Name: spectral karyotyping to study chromosome abnormalities in humans and mice with polycystic kidney disease
Uploaded: 2012-02-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease at JoVE.com

والكتاب أود أن أشكر برايان Muntean، لو شاو، تاكاهاشي ماكي ويمزج بلير للحصول على المساعدة التقنية. وأيد هذا العمل من قبل جوائز من المعاهد الوطنية للصحة (DK080640) وجامعة توليدو بالحركة وProMedica بحوث جائزة تحفيز للدكتور SURYA Nauli.

1. خلية المعالجة وإعداد الطورية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتزرع هذه الخلايا في تعديل Dulbecco للمتوسط ​​النسر (DMEM) التي تحتوي على 10-15٪ الجنين مصل بقري (FBS) و 1٪ البنسلين / الستربتومايسين على 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 الحاضنة، حتى تصل إلى 70-80٪ confluency. </...

<ol>
	<li>Caspersson, T., Farber, S., Foley, G. E., Kudynowski, J., Modest, E. J., Simonsson, E., Wagh, U., Zech, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+differentiation+along+metaphase+chromosomes.">Chemical differentiation along metaphase chromosomes.</a> Experimental Cell Research. 49, 219-222 (1968).</li><li>Seabright, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+banding+technique+for+human+chromosomes.">A rapid banding technique for human chromosomes.</a> Lancet. 2, 971-972 (1971).</li><li>Padilla-Nash, H. M., Barenboim-Stapleton, L., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+karyotyping+analysis+of+human+and+mouse+chromosomes.">Spectral karyotyping analysis of human and mouse chromosomes.</a> Nature Protocols. 1, 3129-3142 (2006).</li><li>Schrock, E., Zschieschang, P., O'Brien, P., Helmrich, A., Hardt, T., Matthaei, A., Stout-Weider, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+karyotyping+of+human,+mouse,+rat+and+ape+chromosomes--applications+for+genetic+diagnostics+and+research.">Spectral karyotyping of human, mouse, rat and ape chromosomes--applications for genetic diagnostics and research.</a> Cytogenetic and Genome Research. 114, 199-221 (2006).</li><li>Padilla-Nash, H. M., Heselmeyer-Haddad, K., Wangsa, D., Zhang, H., Ghadimi, B. M., Macville, M., Augustus, M., Schrock, E., Hilgenfeld, E., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jumping+translocations+are+common+in+solid+tumor+cell+lines+and+result+in+recurrent+fusions+of+whole+chromosome+arms.">Jumping translocations are common in solid tumor cell lines and result in recurrent fusions of whole chromosome arms.</a> Genes, Chromosomes &#38; Cancer. 30, 349-363 (2001).</li><li>Veldman, T., Vignon, C., Schrock, E., Rowley, J. D., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hidden+chromosome+abnormalities+in+haematological+malignancies+detected+by+multicolour+spectral+karyotyping.">Hidden chromosome abnormalities in haematological malignancies detected by multicolour spectral karyotyping.</a> Nature Genetics. 15, 406-410 (1997).</li><li>Karpf, A. R., Matsui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+disruption+of+cytosine+DNA+methyltransferase+enzymes+induces+chromosomal+instability+in+human+cancer+cells.">Genetic disruption of cytosine DNA methyltransferase enzymes induces chromosomal instability in human cancer cells.</a> Cancer Research. 65, 8635-8639 (2005).</li><li>Matsui, S., Faitar, S. L., Rossi, M. R., Cowell, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+spectral+karyotyping+to+the+analysis+of+the+human+chromosome+complement+of+interspecies+somatic+cell+hybrids.">Application of spectral karyotyping to the analysis of the human chromosome complement of interspecies somatic cell hybrids.</a> Cancer Genetics and Cytogenetics. 142, 30-35 (2003).</li><li>Nestor, A. L., Hollopeter, S. L., Matsui, S. I., Allison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+genetic+complementation+controlling+the+chromosomal+abnormalities+and+loss+of+heterozygosity+formation+in+cancer.">A model for genetic complementation controlling the chromosomal abnormalities and loss of heterozygosity formation in cancer.</a> Cytogenetic and Genome Research. 116, 235-247 (2007).</li><li>Ried, T., Liyanage, M., du Manoir, S., Heselmeyer, K., Auer, K., Macville, M., Schrock, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cytogenetics+revisited:+comparative+genomic+hybridization+and+spectral+karyotyping.">Tumor cytogenetics revisited: comparative genomic hybridization and spectral karyotyping.</a> Journal of Molecular Medicine (Berlin, Germany). 75, 801-814 (1997).</li><li>AbouAlaiwi, W. A., Takahashi, M., Mell, B. R., Jones, T. J., Ratnam, S., Kolb, R. J., Nauli, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+polycystin-2+is+a+mechanosensitive+calcium+channel+involved+in+nitric+oxide+signaling+cascades.">Ciliary polycystin-2 is a mechanosensitive calcium channel involved in nitric oxide signaling cascades.</a> Circulation Research. 104, 860-869 (2009).</li><li>Nauli, S. M., Alenghat, F. J., Luo, Y., Williams, E., Vassilev, P., Li, X., Elia, A. E., Lu, W., Brown, E. M., Quinn, S. J., Ingber, D. E., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystins+1+and+2+mediate+mechanosensation+in+the+primary+cilium+of+kidney+cells.">Polycystins 1 and 2 mediate mechanosensation in the primary cilium of kidney cells.</a> Nature Genetics. 33, 129-137 (2003).</li><li>Nauli, S. M., Kawanabe, Y., Kaminski, J. J., Pearce, W. J., Ingber, D. E., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cilia+are+fluid+shear+sensors+that+regulate+calcium+signaling+and+nitric+oxide+production+through+polycystin-1.">Endothelial cilia are fluid shear sensors that regulate calcium signaling and nitric oxide production through polycystin-1.</a> Circulation. 117, 1161-1171 (2008).</li><li>AbouAlaiwi, W. A., Ratnam, S., Booth, R. L., Shah, J. V., Nauli, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+from+humans+and+mice+with+polycystic+kidney+disease+are+characterized+by+polyploidy+and+chromosome+segregation+defects+through+survivin+down-regulation.">Endothelial cells from humans and mice with polycystic kidney disease are characterized by polyploidy and chromosome segregation defects through survivin down-regulation.</a> Human Molecular Genetics. 20, 354-367 (2011).</li><li>Padilla-Nash, H. M., Nash, W. G., Padilla, G. M., Roberson, K. M., Robertson, C. N., Macville, M., Schrock, E., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cytogenetic+analysis+of+the+bladder+carcinoma+cell+line+BK-10+by+spectral+karyotyping.">Molecular cytogenetic analysis of the bladder carcinoma cell line BK-10 by spectral karyotyping.</a> Genes, Chromosomes &#38; Cancer. 25, 53-59 (1999).</li></ol>

