td></td></tr><tr><td> 24 अच्छी तरह से थाली</td><td> TPP </td><td> 92,024 </td><td></td></tr><tr><td> सेल संस्कृति बोतल </td><td> TPP </td><td> 90,151 </td><td></td></tr><tr><td> सेल खुरचनी </td><td> TPP </td><td> 99,002 </td><td> 24 सेमी </td></tr><tr><td> साल्मोनेला enterica serovar ताकि, </td><td> ATCC </td><td> 14,028 </td><td></td></tr><tr><td> BTX ECM630 इलेक्ट्रो सेल मैनिप्युलेटर </td><td> BTX हार्वर्ड उपकरण </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MOPS </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP308 </td><td></td></tr><tr><td> फास्फेट खारा (पीबीएस) बफर </td><td> Cellgro </td><td> 21-040-CV </td><td></td></tr><tr><td> अल्ट्रासोनिक तरल प्रोसेसर </td><td> एमआईएसonix </td><td> S-4000 </td><td></td></tr><tr><td> Cytochalasin-D </td><td> सिग्मा Aldrich, </td><td> C8273 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldehyde </td><td> Polysciences </td><td> 04,018 </td><td></td></tr><tr><td> बफर धो </td><td> 2% गर्मी निष्क्रिय FBS, पीबीएस में 0.1% सोडियम azide. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> पेर्म / धो बफर </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td><td> 554,714 </td><td></td></tr><tr><td> तस्वीर टोपी microtubes साफ देखने </td><td> सिग्मा </td><td> T4816 </td><td></td></tr><tr><td> एलेक्सा Fluor phalloidin 660 </td><td> Invitrogen </td><td> A22285 </td><td></td></tr><tr><td> ImageStream एक्स </td><td> Amnis कॉर्पोराtion </td><td> 100,200 </td><td> विकल्प: 658nm लेजर, autosampler </td></tr><tr><td> सोडियम azide </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 227I-500 </td><td></td></tr></tbody></table>

analyzing cellular internalization of nanoparticles and bacteria by multi-spectral imaging flow cytometry

Nanoparticulate सिस्टम वैक्सीन वितरण में मूल्यवान उपकरण के रूप में उभरा है प्रतिजन पेश 1-5 कोशिकाओं उनके कुशलतापूर्वक प्रोटीन सहित माल देने की क्षमता के माध्यम से,. नैनोकणों के प्रतिजन कोशिकाओं द्वारा internalization (एन पी) एक प्रभावी समझाया प्रतिजन के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पैदा करने में एक महत्वपूर्ण कदम है. Nanoparticle निर्माण प्रभाव समारोह में कैसे परिवर्तन का निर्धारण करने के लिए, हम एक उच्च throughput, मात्रात्मक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल है कि के रूप में अच्छी तरह से भली भाँति नैनोकणों बैक्टीरिया का पता लगाने के साथ संगत था विकसित करने की मांग की. तिथि करने के लिए, दो स्वतंत्र तकनीक, माइक्रोस्कोपी और प्रवाह cytometry, नैनोकणों के phagocytosis अध्ययन तरीकों का इस्तेमाल किया गया है. प्रवाह cytometry के उच्च throughput प्रकृति मजबूत सांख्यिकीय डेटा उत्पन्न करता है. हालांकि, कम संकल्प के कारण, यह करने के लिए सही सेल बाध्य नैनोकणों बनाम भाँति यों विफल रहता है. माइक्रोस्कोपी उच्च स्थानिक संकल्प के साथ छवियों को उत्पन्न करता है, जowever, यह समय लगता है और छोटा सा नमूना आकार 6-8 शामिल है. बहु - वर्णक्रमीय इमेजिंग प्रवाह cytometry (MIFC) एक नई तकनीक है कि दोनों माइक्रोस्कोपी और प्रवाह cytometry है कि एक लामिना कोर के माध्यम से बहु रंग वर्णक्रमीय प्रतिदीप्ति और चमकीले क्षेत्र इमेजिंग के साथ प्रदर्शन के पहलुओं को शामिल किया है. यह फ्लोरोसेंट संकेत तीव्रता और विभिन्न संरचनाओं और उच्च गति में सेलुलर सुविधाओं के बीच स्थानिक रिश्तों की एक सटीक विश्लेषण की क्षमता प्रदान करता है. इस के साथ साथ, हम एक MIFC उपयोग करने के लिए सेल आबादियों कि polyanhydride नैनोकणों या साल्मोनेला enterica serovar ताकि के भाँति विशेषताएँ विधि का वर्णन करता है. हम भी nanoparticle के निलंबन, सेल लेबलिंग, एक ImageStream एक्स सिस्टम पर अधिग्रहण और डेटा का विश्लेषण और विचारों का आवेदन का उपयोग करने की तैयारी का वर्णन. हम भी internalization के पी अंतर करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है एक तकनीक के आवेदन का प्रदर्शननैनोकणों और बैक्टीरिया के लिए actin की मध्यस्थता phagocytosis की एक अवरोध करनेवाला के रूप में cytochalasin डी का उपयोग करके athways.

