Name: isolation and primary culture of rat hepatic cells
Uploaded: 2012-06-29T12:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells at JoVE.com

Os autores gostariam de agradecer ao Sr. Josh Basford e Dr. Xiao Li-min para assistência técnica. Este trabalho foi financiado em parte pelo NIH subvenções (DK70992 e DK92779 ao ML).

1. Preparação Todos os tampões são preparadas de fresco utilizando uma técnica estéril e esterilizado por filtração utilizando um filtro de Corning iM 0,22. <ol><li> Preparar Perfusion tamponar I, adicionando o seguinte para a Solução Salina Equilibrada de Hank (HBSS, sem Ca 2 + e Mg 2 +, ver Tabela 1): Mg 2 + (MgCl2) a 0,9 mM, EDTA a 0,5 mM, e tampão HEPES a 25 mM. </li><li> Preparar tampão de perfusão ...

<ol>
	<li>Berry, M. N., Friend, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-yield+preparation+of+isolated+rat+liver+parenchymal+cells:+a+biochemical+and+fine+structural+study.">High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study.</a> J. Cell Biol. 43, 506-520 (1969).</li><li>Seglen, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+isolated+rat+liver+cells.">Preparation of isolated rat liver cells.</a> Methods Cell Biol. 13, 29-83 (1976).</li><li>Saito, K., Kobayashi, K., Mizuno, Y., Fukuchi, Y., Furihata, T., Chiba, K., Schmidt, M., Schmitz, H. J., Baumgart, A., Guedon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+agonists+induce+constitutive+androstane+receptor+(CAR)+and+cytochrome+P450+2B+in+rat+primary+hepatocytes.">Peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) agonists induce constitutive androstane receptor (CAR) and cytochrome P450 2B in rat primary hepatocytes.</a> Drug Metab. Pharmacokinet. 25, 108-111 (2010).</li><li>Gomez-Lechon, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+in+primary+culture:+the+choice+to+investigate+drug+metabolism+in+man.">Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man.</a> Curr. Drug Metab. 5, 443-462 (2004).</li><li>Goncalves, L. A., Vigario, A. M., Penha-Goncalves, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+isolation+of+murine+hepatocytes+for+in+vitro+malaria+liver+stage+studies.">Improved isolation of murine hepatocytes for in vitro malaria liver stage studies.</a> Malar. J. 6, 169 (2007).</li><li>Bu, S. Y., Mashek, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+long-chain+acyl-CoA+synthetase+5+mediates+fatty+acid+channeling+between+anabolic+and+catabolic+pathways.">Hepatic long-chain acyl-CoA synthetase 5 mediates fatty acid channeling between anabolic and catabolic pathways.</a> J. Lipid Res. 51, 3270-3280 (2010).</li><li>Aiken, J., Cima, L., Schloo, B., Mooney, D., Johnson, L., Langer, R., Vacanti, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+in+rat+liver+perfusion+for+optimal+harvest+of+hepatocytes.">Studies in rat liver perfusion for optimal harvest of hepatocytes.</a> J. Pediatr. Surg. 25, 140-144 (1990).</li><li>Jauregui, H. O., McMillan, P. N., Hevey, K., Naik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+analysis+of+lectin+binding+to+adult+rat+hepatocyte+cell+surfaces.">A quantitative analysis of lectin binding to adult rat hepatocyte cell surfaces.</a> In Vitro Cell. 24, 401-412 (1988).</li><li>Klaunig, J. E., Goldblatt, P. J., Hinton, D. E., Lipsky, M. M., Trump, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liver+cell+culture.+II.+Primary+culture.">Mouse liver cell culture. II. Primary culture.</a> In Vitro. 17, 926-934 (1981).</li><li>Hay, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operator-induced+contamination+in+cell+culture+systems.">Operator-induced contamination in cell culture systems.</a> Dev. Biol. Stand. 75, 193-204 (1991).</li></ol>

Cultura primária de hepatócitos é um modelo in vitro amplamente utilizado para estudar vários aspectos da fisiologia do fígado e da patologia. Por exemplo, a cultura principal é usado para avaliar a expressão e função de enzimas metabolizadoras de drogas de citocromos P450, incluindo metabolismo de drogas, droga-droga e interações, os mecanismos de citotoxicidade e genotoxicidade 3-7. O protocolo descrevendo isolamento e cultura de células hepáticas de ratos é adaptado a partir...

isolation and primary culture of rat hepatic cells

Cultura primária de hepatócitos é uma ferramenta valiosa que tem sido amplamente utilizada na pesquisa básica da função hepática, doença de fisiopatologia, farmacologia e outros assuntos relacionados. O método baseado em duas etapas perfusão colagenase para o isolamento de hepatócitos intactas foi introduzido pela primeira vez por Berry e amigo em 1969 1 e, desde então, passou por muitas modificações. A técnica mais vulgarmente utilizado foi descrito por Seglenin 1976 2. Essencialmente, os hepatócitos são dissociados ratos adultos anestesiados por uma perfusão de colagenase não-recirculação através da veia portal. As células isoladas são então filtrada através de um filtro de tamanho de poro 100 uM de nylon de malha, e cultivadas em placas de. Após 4 horas de cultura, o meio é substituído com meio contendo soro ou isento de soro, por exemplo, HepatoZYME-SFM, por um tempo adicional para a cultura. Esses procedimentos exigem passos cirúrgicos e de cultura estéril, que pode ser melhor demonstrada por vídeo do que pelo texto. Here, nós documentamos os passos detalhados para estes procedimentos por vídeo e protocolo escrito, que permitem de forma consistente na geração de hepatócitos viáveis ​​em grandes números.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells at JoVE.com

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Hepatócitos primários proporcionar uma ferramenta valiosa para avaliar as funções bioquímicas, moleculares, e metabólicas em um sistema fisiologicamente relevante experimental. Nós descrevemos um protocolo confiável para rato em perfusão de fígado in situ, que sempre gera hepatócitos viáveis ​​até to1.0 × 10<sup&gt; 8</sup&gt; Células por preparação com viabilidade celular entre 88 ~ 96%.

Isolamento e cultura primária de células hepáticas de ratos

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Cultura primária de Miócitos Coração Adulto Rat

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Biologia

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolamento de células imunes de tumores primários

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolamento e Cultura do mouse primárias células pancreáticas acinares

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

Isolamento e cultura primária de células de camundongo aórtica endoteliais

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolamento e Cultura de Queratinócitos de Rato Primário de Pele de Rato Neonatal e Adulto

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

Cultura primária de células Adrenocortical rato e ensaios das funções reguladora

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...

Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs

Isolamento e cultura de células endoteliais aórticas primárias de suínos em miniatura

Xenotransplantation is a promising way to resolve the shortage of human organs for patients with end-stage organ failure, and the pig is considered as a ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

Isolamento, Transfecção e Cultura de Longo Prazo de Cardiomiócitos de Ratos Adultos e Ratos

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Isolation, Culture, and Genetic Engineering of Mammalian Primary Pigment Epithelial Cells for Non-Viral Gene Therapy

Isolamento, Cultura e Engenharia Genética de Células Epiteliais de Pigmento Primário mamífero para terapia genética não viral

Age-related macular degeneration (AMD) is the most frequent cause of blindness in patients &#62;60 years, affecting ~30 million people worldwide. AMD is a ...

Isolation of Primary Rat Hepatocytes with Multiparameter Perfusion Control

Isolamento de Hepatócitos Primários de Ratos com Controle de Perfusão Multiparâmetro

Primary hepatocytes are widely used in basic research on liver diseases and for toxicity testing in vitro. The two-step collagenase perfusion procedure ...