Karyotyping الطيفية (السماء) هو تقنية علم الوراثة الخلوية المستخدمة في دراسة التراكيب الجينية والكروموسومات. هذه التقنية يستفيد من تحقيقات اللوحة كروموسوم، ويتم الحصول على الكشف عن هذه التحقيقات من خلال تداخل سانياك. عملية SKY كاملة تستغرق عادة حوالي أسبوع واحد، وأنها تنط...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro Mediatech المؤتمر الوطني العراقي. </td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> الجنين مصل بقري (FBS) </td><td> Hyclone </td><td> SH30088-03 </td><td></td></tr><tr><td> Penecillin / الستربتوميسين </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Colcemid </td><td> روش تشخيص </td><td> 10 295 892 001 </td><td> 10 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> حمض الهيدروكلوريك </td><td> فيشر العلمية </td><td> A144-500 </td><td></td></tr><tr><td> بوكل </td><td> فيشر العلمية </td><td> S77375-1 </td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SH30256-01 </td><td></td></tr> &lt;TR&gt; <td> SKY الطلاء تحقيق مجموعة (الإنسان) </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td> SKY000028 </td><td></td></tr><tr><td> SKY الطلاء تحقيق عدة (الماوس) </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td> SKY000030 </td><td></td></tr><tr><td> تتركز عدة الضد كشف </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td> SKY000033 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SH30236.01 </td><td></td></tr><tr><td> الميثانول </td><td> فيشر العلمية </td><td> A433P-4 </td><td></td></tr><tr><td> حمض الخليك </td><td> فيشر العلمية </td><td> A38-212 </td><td></td></tr><tr><td> ريبونوكلياز A </td><td> روش تشخيص </td><td> 10 109 169 001 </td><td></td></tr><tr><td> البيبسين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P6887-5G </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> Fluka </td><td> 63069-500ML </td><td></td></tr><tr><td> 37٪ فورمالديهايد </td><td> مالينكرودت بيكر </td><td> 2106-02 </td><td></td></tr><tr><td> 20X SSC </td><td> Promega </td><td> V4261 </td><td></td></tr><tr><td> Formamide </td><td> Fluka </td><td> 47671 </td><td> إعداد قبل استخدامها </td></tr><tr><td> توين-20 </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP337-500 </td><td></td></tr><tr><td> شرائح ميكروسكوب </td><td> فيشر العلمية </td><td> 12-549 </td><td></td></tr><tr><td> مجهر الغطاء الزجاجي 24x60mm </td><td> VWR فيستا الرؤية </td><td> 16004-312 </td><td></td></tr><tr><td> المطاط الاسمنت </td><td> إلمر في (متجر بيع بالتجزئة المحلية) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> تهجين / humidifiedchamber / صينية </td><td> Simport </td><td> M920-2 </td><td> وضع المناشف الورقية الرطبة في الجزء السفلي </td></tr><tr><td> الحراريةcycler </td><td> إيبندورف </td><td> Epgradient S </td><td></td></tr><tr><td> تهتز منصة / المداري شاكر </td><td> Bellco التكنولوجيا الحيوية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> يهز حمام / المياه </td><td> الدقة العلمية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> دابي مرشح مكعب </td><td> صفاء التكنولوجيا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SKY مرشح مكعب </td><td> صفاء التكنولوجيا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SpectraCube </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مجهر مقلوب خلية ثقافة </td><td> نيكون </td><td> نيكون الكسوف TS100 </td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> أوليمبوس </td><td> IX70 </td><td> 60X النفط </td></tr></tbody></table>