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Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

इस अनुच्छेद में, हम एक बहु - वर्णक्रमीय इमेजिंग प्रवाह cytometry का उपयोग करने के लिए रॉ 264.7 कोशिकाओं द्वारा polyanhydride नैनोकणों या बैक्टीरिया के internalization यों विधि का वर्णन.

मल्टी वर्णक्रमीय इमेजिंग फ्लो द्वारा नैनोकणों और जीवाणु के सेलुलर internalization का विश्लेषण

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

Murine वायुकोशीय मैक्रोफेज कटाई और मूल्यांकन सेलुलर Polyanhydride नैनोकणों से प्रेरित सक्रियकरण

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

के लिए वायरल नैनोकणों<em&gt; Vivo में</em&gt; ट्यूमर इमेजिंग

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Polymeric जीन डिलीवरी के मूल्यांकन nanoparticle ट्रैकिंग विश्लेषण और उच्च throughput प्रवाह cytometry द्वारा नैनोकणों

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Wide-field Fluorescent Microscopy and Fluorescent Imaging Flow Cytometry on a Cell-phone

व्यापक क्षेत्र फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी और एक सेल फोन पर फ्लोरोसेंट इमेजिंग फ्लो

Fluorescent microscopy and flow cytometry are widely used tools in biomedical research and clinical diagnosis. However these devices are in general ...

Localization and Relative Quantification of Carbon Nanotubes in Cells with Multispectral Imaging Flow Cytometry

Carbon-based nanomaterials, like carbon nanotubes (CNTs), belong to this type of nanoparticles which are very difficult to discriminate from carbon-rich ...

Sensitive Detection of Proteopathic Seeding Activity with FRET Flow Cytometry

झल्लाहट फ्लो के साथ Proteopathic सीडिंग गतिविधि के संवेदनशील पता लगाने

Increasing evidence supports transcellular propagation of toxic protein aggregates, or proteopathic seeds, as a mechanism for the initiation and ...

Microwave-driven Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles for Fast Detection of Atherosclerosis

Atherosclerosis की तेजी से जांच के लिए आयरन ऑक्साइड नैनोकणों के माइक्रोवेव संचालित संश्लेषण

A fast and reproducible microwave-driven protocol has been developed for the synthesis of neridronate-functionalized nanoparticles. Starting from the ...

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells (RGCs) by Flow Cytometry

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells RGCs by Flow Cytometry

फ्लो साइटोमेट्री द्वारा प्राथमिक मुरीन रेटिनल गंगलायन कोशिकाओं (आरजीसी) का अलगाव

Neurodegenerative diseases often have a devastating impact on those affected. Retinal ganglion cell (RGC) loss is implicated in an array of diseases, ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

रासायनिक विकार विधियों के प्रयोग से हेपेटाइटिस ई वायरस नैनोकणों की सतह Functionalization

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

Ovarian Cancer Detection Using Photoacoustic Flow Cytometry

फोटोध्वनिक फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके ओवेरियन कैंसर डिटेक्शन

Many studies suggest that the enumeration of circulating tumor cells (CTCs) may show promise as a prognostic tool for ovarian cancer. Current strategies ...