spectral karyotyping to study chromosome abnormalities in humans and mice with polycystic kidney disease

الطريقة التقليدية لتحديد وتصنيف الكروموسومات الفردية يعتمد على نمط فريد من ربط كل كروموسوم في فصيلة محددة يجري تحليلها 1 و 2. هذا الأسلوب الكلاسيكي النطاقات، ولكن، لا يمكن الاعتماد عليها في تحديد التشوهات الكروموسومية معقدة مثل تلك التي ترتبط مع مرض السرطان. للتغلب على القيود المفروضة على تقنية النطاقات، هو عرض Karyotyping الطيفي (السماء) لتوفير معلومات موثوق بها كثيرا عن شذوذ صبغي. SKY هو مضان متعدد الألوان في الموقع التهجين (FISH) تقنية للكشف عن الصبغيات (الكروموسومات) الطورية مع مجهر طيفي 3 و 4. وقد ثبت السماء ليكون أداة قيمة لتحليل خلوي من مجموعة واسعة من الشذوذ الصبغي المرتبط مع عدد كبير من الأمراض الوراثية والأورام الخبيثة 5 و 6. SKY ينطوي على استخدام مجسات DNA fluorescently متعدد الألوان ذات العلامات أعد من oligonucle المنحطةotide الاشعال بواسطة PCR. وبالتالي، كل كروموسوم لها لون فريد من نوعه بعد الطيفية في الموقع التهجين مع تحقيقات، التي وصفت بشكل مختلف مع خليط من الأصباغ الفلورية (رودامين، تكساس الأحمر، Cy5، FITC وCy5.5). تحقيقات المستخدمة في السماء تتكون من ما يصل الى 55 كروموسوم تحقيقات محددة 7-10. إجراءات SKY ينطوي على عدة خطوات (الشكل 1). SKY يتطلب توافر الخلايا مع ارتفاع مؤشر الإنقسامية من الأنسجة الطبيعية أو مريضة أو الدم. وتنتشر في الصبغيات (الكروموسومات) من خلية واحدة من الخلايا الأولية إما طازجة أو عزل خط الخلية على شريحة زجاجية. يسمى هذا انتشار كروموسوم مع مجموعة مختلفة من الأصباغ الفلورية معينة لكل كروموسوم. الكشف عن التحقيق والحصول على الصور، ونظام التصوير الطيفي يتكون من تداخل سانياك وكاميرا CCD. وهذا يسمح قياس طيف الضوء المرئي المنبعث من العينة والحصول على صورة طيفية جيئة وذهاباالكروموسومات متر فردي. HiSKY، والبرمجيات المستخدمة لتحليل نتائج الصور التي تم التقاطها، ويوفر سهولة تحديد الشذوذ الصبغي. والنتيجة النهائية هي الطورية وصورة تصنيف النمط النووي، والذي كل زوج من الصبغيات (الكروموسومات) لها لون مميز (الشكل 2). وهذا يسمح سهولة تحديد هويات كروموسوم وtranslocations. لمزيد من المعلومات، يرجى زيارة موقع التصوير الطيفي التطبيقية ( <a href="http://www.spectral-imaging.com/" target="_blank">http://www.spectral-imaging.com/</a> ). وقد استخدم مؤخرا SKY لتحديد العيوب والتشوهات فصل كروموسوم كروموسوم في البشر والفئران مع مرض وراثي جسمي الكلى المتعدد الكيسات (ADPKD)، وهو مرض وراثي يتميز اختلال وظيفي في أهداب الأولية 11-13. باستخدام هذه التقنية، أثبتنا وجود فصل كروموسوم غير طبيعي وتشوهات صبغية في المرضى الذين يعانون ADPKD ونماذج الماوس 14. المزيد من التحليلات باستخدام SKY ليس فقط سمح لنا لتحديد عدد الكروموسومات والهوية، ولكن أيضا للكشف عن التشوهات الكروموسومية بدقة شديدة التعقيد مثل الحذف كروموسوم وtranslocations (الشكل 2).

Watch this Scientific Journal Video about Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease at JoVE.com

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Karyotyping الطيفية (السماء) هو تقنية علم الوراثة الخلوية المتقدمة لتحديد الانحرافات الجينية والكروموسومات. هذه التقنية يستفيد من تحقيقات اللوحة كروموسوم، والتي تسمح بتصنيف جميع الكروموسومات. ويمكن أيضا تحديد الانحرافات SKY كروموسوم معقدة وعيوب فصل في الفئران والبشر يعانون من أمراض مختلفة، بما في ذلك مرض الكلى المتعدد الكيسات.

الطيفية Karyotyping إلى دراسة حالة شذوذ الكروموسومات في البشر والفئران مع مرض الكلى المتعدد الكيسات

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

5/6th استئصال الكلية في تركيبة مع حمية عالية الملح والنيتريك أوكسيد تثبيط سينسيز للحث على مرض الكلى المزمن في الفئران لويس

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

تقييم وظيفة الأوعية الدموية في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

نموذج الزرد ممكن من مرض الكلى المتعدد الكيسات: ضربة قاضية لل<em&gt; wnt5a</em&gt; أسباب الخراجات في الكلى اسماك الزرد

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The ...

Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models

التكيف Videofluoroscopic طرق دراسة السنونو الإنسان لكشف وتوصيف عسر البلع في نماذج الفئران الأمراض

This study adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating ...

Using Adeno-associated Virus as a Tool to Study Retinal Barriers in Disease

باستخدام فيروس الغدة اسوشيتد كأداة لدراسة الحواجز الشبكية في مرض

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes ...

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

استخدام فائقة MRI الميداني في القوارض الصغيرة نماذج من مرض الكلى المتعدد الكيسات ل<em&gt; في فيفو</em&gt; Phenotyping والدواء المراقبة

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

نماذج الجراحية من الجزر المعدي مع الفئران

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

متماثل Bihemispheric تشريح الدماغ قطع لدراسة الصحية والمرضية شروط الدماغ في البشر

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

A Model to Simulate Clinically Relevant Hypoxia in Humans

نموذج لمحاكاة نقص الأكسجة ذات الصلة سريريا في البشر

In case of apnea, arterial partial pressure of oxygen (pO2) decreases, while partial pressure of carbon dioxide (pCO2) increases. To avoid damage to ...